高原舒颗粒对小鼠抗疲劳作用的实验研究

王　云，管国倩，曹俊平，易理伟，刘　超，张旭东，李建银，杨永建

(兰州大学药学院，兰州　730000)



高原舒颗粒对小鼠抗疲劳作用的实验研究

王云，管国倩，曹俊平，易理伟，刘超，张旭东，李建银*，杨永建

(兰州大学药学院，兰州730000)

摘要：目的观察高原舒颗粒的抗疲劳作用。方法采用肝糖原、血清尿素、血乳酸测定实验和负荷游泳实验，灌胃给予小鼠不同剂量的高原舒颗粒，比较各组小鼠力竭性游泳时间、肝糖原、血清尿素及血乳酸浓度水平的变化。结果与蒸馏水组相比较，高剂量组力竭性游泳时间明显延长(P<0.01)，运动后肝糖原储备量增加(P<0.05)，血清尿素浓度下降(P<0.05)，运动20 min后血乳酸浓度降低(P<0.05)。与红景天阳性对照组相比，高剂量组在各组实验中均无明显差异(P>0.05)。结论高原舒颗粒对小鼠具有抗疲劳作用。

关键词：高原舒颗粒；抗疲劳；红景天胶囊

柳茶是以蔷薇科绣线菊亚科植物窄叶鲜卑花(Sibiraealaevigata(Linn.) Maxim.)的嫩枝和叶入药，是常见藏民用药，具有健脾胃的功效，用于清胃热、助消化，也可用于治疗关节炎和局部疖肿[1]。近些年的相关研究发现，其在脂类代谢、调节免疫功能、肝保护、抗肿瘤、抗氧化及抑菌、促消化、降糖、抗疲劳作用等方面具有广泛的药理作用[2-12]。在参考相关文献和本实验室研究的基础上，我们制备了高原舒复方颗粒，并以小鼠为对象，观察该复方颗粒缓解疲劳的效果，为进一步开发本药提供实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器UV-2550分光光度计(日本岛津公司生产)；F3单道移液器(美国赛默飞世尔科技公司生产)；XK80-A型漩涡混匀器(江苏新康医疗器械有限公司生产)；HH-2型恒温水浴锅(国华电器有限公司生产)；计时器、XSC恒温游泳箱(北京博创生物科技有限公司)。

1.2试药高原舒颗粒主要成分为柳茶、黄芪和当归提取物，辅料为糊精和甘露醇。柳茶采自甘肃省甘南藏族自治州合作市郊当州草原，海拔3 200 m，并经兰州大学药学院生药学研究所鉴定。黄芪和当归为甘肃省道地药材，购买于甘肃陇西县百草堂药业有限责任公司。红景天胶囊由洛阳红景天雪域制品有限公司生产，生产批号20140901，规格0.35 g·粒-1，用量为每次3粒，每天3次。肝糖原测试盒、血清尿素测试盒、血乳酸测试盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3动物健康清洁级昆明种小鼠240只，6周年龄，体质量18～22 g，雄性，兰州大学动物实验中心提供。动物生产许可证号：SCXK2009(甘)-0004。实验饲料，兰州大学动物实验中心提供。

2方法

2.1动物分组与给药方法实验前适应生长3 d，游泳测试后进入正式实验。将小鼠随机分为4组，每组60只，分别用于负荷游泳时间观察、肝糖原测定、血清尿素测定和血乳酸测定。每大组随机分为蒸馏水组，低、中、高剂量高原舒颗粒组和红景天胶囊阳性对照组，每组10 只。红景天阳性对照组，按照人与小鼠换算标准换算后每日灌胃成人等量红景天(0.647 g·kg-1·d-1)；高原舒颗粒中剂量组按照成人一天推荐服用中药量换算为小鼠的灌胃量(5.500 g·kg-1·d-1)，低剂量组为中剂量组剂量的一半(2.750 g·kg-1·d-1)，高剂量组为中剂量组剂量的2倍(11.000 g·kg-1·d-1)；蒸馏水组给予蒸馏水为10 mL·kg-1·d-1。用药30 d。

