肿瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺癌中的表达及意义



肿瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺癌中的表达及意义

李俊军，何艳，胡小波，欧阳立志

(湖南省肿瘤医院暨中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院病理科，湖南长沙4100013)

【摘要】目的:分析人黑色素瘤相关抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常组织、乳腺良性瘤及乳腺癌组织中的表达趋势，为乳腺癌临床诊断和生物治疗探寻新靶点。方法:选取本院接受并行手术治疗的乳腺良性肿瘤和乳腺癌患者各33例，分别取病灶组织和病灶周边正常组织制备石蜡病理切片，以免疫组织化学实验检测MAGE-A9和MAGE-A11的表达水平，并分析其与乳腺癌病理特征的相关性。结果: MAGE-A9在正常组织中无表达，在乳腺良性瘤和乳腺癌的阳性表达率分别为15.2％和54.5％，差异有统计学意义(P＜0.05); MAGE-A11在正常组织及良性瘤中均无表达，仅在乳腺癌中表达，阳性表达率达78.8％。MAGE-A9表达受组织学分级、ER、HER-2的影响，组织学Ⅲ级患者明显高于Ⅰ、Ⅱ级，ER、HER-2阳性高于阴性; MAGE-A11表达仅受到ER、HER-2的影响，ER、HER-2阳性高于阴性，差异有统计学意义(P＜0.05)。线性回归分析结果显示MAGE-A9和MAGE-A11表达水平呈直线正相关性(y =0.798 1x + 1.278; R2=0.694 8)。结论: MAGE-A9和MAGEA11可能与乳腺癌的发生发展有密切关系。

【关键词】MAGE-A9; MAGE-A11;乳腺癌

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，当前的临床治疗是以手术为主的综合治疗，根据患者的病理类型和临床表现，选择适当的包括手术、放疗、化疗以及内分泌疗法等综合治疗措施。然而，外科手术适用范围有限，仅针对早期病变可取得理想效果，对于已经发生复发、转移或严重分化的患者，其临床疗效欠佳;放、化疗缺乏特异性，医源性伤害较大［1］。黑色素瘤抗原基因(melanoma associated antigen，MAGE)是癌睾丸抗原(CTA)家族成员，正常生理条件下仅表达于睾丸组织和胚胎组织。据报道，部分肿瘤组织中亦发现有MAGE表达，有学者指出MAGE有望成为肿瘤性疾病的靶抗原之一［2-3］。本研究对乳腺癌患者的MAGE-A9和MAGE-A11的表达情况进行初步研究，并分析其与乳腺癌病理特征的相关性。

1　资料和方法

1.1一般资料

选取本院2012年3月至2014年1月收治的33例乳腺癌患者和33例良性瘤患者为研究对象。乳腺癌:年龄33～68岁，平均(53.6±4.06)岁;病理类型:导管癌21例、小叶癌7例、髓样癌3例、粘液癌2例;肿瘤体积1.6～6.4 cm3，平均(2.9±0.8)cm3; TNM分期:Ⅰ期9例、Ⅱ期19例、Ⅲ期5例;组织学分级:Ⅰ级7例、Ⅱ级20例、Ⅲ级6例;良性瘤:乳腺纤维瘤21例、腺瘤12例。

1.2主要仪器和试剂

微波炉(P702: iTP-6，格兰仕);光学显微镜(XZJ-2030B，江西凤凰);手动切片机(RM2235，德国莱卡); MAGE-A9一抗(SAB1411908，Sigma，来源于小鼠); MAGE-A11一抗(HPA045377，Sigma，来源于兔); MAGE-A9二抗(Ab150105，Abcam，驴抗小鼠); MAGE-A11二抗(Ab150077，Abcam，山羊抗兔);浓缩型DAB试剂盒(C0168，上海诺渊实业有限公司);苏木精(DH156，上海鼎国生物技术有限公司);山羊血清(GO-505，上海博升生物技术有限公司)等。

1.3研究方法

所有患者均于手术过程中留取病灶组织和病灶周边健康组织，制备石蜡病理切片。所得病理切片按一下流程进行免疫细胞化学(ICC)实验: (1)脱蜡至水:60℃恒温箱，烘烤30 min。然后按照“二甲苯10 min×2→100％酒精5 min→95％酒精5 min→75％酒精5 min→70％酒精5 min”的流程浸泡。(2)抗体孵育: PBS清洗3次，每次5 min，滴加适量一抗，4℃过夜;抗体以5％的脱脂牛奶稀释，SAB1411908、HPA045377的最佳工作浓度分1∶2 000、1∶3 000;37℃复温45 min，PBS清洗，滴加适量二抗，28℃孵育90～120 min; Ab150105、Ab150077的最佳工作浓度均为1∶2 500。(3)显色和镜检: PBS清洗，DAB显色5 min; PBS清洗，苏木精复染2 min;盐酸酒精分化后，再行常规脱水、透明流程，并采用中性树胶封片镜检。

