A型肉毒毒素对神经病理性疼痛模型大鼠P物质含量的影响



A型肉毒毒素对神经病理性疼痛模型大鼠P物质含量的影响

张晓英1，杨国栋2，潘万龙1

(1.川北医学院基础医学院;2.川北医学院附属医院，四川南充637000)

【摘要】目的:研究A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTX-A)对神经病理性疼痛模型大鼠P物质(substance P，SP)含量的影响。方法: 5 ％福尔马林50 μL皮下注射于大鼠额区及颞区，建立疼痛模型。BTX-A组局部皮下注射10 U/kg BTXA，同时设立生理盐水组及空白对照组，放射免疫法测定SP含量。结果:生理盐水组SP含量高于空白对照组(P＜0.05)，BTX-A组低于生理盐水组(P＜0.05)。结论: BTX-A可能通过抑制感觉通路神经肽-SP的释放减轻神经病理性疼痛症状。

【关键词】A型肉毒毒素;神经病理性疼痛; P物质

肉毒毒素是由革兰阳性厌氧肉毒杆菌(clostridium botulinum)产生的一种神经毒素，其中毒力最强的是A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTXA)，其最早应用于试验研究及临床。BTX-A药理机制与胆碱能神经末梢SNAP-25蛋白(synaptosomeassociated protein-25)结合，抑制乙酰胆碱释放，减少肌肉收缩和痉挛相关，故其已广泛用于治疗肌肉活动过度性疾病及美容除皱等领域。近年来，BTX-A在神经病理性疼痛中的临床研究也得到了人们的关注，但其机制尚在研究阶段［1-7］。本研究通过测定神经病理性疼痛模型大鼠P物质(substance P，SP)含量变化，对其止痛机理进行初步研究。

1　材料与方法

1.1材料

健康雌性SD大鼠30只，体重(180±40)g，购自兰州陆军总院实验动物中心; BTX-A由兰州生物制品研究所提供; SP测试盒购自上海第二军医大学神经生物教研室; FJ2008型全自动γ放射免疫计数器(西安二六二厂);甲醛(山西康宝生物制品股份有限公司)。

1.2方法

分组、建模及检测:30只成年SD大鼠随机分为空白对照组(n =10)，5％福尔马林50 μL皮下注射于20只大鼠额区及颞区，建立福尔马林疼痛模型。疼痛发作后2 h分别给予生理盐水0.05 mL、BTX-A 10 U/kg皮下注射于额区、颞区，每日1次，连续6 d。至第6天，注射2 h后取脑干(主要包括三叉神经脊束核和三叉神经脑桥核)及三叉神经节。根据试剂盒说明，测定SP的含量。

1.3统计学分析

2　结果

大鼠皮下注射福尔马林后出现前肢频繁搔头、爬笼次数及往返运动增多。生理盐水组脑干及三叉神经节内SP含量高于空白对照组(P＜0.05)，BTXA组与空白对照组无统计学意义(P＞0.05)，低于生理盐水组(P＜0.05)。各组脑干及三叉神经节内SP含量比较，见表1。

表1　各组脑干及三叉神经节内SP含量比较(±s，n)

表1　各组脑干及三叉神经节内SP含量比较(±s，n)

* P＜0.05，与空白对照组比较; #P＜0.05，与生理盐水组比较。

组别　(只)　脑干SP(pg/mL)三叉神经节SP(pg/mL)空白对照组10　1.42 +0.37　0.91 +0.70生理盐水组　10　4.73 +2.14*　3.08 +0.54*BTX-A组　10　1.48 +0.57#　1.07 +0.61#