2.2负荷游泳实验实验前小鼠进行游泳训练3次，实验时在小鼠尾部系上10%体质量的铅丝，放入25 ℃恒温游泳箱中，保证小鼠游泳范围充足，避免相互碰撞。用秒表记录小鼠从游泳开始至死亡的时间为负荷游泳时间(完全沉没水后计数8 s)[13]。

2.3肝糖原测定实验末次给药后30 min后，将小鼠放入25 ℃的游泳箱中90 min，迅速处死，取肝脏约100 mg，采用肝糖原试剂盒进行肝糖原测定，操作按照试剂盒操作方法。

2.4血清尿素测定实验末次给药30 min后，30 ℃下，小鼠不负荷游泳90 min，然后拔眼球取血，放入加入肝素的离心管中，4 000 r·min-1离心10 min，取血清用尿素氮试剂盒测定尿素含量。

2.5血乳酸测定实验末次给药30 min后，从内眦静脉从取血50 μL，放入加有蛋白沉淀液的离心管中。不负荷置于30 ℃水中游泳10 min，注意观察小鼠游泳并保证小鼠时刻游动，分别在运动后0和20 min同法取血50 μL。以4 000 r·min-1离心10 min，制得乳酸上清液，使用全血LD试剂盒测定血乳酸含量并计算血乳酸曲线下面积，血乳酸曲线下面积=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0 min的血乳酸值+2×游泳后休息20 min的血乳酸值)。

3结果

3.1高原舒对小鼠体质量的影响各组之间体质量均无显著性差异(P>0.05)，见表1。

3.2高原舒颗粒对小鼠游泳时间的影响与蒸馏水组相比，随着给药浓度的增加，负荷游泳时间逐渐延长，高剂量组的游泳时间延长了38%(P<0.01)；阳性对照组延长了42%(P<0.01)。高剂量组与阳性对照组并无显著性差异(P>0.05)，见表1。

3.3高原舒颗粒对小鼠肝糖原储备量的影响与蒸馏水组相比，随着给药浓度的增加，肝糖原储备量逐渐增加，高剂量组的肝糖原储备量增加了26%(P<0.05)；阳性对照组增加了33%(P<0.05)。高剂量组与阳性对照组并无显著性差异(P>0.05)，见表1。

3.4高原舒颗粒对运动后小鼠血清尿素浓度的影响与蒸馏水组相比，随着给药浓度的增加，血清尿素浓度逐渐下降，高剂量组下降了20%(P<0.05)；阳性对照组下降了19%(P<0.05)。高剂量组与阳性对照组并无显著性差异(P>0.05)，见表1。

3.5高原舒颗粒对小鼠血乳酸浓度的影响与蒸馏水组相比，运动后20 min，高剂量组血乳酸浓度下降23%(P<0.05)，血乳酸曲线下面积减少14%(P<0.05)；阳性对照组血乳酸浓度下降30%(P<0.05)，血乳酸曲线下面积减少20%(P<0.05)。高剂量组和阳性对照组仍无显著差异(P>0.05)，说明高剂量组和阳性对照组均有利于血中乳酸的清除(P<0.05)，见表2。

表1高原舒颗粒对小鼠体质量、游泳时间、肝糖原储备量及血清尿素的影响

Tab.1 The effect of Gaoyuanshu Granules on body weight，the time of loaded swimming，the levels of glycogen storage and the blood urea nitrogen in mice

±s)

组别体质量/g游泳时间/min肝糖原储备量/mg·g-1血清尿素/mmol·L-1蒸馏水组36.10±0.005.62±0.8814.41±1.348.89±1.13低剂量组36.67±3.306.22±0.7114.89±1.218.10±0.83中剂量组36.78±5.897.18±0.7117.13±2.247.78±0.78高剂量组37.21±3.157.77±0.99**18.19±2.07*7.10±0.99*红景天组39.35±5.048.02±1.35△△19.18±1.73△△7.24±0.99△

注：高剂量组与蒸馏水组相比*P<0.05，**P<0.01；阳性对照组与蒸馏水组相比△P<0.05，△△P<0.01。

表2高原舒颗粒对小鼠运动后血乳酸浓度的影响

Tab.2 The effect of Gaoyuanshu Granules on the level of lactic acid

±s)

