丹红注射液对兔急性心肌梗死的影响

郝光++沈启明++王馨+马丽红++王增武

[摘要]目的探讨丹红注射液对兔急性心肌梗死的影响。方法结扎日本大耳兔冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型，制模成功后随机分为模型组，丹红注射液低、中、高剂量组及果糖二磷酸钠组，另设假手术组。治疗两周，期间测量不同时间段心肌酶。两周后取心脏进行梗死面积测定。结果各组间心肌酶水平（谷草转氨酶、肌酸激酶同工酶及乳酸脱氢酶）及心肌梗死面积差异无统计学意义，但丹红中剂量组（2ml/kg）心肌酶水平及心肌梗死面积较模型组都有降低或缩小趋势。结论丹红注射液对兔心肌梗死可能有一定的保护作用，但是还需要实验进行证实。

[关键词]丹红注射液；急性心肌梗死；日本大耳兔

中图分类号：R544.2 文献标识码：A

文章编号：1009-816X（2015）05-0369-03

急性心肌梗死（acute myocardial infarCtion，AMI）是在冠状动脉粥样硬化基础上突然出现斑块破裂、血栓形成或血管痉挛而致血管性闭塞，相应血管所支配心肌出现持久而严重的急性缺血坏死。AMI在中医属于“胸痹”或“真心痛”范畴。丹红注射液是把中药丹参、红花按科学方法提取的复方制剂。有研究表明丹参主要成分丹参酮ⅡA具有抗动脉粥样硬化、缩小心肌梗死面积、抗氧化自由基、拮抗钙离子、减轻心肌肥厚、改善血管内皮功能等作用；红花的主要提取物红花苷、红花胺、红花黄素等，具有扩张血管增加冠状动脉血流量、抗氧化自由基作用、降低心肌酶水平减小梗死范围等作用。丹红注射液治疗冠心病具有较理想的疗效，其作用机理可能是多方面的，研究发现丹红注射液可明显改善微循环和血液粘滞度，阻止血栓形成和促进血栓溶解；还可以有效地抑制Adenosine diphos-phate（ADP）诱导的血小板凝聚、血小板TXA2合成和内皮素等缩血管物质的释放，促进纤维蛋白溶解酶的产生。迄今为止，国内有关丹红注射液治疗急性心肌梗死的动物研究非常有限，对作用机制进行研究相对更少。本研究拟通过建立兔急性心肌梗死模型，观察不同剂量丹红注射液对心肌梗死兔的影响，同时为今后动物研究提供一定的参考依据。

1.材料与方法

1.1.实验动物和仪器：实验用清洁级健康日本大耳白兔（阜外心血管病医院动物实验中心提供），共48只，雌雄不限，平均体重（2.4±0.4）千克。丹红注射液由步长集团提供，氯化硝基四氮唑蓝购自南京卓尔生化技术有限公司，天门冬氨酸氨基转氨（aspar-tateaminotransf erase，AST）、肌酸激酶同工酶（creatine ki-nase isoenzvme，CK-MB）、乳酸脱氢酶（laCtate dehydroge-nase，LDH）由阜外医院化验室进行检测，心肌切片由病理切片全景扫描系统LEICASCN400扫描并分析（中国科学院生物物理研究所）。

1.2.方法：

1.2.1.动物处理：兔固定于手术台上，前胸手术部位剪毛，常规碘酒、乙醇消毒，用氯胺酮全麻后，沿胸骨左缘2-4肋间切开皮肤。分离皮下组织暴露肋骨，以开胸器撑开，暴露心脏。剪开心包，用眼科小圆针带7号手术线在前降支近根部心肌内穿过，然后结扎。电生理记录仪上显示ST段抬高O.lmV为制模成功。假手术组只穿线不结扎。制模成功后关闭胸腔、缝合。术后给与耐乐品肋间神经封闭止痛，术后前3天给与青霉素常规抗感染治疗。之后14天按分组情况每天进行腹腔给药。

1.2.2.动物分组和给药：将兔子随机分成6组：假手术组，模型组，丹红注射液低、中、高剂量组，果糖二磷酸钠组。假手术组和模型组分别给予2ml/kg生理盐水腹腔注射，丹红注射液低、中、高剂量组分别按0.4mI/kg、2ml/kg、4ml/kg：给予丹红注射液腹腔注射，果糖阳性对照组给予2.8mg/kg糖注射液腹腔注射。每日给药1次，连续给14天。

