乳腺癌表皮生长因子受体与Bcl-2的表达及其临床意义

作者单位：1.100069北京，首都医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系；2.130021长春，吉林大学中日联谊医院普外科

乳腺癌表皮生长因子受体与Bcl-2的表达及其临床意义

刘光旭1，任圣楠2，房学东2，何燕1

【摘要】目的探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)与B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)在乳腺癌中的表达状况及其临床意义。方法采用免疫组化(二步法)实验方法检测539例乳腺癌组织雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)以及EGFR、Bcl-2的表达。结果EGFR的表达以三阴性乳腺癌最高 (44.4%)；Bcl-2的表达以管腔型乳腺癌最高(71.7%)。在EGFR的表达上，三阴性乳腺癌与管腔型乳腺癌(χ2=9.02, P<0.05)、HER-2受体阳性组乳腺癌患者(χ2=5.78, P<0.05)相比表达率更高；在Bcl-2表达上，管腔型乳腺癌与HER-2受体阳性组乳腺癌(χ2=70.73, P<0.0001)、三阴性乳腺癌(χ2=71.76, P<0.0001)的患者相比表达率更高。两者的表达与其他病理特征的差异均无统计学意义。乳腺癌组织学分级越高EGFR的阳性表达率越高(χ2=11.38，P<0.05)，而Bcl-2的阳性表达率越低(χ2=6.92, P<0.05)。PR、Bcl-2与ER表达呈正相关，相关系数分别为0.712、0.599，差异有统计学意义(P<0.01)。同时，PR与Bcl-2间也呈正相关关系(r=0.599，P<0.01)。而ER、PR分别与HER-2、EGFR之间以及HER-2与Bcl-2之间都呈负相关，它们的相关系数依次为-0.366、-0.133、-0.453、-0.195和-0.392。结论EGFR与Bcl-2的表达在乳腺癌不同分子亚型间存在差异； EGFR以及Bcl-2的表达可以作为乳腺癌发生、发展的评价指标，有助于评估乳腺癌的生物学行为并指导临床治疗以及制定预后策略。

【关键词】EGFR; Bcl-2;乳腺癌;临床病理特征

通讯作者：何燕，E-mail：yanhe118@sina.com

作者简介：吴瑶，大专学历，主管护师，E-mail:wyao052791@163.com

【中国图书分类号】R730.231

Expression of EGFR and Bcl-2 in breast cancer and their relationship with clinicopathological features

LIU Guangxu1，REN Shengnan2，FANG Xuedong2，and HE Yan1. 1.Department of Epidemiology and Biostatistics, School of Public Health, Capital Medical University, Beijing 100069,China; 2.Department of General Surgery, China-Japan Union Hospital of Jilin University, Changchun 130021, China

Abstract【】ObjectiveTo study the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) and B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) in breast cancer subtype and their relationship with clinicopathological features and the expression of ER,PR and HER-2. MethodsImmunohistochemistry was performed to detect the expression of EGFR and Bcl-2 in 539 patients with breast cancer and its correlation with clinicopathological parameters was analyzed. ResultsThe expression rate of EGFR in three negative breast cancer group (χ2=9.78,P=0.008) and Bcl-2 in luminal breast cancer group (χ2=114.11, P<0.0001) were 44.4% and 71.7%, which were the highest in all groups. The expression of EGFR showed a statistically significant difference in histological grade (χ2=11.38,P=0.003), and the expression of Bcl-2 showed a statistically significant difference in histological grade (χ2=6.92, P=0.041) and pathological type (χ2=5.39,P=0.022). No significant difference was found between the expression of both and other clinicopathological features. The expression of PR and Bcl-2 was positively correlated with the expression of Bcl-2, and their correlation coefficients were 0.712(P<0.01) and 0.599(P<0.01), respectively, which was the same with the expression between PR and Bcl-2 (r=0.599，P<0.01). However, there was a negative correlation between ER，PR and HER-2, Bcl-2 respectively, and their correlation coefficient were -0.366,-0.133,-0.453,-0.392 successively. In addition, no correlation was found between EGFR and HER-2, Bcl-2 (P>0.05). ConclusionsThe expression of EGFR and Bcl-2 is different in breast cancer subtypes. Joint detection of the expression of EGFR and Bcl-2 could be used as index of breast cancer occurrence, development, and help to guide clinical treatment and prognosis of strategy.