1.4观察指标

1.4.1阳性表达率显微镜下可见MAGE-A9和MAGE-A11蛋白在胞质和胞核中均有表达，观察着色程度和着色比例。着色程度:无色0分;淡黄色1 分;棕黄色2分;褐色3分。着色比例:着色细胞数不足5.0％ 0分; 5.0～10％ 1分; 11～20％ 2分; 21～50％ 3分;＞50％ 4分。着色程度+着色比例＞2者为阳性表达病例，计入阳性表达率［4］。

1.4.2阳性表达量拍照，采用图像分析软件Image-pro plus，测量各样品组织光密度值，作为其阳性表达量。

1.5统计学分析

采用统计学软件SPSS16.0统计数据，阳性表达量用均数标准差(±s)表示，组间比较行两独立分组的t检验;阳性表达率以百分比表示，采用四格表确切概率法分析;相关性分析采用简单线性回归; P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.001表示差异极有统计学意义。

2　结果

2.1MAGE-A9和MAGE-A11的表达

MAGE-A9在正常组织中无表达，在乳腺良性瘤和乳腺癌的阳性表达率分别为15.2％和54.5％，差异有统计学意义(P＜0.05)，平均表达水平分别为0.086±0.014、1.865±0.204，差异亦有统计学意义(P＜0.001); MAGE-A11在正常组织及良性瘤中均无表达，仅在乳腺癌中表达，阳性表达率达78.8％，见表1和图1。

表1　两组患者MAGE-A9和MAGE-A11的表达情况

图1　各组患者MAGE-A9和MAGE-A11的免疫组化染色图像（400×）

2.2MAGE-A9和MAGE-A11表达乳腺癌病理特征的关系

MAGE-A9和MAGE-A11表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤体积、病理类型、临床分期、肿瘤大小、淋巴转移及PR均无相关性(P＞0.05)。MAGE-A9表达受到组织学分级、ER、HER-2的影响，组织学分级为Ⅲ级患者明显高于Ⅰ级和Ⅱ级，ER、HER-2阳性患者明显高于阴性，差异有统计学意义(P＜0.05)。MAGE-A11表达仅受到ER、HER-2的影响，ER、HER-2阳性患者明显高于阴性，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

2.3MAGE-A9和MAGE-A11表达的相关性分析

经简单线性回归分析，MAGE-A9和MAGE-A11表达水平呈直线正相关性(y = 0.798 1x + 1.278; R2=0.694 8)，见图2。

图2　MAGE-A9和MAGE-A11表达的相关直线

3　结论

根据表达特异性和基因结构的差异，MAGE家族可分为MAGE-Ⅰ和MAGE-Ⅱ两类。前者定位于特定的X染色体，多表达于睾丸、胎盘及部分肿瘤组织，与多种肿瘤性疾病的发病机制密切相关;后者在X染色体则没有明确的定位，多表达于神经组织，与肿瘤没有明确关联［5］。MAGE-A基因亚家族属于MAGE-Ⅰ，现已发12名成员(MAGE-A1～MAGE-A12)，是当前肿瘤免疫疗法的研究重点。研究表明［6］，除睾丸、胎盘等“免疫豁免”器官外，MAGE-A在正常人体组织中几乎不表达，且多数肿瘤组织至少表达一种MAGE-A亚型。然而，不同的MAGE-A基因亚型在不同肿瘤具有不同的表达特点，如MAGE-A1高表达于神经胶质瘤而低表达于卵巢癌［7］。MAGE-A9和MAGE-A11对乳腺癌临床诊治是否有研究价值，目前尚无明确报道。

表2　乳腺癌患者MAGE-A9和MAGE-A11表达与病理特征的关系(±s)

表2　乳腺癌患者MAGE-A9和MAGE-A11表达与病理特征的关系(±s)