1.2.3.标本处理：实验动物于术前和术后1d、2d、3d和14d经耳缘静脉采血1-2ml，3小时内送检，测定AST、CK-MB和LDH。术后2周处死动物，分离心脏并去除周围脂肪，0.9%氯化钠注射液冲洗后，垂直于心脏纵轴方向自心底向心尖将心脏均匀切成6份。即刻进行氯化三苯四氮唑Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTc）染色，福尔马林固定后进行石蜡包埋。制作切片后，采用病理切片全景扫描系统LEICASCN400扫描切片并测定心肌梗死面积。

1.3.统计学处理：使用SAS9.2软件包进行统计学分析，连续资料使用（x±s）表示，采用重复测量方差分析，方差分析及SNK-q检验进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1.不同组间AST检测值的比较：各项生化指标使用方差分析发现，同一时点各组间差异无统计学意义（P>0.05），见表1。但是从绝对值来看，丹红中剂量组和果糖组在第3天及第14天时，AST和CK-MB的水平较其它组相对较低。

2.4.不同组间心肌梗死面积的比较：病理标本采用最大梗死面积进行分析，各组间的差异无统计学意义。丹红中剂量组的心肌梗死面积最小，果糖组次之。

3.讨论

血清AST、LDH、CK及CK-MB等心肌酶主要来源于心、肝、肾、肺及骨骼肌等，血清酶活性增高可能是一种或多种组织或器官受损的结果。血清AST、CK-MB、CK和LDH活性水平可反映心肌梗死程度，而且相对于CK而言，CK-MB更敏感。故本研究选取AST、CK-MB、 LDH为观察指标。

AST广泛存在于人体各组织，心肌组织含量丰富，由于AST不存在组织特异性，且敏感性不高，故单纯的AST升高不能诊断为AMI。乳酸脱氢酶是体内能量代谢过程中的一个重要的酶，此酶几乎存在于所有组织中。组织中的LDH的活力比血清中高得多，所以当少量组织坏死时，该酶即释放入血而使其在血液中的活性升高，即只有在细胞受损时才可能大量溢出，LDH水平增加可反映细胞膜的损伤。CK是心肌中重要的能量调节酶，是有M和B两个亚基组成的二聚体。CK-MB作为其中一种同工酶临床上用于较早期诊断AMI，估计梗死范围大小。本研究发现中剂量丹红组和果糖组的LDH和CK-MB水平第3天及第14时较其它组明显为低，差异无统计学意义，可能是由于样本量较少造成的。

动物及临床研究发现丹红注射液能显著降低心肌酶活性，明显缩小心肌梗死面积，对心肌梗死具有保护作用。李惠民对82例不稳定心绞痛患者的研究发现，在常规治疗下丹红注射液能明显提高不稳定心绞痛的疗效，并且有较小的不良反应。刘爱国等对117例AMI患者的研究发现，丹红注射液能改善AMI患者的心功能，抑制AMI后的心肌重构。目前丹红注射制剂已广泛应用于临床AMI的治疗，在常规治疗基础上，丹红注射液能改善患者缺血症状，具有较理想的疗效。

本实验结果显示，与模型组相比，尽管没有发现丹红注射液及果糖组心肌酶的降低及心肌梗死面积的减小具有统计学意义，但是结果总体上呈现随着剂量上升，梗死面积下降趋势，中度剂量丹红注射液组和果糖组的治疗效果最好，其组内的大耳兔心肌酶较其它组有降低的趋势，同样心肌梗死面积在这两组内减小也最为明显。以上结果说明适当剂量的丹红注射液对心肌梗死可能有改善作用，此外也证明果糖同样有与中等剂量丹红注射液相当的效果。所以统计学的没有差异一方面可能是由于样本量不足造成的，另一方面可能由于丹红实验剂量选择不合适导致的，所以今后类似研究建议以2ml/kg为基础选择更为合适的剂量，以期达到试验最佳的效果。另外本实验在不同时点心肌酶水平波动较大，甚至在14天的时候心肌酶的水平还是处于较高的水平，这可能和实验期间每天腹腔注射给药，或者在抽血过程中对兔子肌肉组织损伤有关。

综上所述，丹红注射液对心肌梗死可能具有一定的保护作用，且从绝对值来看，中度剂量的丹红注射液对心肌的保护作用可能较其它剂量及果糖组为好，但是以上结论还需要进一步细分丹红注射液实验剂量实验验证。endprint