【Key words】EGFR; Bcl-2; breast cancer; clinicopathological features

乳腺癌是女性最为常见的肿瘤，并且是引起女性死亡的头号杀手[1]。2003-2007年，中国女性乳腺癌的发病率和死亡率分别为41.64/10万和9.63/10万，在女性肿瘤中分别排名第1位和第6位[2]，给女性身心健康带来重大负担。近年来，乳腺癌的分子亚型及肿瘤标志物已经有了很多研究。其中，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)与B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)的表达与肿瘤的生物学行为及预后有密切关系[3-5]，但在乳腺癌中探讨两者与临床病理特征及其他蛋白关系的研究较少。本研究旨在分析肿瘤标志物EGFR及Bcl-2在不同分子亚型间的表达，探讨两者与乳腺癌临床病理特征与雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)表达的关系，并将其作为乳腺癌发生、发展的指标，以期用它评估乳腺癌的生物学行为、指导临床治疗和制定治疗策略。

1　对象与方法

1.1对象收集吉林大学附属中日联谊医院2009-01至2011-12经病理诊断为乳腺癌539例，均具有完整的临床资料和石蜡包埋的组织标本。年龄31～79岁，中位年龄53岁。肿块位置：左侧280例，右侧259例。肿瘤大小：< 2 cm 244例，2～5 cm 212例，> 5 cm 83例。有淋巴结转移者309例，无淋巴结转移者230例。TNM分期：Ⅰ期217例，Ⅱ期229例，Ⅲ/Ⅳ期93例。病理类型：浸润导管癌446例，其他93例(包括浸润性小叶癌38例；导管内癌23例，髓样癌19例，乳头状癌13例)。组织学分级：Ⅰ级89例，Ⅱ级340例，Ⅲ级110例。患者术前均未接受过放疗、化疗等治疗。

1.2试剂EGFR、Bcl-2、 ER、PR及HER-2等抗原的单克隆抗体均购自Dako公司。

1.3方法所有切片均在同一条件下同步同时进行免疫组化SP法染色[3]。

1.4结果判定参照文献[4-6] 标准对ER、PR、HER-2、EGFR与Bcl-2蛋白免疫组化阳性结果进行判定。

1.5分子亚型定义参照Cheang等[7]的报道，根据ER、PR和HER-2的表达情况，将乳腺癌分为三组亚型：管腔型组(ER+和/或PR+, HER2-)，HER-2受体阳性组(ER-,PR-且HER2+)，三阴性组(ER-,PR-且HER2-)。

1.6统计学处理采用 SPSS19.0软件进行统计分析，计数资料用χ2检验，相关性检验用Spearman相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1EGFR与Bcl-2在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达情况EGFR与Bcl-2在管腔型组、HER-2受体阳性组与三阴性组不同分子亚型中的表达情况见表1。三组间EGFR与Bcl-2的阳性表达差异有统计学意义(χ2=9.78,P=0.008;χ2=114.11,P<0.0001)。其中，EGFR的表达以三阴性组最高(44.4%)；Bcl-2的表达以管腔型组最高(71.7%)。在EGFR的表达上，三阴性组与管腔型组(χ2=9.02,P<0.05)、HER-2受体阳性组(χ2=5.78,P<0.05)相比表达率更高；而管腔型组与HER-2受体阳性组间差异无统计学意义。在Bcl-2表达上，管腔型组与HER-2受体阳性组(χ2=70.73,P<0.0001)、三阴性组(χ2=71.76,P<0.0001)的患者相比表达率更高;而在HER-2受体阳性组与三阴性乳组间差异无统计学意义(表1)。

2.2EGFR与Bcl-2表达与临床病理特征的关系乳腺癌组织中EGFR与Bcl-2的表达率分别为30.6%，56.0%。乳腺癌组织学分级越高EGFR的阳性表达率越高，而Bcl-2的阳性表达率越低 (χ2=11.38,χ2=6.92),差异有统计学意义(P<0.05)。浸润性导管癌在Bcl-2表达上与其他类型的乳腺癌患者相比有更高的表达率 (χ2=5.39,P<0.05)。 EGFR与Bcl-2的表达在不同年龄组、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移方面差异无统计学意义。而且EGFR的表达在不同病理类型上也无统计学差异(表2)。

表1　三组乳腺癌患者表皮生长因子受体及Bcl-2表达情况　( n;%)

注：与三阴性组比较，①P<0.05；与管腔型组比较，②P<0.05

表2　表皮生长因子受体与Bcl-2表达及其与临床病理特征的关系　( n;%)

注：与Ⅲ级比较， ①P<0.05；与Ⅰ级比较，②P<0.05

2.3EGFR、BCl-2、ER、PR、HER-2之间的相关性PR、Bcl-2与ER间呈正相关，相关系数分别为0.712(P<0.01)、0.599(P<0.01)。同时，PR与Bcl-2间也呈正相关(r=0.599，P<0.01)。而ER、PR 分别与HER-2、EGFR之间及HER-2与Bcl-2之间都呈负相关，它们的相关系数依次为-0.366、-0.133、-0.453、-0.195和-0.392。此外，HER-2、Bcl-2与EGFR之间均无相关性(P>0.05，表3)。

