联用CD-CIK细胞和养肝解毒丸治疗丙型肝炎的效果研究

李 杨

（山东省泰安市中医医院肝病科 山东 泰安 271000）

丙型肝炎是丙型病毒性肝炎的简称，多由丙型肝炎病毒感染所致，其主要的传播途径是输血、针刺及吸毒，临床治疗的效果效差。在本次研究中，为了探讨分析联用CD-CIK细胞和养肝解毒丸治疗丙型肝炎的临床效果，笔者进行了以下研究：

1 资料与方法

1.1 临床资料

本文的研究对象是近年来我院收治的160例丙型肝炎患者，我们将其随机分为DC-CIK细胞组（40例）、养肝解毒丸组（40例）、DC-CIK细胞联合养肝解毒丸组（40例）及长效干扰素组（40例），这4组患者的临床表现及各项检查结果均符合中华医学会肝病学分会、中华医学会传染病与寄生虫病学分会在《丙型肝炎防治指南》中制定的关于丙型肝炎的临床诊断标准，并且这4组患者在年龄、性别、体重等一般资料方面的差异均不显著（P＞0.05），不具有统计学意义，具有可比性。

1.2 中医诊断及辨证标准

这160例患者的临床症状均符合中国中医药学会在《病毒性肝炎中医辨证标准》中制定的关于肝肾阴虚[1]的证候诊断标准，均伴有神疲乏力、口咽干燥、胁肋隐痛、腰膝酸软、腹胀、皮肤存在蛛丝纹缕、面色晦暗等症状，舌质红、少苔，脉弦细、弦缓、弦沉或弦涩。

1.3 方法

使用DC-CIK细胞为DC-CIK细胞组患者进行治疗，使用养肝解毒丸为养肝解毒丸组患者进行治疗，联用DCCIK细胞和养肝解毒丸为DC-CIK细胞联合养肝解毒丸组患者进行治疗，使用长效干扰素为长效干扰素组患者进行治疗，然后观察对比这4组患者的临床疗效，并将对比的结果及4组患者的临床资料进行回顾性的分析。DC-CIk细胞的制备方法及用法是：分离患者血液样本中的外周血单个核细胞（PBMC），在无菌及严格监控的条件下进行细胞诱导和培养，获得DC-CIK细胞，然后采用静脉滴注的方式将增殖数百倍的DC-CIK细胞分3次回输至患者的体内，每次滴注的间隔时间为1～2天。此后，每个月培养DCCIk细胞1次，分3次回输至患者的体内，连续治疗6个月为1个疗程。养肝解毒丸（由泰安市中医医院自制，鲁药制字为Z0920030155）的用法及用量是：口服，9g/次，3次/日，连续服用6个月为1个疗程。长效干扰素的用法及用量是：①使用180ug的聚乙二醇干扰素α-2a为患者进行皮下注射，每周注射1次，或使用1.5ug/kg体重的聚乙二醇干扰素α-2b为患者进行皮下注射，每周注射1次。②让患者每日口服1000mg的利巴韦林片，连续服用6个月为1个疗程。

1.4 观察指标

①临床疗效。②肝功能指标。③安全性。

1.5 临床疗效判定标准

肝肾阴虚症状、体征记分，症状体征内容以病例选择纳入标准为准，记分（参照中国中医药学会内科肝病专业委员会，病毒性肝炎中医辨证标准拟定）。西医标准时：①治愈：HCV抗体阴转，HCV-RNA＜103copy/ml，随访48周患者未复发。②显效：HCV抗体未阴转，HCV-RNA＜103copy/ml。③有效：HCV抗体未阴转，HCV-RNA下降至103copy/ml-106copy/ml。④无效：HCV抗体未阴转，HCV-RNA未下降或升高。

1.6 统计学方法

应用SPSS13.0 for windows统计学软件对本次研究所得数据进行统计学分析，正态分布计量资料采用均数±标准差（X±S）表示，采用t检验，非正态分布计数资料采用例数或百分率表示，采用X²检验，当P＜0.05时，视为差异显著，具有统计学意义。

2 结果

2.1 4组患者临床疗效的比较

DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者治疗的总有效率为82.5%，DC-CIk细胞组患者治疗的总有效率为75.0%，养肝解毒丸组患者治疗的总有效率为32.5%，长效干扰素组患者治疗的总有效率为40.0%。DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者的临床疗效明显优于其他三组患者，差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。详情见表1。

表1 4组患者临床疗效的比较

2.2 4组患者治疗前后各项肝功能指标的比较

在治疗前，4组患者各项肝功能指标之间的差异均不显著（P＞0.05），不具有统计学意义。经过一段时间的治疗，这4组患者的各项肝功能指标较治疗前均有明显的改善，且DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者各项肝功能指标的改善程度更为明显，差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。详情见表2。