3　讨论

BTX-A由一条重链和一条轻链组成，是肉毒杆菌毒素的7个分型(A、B、C、D、E、F、G)中最早被提纯为结晶的蛋白酶，生产工艺最成熟。近年来报道了BTX-A对偏头痛、紧张性头痛、丛集性头痛、带状疱疹后遗神经痛、肌筋膜疼痛综合征及术后疼痛综合征［1-7］。成爱霞等［8］报道给予38例慢性每日头痛患者BTX-A 50 U，44例对照组患者给予利多卡因加泼尼松龙5 mL(2％利多卡因3 mL +醋酸泼尼松龙75 mg×2 mL)。结果显示BTX-A对慢性每日头痛患者治疗显示出了较好的效果，明显减少头痛发作天数、减轻头痛程度，而且作用持久、不良反应轻微，对生活质量也有所改善。肉毒毒素治疗组治疗后仅l例(2.6％)患者出现眉毛下垂，2例(5.2％)出现注射点疼痛，无任何患者出现颈项痛、颈强直、上睑下垂、感觉减退及其他不良反应，对照组中有6 例(13％)患者出现注射点疼痛。王晋荣等［9］也有相似报道，且表明疗效可维持6个月，患者不良反应轻微。汪保华等［10］报道30例偏头痛患者BTX-A总有效率达96.7％，与对照组口服尼莫地平片的总有效率76.7％，差异有统计学意义(P＜0.05)。宋金辉等［11］在彩超水囊引导下BTX-A联合红外偏振光治疗慢性偏头痛患者，结果显示发作临床疗效及不良反应优于BTX-A治疗组及红外偏振光治疗组，值得进一步研究后进行临床推广。BTX-A能缓解由肌肉痉挛引起的疼痛，但当肌肉张力恢复正常后，其止痛作用仍然很明显。即BTX-A对由肌痉挛和非肌痉挛引起的疼痛均有效。这表明它的止痛作用尚存在其它的机制［12］。神经病理性疼痛可通过神经递质的释放(如SP、神经激肽、降钙素基因相关肽、作用于血管的肠内多肽等)引起神经源性症，作用于外周神经血管系统引起中枢敏化，产生神经病理性疼痛。SP作为速激肽家族中的一员，主要存在于脊髓背根神经节及初级传入纤维［13-16］。位于三叉神经半月节内的SP能神经元以中小型为主，且SP能神经元的向心纤维终末集中在脑干三叉神经尾侧脊束核内，在某些因素的刺激(如外周伤害性刺激)作用下可释放SP。SP在下丘脑含量的多少除与外周伤害性刺激外，还与神经细胞合成速度有关，即SP属肽类神经递质，合成较为缓慢且无重复吸收，使伤害性信息持续传人，导致短时间内SP含量减少。SP具有多种生物学效应，如致痛、降压、血管扩张和毛细血管通透性增加等，而且还可以通过作用于免疫细胞引起神经源性炎症反应。SP前体生成后与乙酰胆碱共存神经末梢的囊泡，BTX-A与囊泡上SNAP-25的C-末端相结合，致其囊泡不能释放，同时也抑制SP的释放，从而减轻神经病理性疼痛症状［17-18］。

本研究结果显示，神经病理性疼痛的大鼠模型出现前肢频繁搔头、爬笼次数及往返运动增多，提示模型制备成功。生理盐水组脑干及三叉神经节内SP含量高于对照组，BTX-A组与对照组比较无统计学差异，但低于生理盐水组。这提示BTX-A可通过抑制感觉通路神经肽(如SP的释放)来减轻神经病理性疼痛症状。

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(学术编辑:杨健)

The change of substance P in neuropathic pain rats injected subcutaneously by botulinum toxin type A

ZHANG Xiao-ying1，YANG Guo-dong2，PAN Wan-long1

(1.School of Basic Medicine，North Sichuan Medical College; 2.Department of Gastroenterology，Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，Sichuan，China)

【Abstract】Objective: To detect the change of substance P in neuropathic pain rats injected subcutaneously by botulinum toxin type A.Methods: Besides control group，neuropathic pain rats triggered by 5 ％ formalin subcutaneously injected into frontal and temporal areas，then they had been respectively treated with 0.9 ％ NaCl (n =10)and 10 U/kg BTX-A (n =10)for 6 days.All of groups were detected the content of substance P(SP)by radioimmunoassay.Results: The content of SP increased significantly in saline group than that in control group (P＜0.05)，but decreased significantly in BTX-A groups than in saline group(P＜0.05).Conclusion: BTXA could inhibit SP releasing from sensory pathways to relieve the symptoms of neuropathic pain.

【Key words】Botulinum toxin type A; Neuropathic Pain; Substance P

通讯作者:杨国栋，E-mail: ygd_ld2003@163.com

作者简介:张晓英，(1980-)，女，山西太原人，博士，讲师，主要从事A型肉毒毒素对疼痛模型作用机制的研究。

基金项目:四川省教育厅重点项目(14ZAO194);川北医学院科研发展重点培育项目(CBY13-A-ZP21)

收稿日期:2014-09-30

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.02.08

【文章编号】1005-3697(2015)02-0163-03

【中图分类号】R378.8

【文献标志码】A

网络出版时间: 2015-5-1 01∶33网络出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150501.1333.005.html