表3　EGFR、BCl-2、ER、PR、HER-2之间的相关性

注：采用Spearman相关检验，①P<0.05，②P<0.01

3　讨　　论

乳腺癌的发生、发展、转移是一个极其复杂的生物学过程，是多因素、多基因、多步骤突变的结果[8]。

EGFR 是一种分布于组织细胞膜上的多功能糖蛋白[9]，也属于表皮生长因子受体家族成员之一。它的过度表达已证明与肿瘤的恶性程度有关[2-10]。Nicholson 等[11]发现，在肿瘤患者中EGFR 高表达的肿瘤更易发生转移，复发时间短、复发率高、存活期短等。本研究结果发现EGFR在三阴性乳腺癌中有更高的表达，这符合三阴性乳腺癌具有更高的恶性程度以及更差的预后的报道[11-13]。

Bcl-2 是目前公认的抗凋亡基因，它可阻断多种原因导致的细胞凋亡过程。其中一种主要通过阻断内源性核酸内切酶的DNA 切割活性，从而阻断细胞的程序性死亡[12]。Bcl-2在多种肿瘤中都有表达，但表达的预后意义差异很大，在慢性淋巴细胞白血病、胰腺癌、胃癌患者中，Bcl-2高表达提示预后不良；然而在乳腺癌中，多数报道Bcl-2高表达是预后良好的指标。文献[13,14]研究表明Bcl-2蛋白表达与组织学分级呈负相关，在组织学分级中I～Ⅱ级表达率明显高于Ⅲ级，且提示Bcl-2高表达是预后良好的指标。Hellemans 等[15]研究表明Bcl-2蛋白高表达与预后较好有密切关系，且与组织学分级呈负相关，同时Bcl-2蛋白阳性表示癌细胞分化程度高，增殖能力和侵袭力弱。本研究显示，Bcl-2在预后较好的管腔型乳腺癌中有高表达，同时在组织学分级中，级别越高，Bcl-2的表达率越高，这与Hellemans等[15]报道一致。

乳腺癌是激素依赖型肿瘤，它的生长依赖于体内雌孕激素水平，受ER 、PR 的调控，ER、PR是公认的唯一能预测内分泌治疗效果的最可靠生物标志物[16,17]，因此了解乳腺癌组织中的ER、PR 的表达极为重要。Gee 等[18,19]指出，Bcl-2蛋白受雌激素调节，且多局限在ER、PR 阳性的乳腺癌细胞中，而ER、PR 阳性又是内分泌治疗的必要条件，故认为Bcl-2高表达患者预后好可能是由于其对激素治疗反应好所致。本研究结果表明，Bcl-2的表达与ER、PR的表达呈正相关的关系[20]，这也与Rolland P[19]报道一致。因此，Bcl-2的表达可能为内分泌的治疗提供很好的指标。临床研究表明，ER、PR表达为预后好的因素，而HER-2表达为预后不好的因素[12,21]，EGFR高表达通常认为患者肿瘤恶性度高、预后不良[23, 24]。本研究结果显示，EGFR与ER、PR呈负相关，而与HER-2呈正相关，得到的结论与上述研究一致。本研究主要对EGFR、Bcl-2 的表达及与乳腺癌临床病理特征之间的关系进行探讨，研究结果发现，EGFR与Bcl-2的表达之间无相关性，所以对EGFR与Bcl-2的共表达未作进一步的探讨。

综上所述，乳腺癌出现EGFR表明恶性程度高，预后差，特别是在三阴性乳腺癌患者表达最高[23]，而Bcl-2在预后较好的管腔型乳腺癌中表达更高。两者的表达都与组织学分级有关系，组织学分级越高EGFR表达率越高而Bcl-2表达率越低，提示EGFR与Bcl-2的高表达提示乳腺癌表现了更加恶性的临床病理特征。而EGFR的高表达与Bcl-2的低表达对预后的影响需要本研究进行预后的随访调查。另外，本研究还发现，EGFR表达与ER、PR呈负相关；Bcl-2表达与ER、PR呈正相关，与HER-2呈负相关，提示EGFR与Bcl-2与激素受体的表达有密切关系。因此，检测EGFR与Bcl-2表达可以作为乳腺癌发生、发展的指标，对评估乳腺癌的生物学行为以及指导临床治疗和预后策略的制定具有重要的临床意义。

志谢：吉林大学中日友谊医院普外科提供乳腺癌病理组织标本。

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(2014-11-30收稿2015-01-20修回)

(责任编辑梁秋野)