表2 4组患者治疗前后各项肝功能指标的比较

2.3 安全性分析

DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者、DC-CIk细胞组患者及养肝解毒丸组患者的甲状腺功能、血糖水平均正常，而长效干扰素组患者中有1例患者出现了血糖升高的情况、有2例患者出现了甲状腺功能亢进的情况。

3 讨论

3.1 DC-CIK细胞对丙型肝炎的治疗机制

DC-CIK疗法是指将DC-CIK细胞（即DC细胞和CIK细胞）在人体外进行培养，然后回输给患者的一种治疗方法。严格地说，该方法最终的治疗效应细胞是经DC体外活化的CIK细胞。多项研究表明，DC细胞与CIK细胞具有协同作用，将二者共同孵育后，DC细胞表面的刺激分子的表达及抗原递呈能力均明显提高，而CIK细胞的增殖能力和体内外细胞毒活性也显著提高，因此，与单独的CIK细胞相比，DC-CIK细胞的治疗效果更佳。CIK细胞治疗属于自体免疫细胞治疗范畴，回输后无排斥反应；此外，经过体外培养的CIK细胞对病毒感染细胞或肿瘤细胞具有很强的细胞毒作用，还可以通过分泌大量的细胞因子，如IL-2、IL-6以及IFN-r等调节机体的免疫反应。早期CIK细胞主要应用于临床上各种肿瘤的治疗，包括肝癌、肺癌、淋巴瘤等[2-4]。近期研究表明CIK细胞对慢性乙型肝炎、慢性丙肝都具有良好的疗效[5-6]。据统计，目前全世界约有1.7亿人感染HCV。70%的HCV感染者会转为慢性感染，并在长期的慢性炎症作用下产生肝纤维化，最终形成肝硬化甚至肝癌[7]。这主要由于HCV作为一种RNA病毒，在复制过程中经常发生错误的“拼写检查”。与DNA病毒相比较，只有少数RNA病毒可以被完全无误地读取和复制。所以，HCV的变异速度远远大于HBV，这就使得HCV可以轻而易举地逃避免疫系统“追击”，并在与机体长期 －的相互作用中导致免疫系统的耗竭（exhausted）或者失能（anergy）。研究表明，HCV在感染早期可以迅速复制，产生的结构蛋白能够抑制宿主DC和NK细胞的活化，无法产生足够强度的天然免疫反应[8-10]，进而影响到适应性免疫的应答。另外，HCV的高变异性可以迅速地逃避机体产生的特异性免疫应答，使得机体针对病毒的免疫反应无法被充分调动[11-12]。所以寻找可以重新激活免疫系统的方法显得尤为重要。CIK细胞诱导培养方案可以提高培养体系中CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞的比例，增强其分泌IFN-r和脱颗粒（CD107a）的能力。CD3+CD8+以及CD3+CD56+细胞具有很强的抗病毒作用，这主要通过细胞裂解和非裂解两个途径。对于细胞裂解途径，效应细胞通过分泌各种颗粒酶，穿孔素直接杀伤、裂解靶细胞，从而破坏HCV感染、复制的场所；而在非裂解途径中，效应细胞分泌的IFN-r可以作用于被感染的肝细胞，通过一系 列细胞内信号途径，抑制HCV在肝细胞内的复制过程[13]。另外，CIK技术通过CD3+CD8+以及CD3+CD56+细胞分泌大量促炎因子，包括IFN-r、IL-6，还具有重新调动免疫学反应的作用。

3.2 养肝解毒丸的组方意义

养肝解毒丸以扶正、解毒、化瘀为配伍原则，所使用的药物主要有熟地、败酱草、山萸肉、山药、赤灵芝、丹皮、夏枯草、苡米、砂仁等，具有滋补肝肾、祛毒化瘀的功效，其中熟地、败酱草为君药，具有补肝肾、解毒邪的功效；山萸肉、山药、赤灵芝、夏枯草为臣药，具有助君药滋补肝肾、扶正祛毒的功效；丹皮、苡米为佐药，具有助君药清血中虚热、引药入血、滋补肝肾、活血化瘀的功效；砂仁为使药，具有免除滋补药的副作用（妨害消化、减低食欲）、引熟地归肾的功效，可谓一举两得。

本次研究结果显示，经过一段时间的治疗，这4组患者的各项肝功能指标较治疗前均有明显的改善，且DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者各项肝功能指标的改善程度更为明显，差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者的临床疗效明显优于其他三组患者，差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。DC-CIk细胞联合养肝解毒丸组患者、DC-CIk细胞组患者及养肝解毒丸组患者的甲状腺功能、血糖水平均正常，而长效干扰素组患者中有1例患者出现了血糖升高的情况、有2例患者出现了甲状腺功能亢进的情况。

综上所述，联用CD-CIK细胞和养肝解毒丸治疗丙型肝炎的临床效果显著，值得在临床上推广应用。

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