组别运动前乳酸/mmol·L-1运动后乳酸/mmol·L-10min休息20min血乳酸曲线下面积蒸馏水组4.69±1.618.17±0.866.25±0.81206.89±28.42低剂量组4.59±1.728.24±1.676.08±1.32212.80±46.29中剂量组4.45±1.437.67±1.235.56±1.63193.07±33.32高剂量组4.39±1.697.46±1.294.81±0.37*182.79±30.56*红景天组4.46±1.487.34±6.714.36±1.33△172.11±22.64△

注：高剂量组与蒸馏水组相比*P<0.05；阳性对照组与蒸馏水组相比△P<0.05。

4讨论

运动耐力是观察反映机体疲劳最直接的方法，通过负荷游泳可以观察小鼠的运动耐力。实验结果显示，负荷游泳时间明显延长。

糖是机体运动的能量来源，长时间运动，肌糖原消耗增加，为保持血糖平衡，肝糖原储备减少，如果肝糖原储备水平较对照组高，并具有显著差异，说明药物具有抗疲劳作用。剧烈运动时，肌肉缺氧，进行无氧代谢，产生大量乳酸，乳酸的浓度可以反映机体疲劳的产生和消除速度。血清尿素浓度可以反映体内蛋白质分解的情况，当机体长时间运动、不能通过糖和脂肪获取足够能量时，蛋白质分解会加强，血尿素氮的水平会明显增加。身体的运动耐力越差，产生的尿素氮就会越多。同时采用具有明确抗疲劳作用的红景天制剂作为阳性对照，更能客观地评价药效[14]。研究结果表明，高原舒颗粒高剂量组能明显延长小鼠游泳时长，提高肝糖原储备量，减少血中尿素氮和血乳酸的产生，与阳性对照组相比并无显著性差异，说明高原舒颗粒具有抗疲劳作用。

柳茶药理研究表明，其具有肝保护、免疫增强和助消化的作用，这可能与其发挥抗疲劳作用相关，具体有效成分及作用机制仍需要做深入地探究；黄芪能直接扩张冠脉血管，增加冠脉血流量，进而增强心肌收缩，增加心排出量[15]；当归有效成分为5-羟甲基-2-糠醛(5-HMF) ，相关研究表明其可以增强小鼠抗缺氧能力[16]。因此，本实验采用三者结合并制备一种方便应用的制剂。高原舒颗粒中的君药柳茶是以藏药鲜卑花的叶子入药，具有不破坏资源、来源广泛的特点。当归和黄芪为甘肃省道地药材，三者结合有利于中藏药的研发。对于该制剂在人体上的应用，仍需进一步研究。

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Anti-fatigue effects of Gaoyuanshu Granules in mice

WANG Yun，GUAN Guoqian，CAO Junping，YI Liwei，LIU Chao，ZHANG Xudong，LI Jianyin*，YANG Yongjian (Lanzhou University，College of Pharmacy，Lanzhou 730000，China)

Abstract:Objective To investigate the anti-fatigue effect of Gaoyuanshu Granules. Methods Mice were treated with different doses of Gaoyuanshu Granules. The loaded swimming time, liver glycogen，blood urea nitrogen and lactic acid in plasma were determined. The outcomes were compared among groups. Results As compared with the distilled water negative control group，the loaded swimming time and the reserves amount of liver glycogen increased after exercise in high dose group of Gaoyuanshu Granules(P<0.01 or P<0.05).In addition，the blood urea nitrogen decreased(P<0.05).Meanwhile，20 min after the movement，the lactic acid levels decreased(P<0.05).There was no obvious difference between the high dose of Gaoyuanshu Granules and the postive control group of Hongjingtian Capsules(P>0.05).Conclusion Gaoyuanshu Granules have anti-fatigue function.

Key words:Gaoyuanshu Granules；anti-fatigue；Hong Jingtian Capsules

收稿日期：(2015-05-12)

通信作者：*李建银，男，讲师

作者简介：王云，男，硕士研究生

基金项目：甘肃省自然科学 (编号：1208RJZA254)

中图分类号：R285.5

文献标志码：

文章编号：1004-2407(2016)01-0061-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.019