病理特征MAGE-A9(n =18)表达水平　F或t，P值MAGE-A11(n =26))表达水平　F或t，P值年龄＜40岁　1.825±0.173 40～50岁　1.866±0.185 ＞50岁　1.876±0.196 1.084，0.137 1.979±0.154 2.012±0.185 2.008±0.163 1.126，0.114病理类型导管癌　1.816±0.201小叶癌　1.873±0.183髓样癌　1.853±0.174粘液癌　1.863±0.155 1.132，0.097 2.026±0.169 2.035±0.178 1.983±0.156 2.044±0.173 1.227，0.086肿瘤体积＜3 cm3　1.825±0.214 3～5 cm3　1.866±0.193 ＞5 cm3　1.886±0.203 1.007，0.152 2.005±0.157 2.007±0.187 1.998±0.146 0.931，0.207 TNM分期Ⅰ期　1.837±0.173Ⅱ期　1.863±0.185Ⅲ期　1.886±0.196 1.228，0.086 1.983±0.168 2.003±0.174 2.006±0.175 0.954，0.195组织学分级Ⅰ级　1.802±0.171Ⅱ级　1.851±0.173Ⅲ级　1.985±0.203 1.986，0.021 1.986±0.155 1.994±0.163 2.011±0.166 1.337，0.095分化程度高分化　1.903±0.186中分化　1.866±0.175低分化　1.853±0.183 1.427，0.077 2.016±0.175 2.007±0.163 2.001±0.166 1.406，0.080 ER阳性　2.135±0.221阴性　1.625±0.161 6.214，0.000 2.133±0.183 1.856±0.167 4.317，0.000 HER-2阳性　1.936±0.193阴性　1.753±0.187 3.102，0.001 2.203±0.195 1.922±0.188 3.428，0.000 PR阳性　1.853±0.175阴性　1.872±0.186 1.382，0.083 2.012±0.153 1.997±0.168 1.503，0.071

本研究对MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常组织、乳腺良性瘤及乳腺癌组织中的表达趋势进行初步测定，并分析其表达水平与乳腺癌病理特征的相关性，以初步探索两指标在乳腺癌发生发展过程中的临床意义。研究结果显示，MAGE-A9在正常组织中无表达，在乳腺癌组织的阳性表达率和表达水平明显高于良性瘤组织，分别为54.5％和15.2％; MAGE-A11在正常组织及良性瘤组织中均无表达，乳腺癌中的阳性表达率达78.8％。受研究方法和评价标准的影响，该结果与其他研究有些许出入，如侯淑芸等［4］以PCR手段测得乳腺癌患者MAGE-A9 和MAGE-A11阳性表达率分别为45％和66.7％，连易水等［8］以免疫组织化学方法测得乳腺癌患者的MAGE-A11阳性表达率为51.7％。但各研究结果均显示癌旁正常组织MAGE-A9和MAGE-A11表达阴性，与本研究结果具有高度一致性，同时也证明两者与乳腺肿瘤性疾病的关系极为密切。

此外，本研究进一步分析MAGE-A9和MAGEA11表达水平与乳腺癌患者病理特征的关系，结果显示MAGE-A9表达受组织学分级、ER、HER-2的影响，组织学Ⅲ级患者明显高于Ⅰ、Ⅱ级，ER、HER-2阳性高于阴性; MAGE-A11表达仅受到ER、HER-2的影响，ER、HER-2阳性高于阴性。实质上，既往学者对乳腺癌患者的组织学分级、ER、HER-2表达特点及其重要意义均做过研究。组织学分级主要反映癌组织的恶性程度，是预测乳腺癌预后的重要指标，长期实践证明，乳腺癌的组织学分级越高，恶性程度越高、细胞增殖能力越强，预后越差［9］。激素受体表达情况也是乳腺癌患者临床诊治和预后评估的重要指标，研究表明［10］，ER和PR均参与了乳腺癌的发生和发展，可作为乳腺癌临床内分泌治疗方案的参考依据，亦可作为典型预后标志物。同时，Xia等指出［11］，HER-2高表达是乳腺癌预后不良的一个独立的预后因素。国内学者王宁等［12］针对ER阳性乳腺癌患者的HER-2表达情况与组织病理学分级做了相关性考察，结果证实HER-2阳性表达患者的组织学分级明显高于阴性。本研究结果中MAGEA9、MAGE-A11表达水平与PR表达情况均未表现出相关性，而与ER、HER-2表达情况相关，故而笔者推测MAGE-A9和MAGE-A11可能重点参与ER依赖性乳腺癌的细胞增殖，而受PR影响不大;然而，本实验病例数较少，该结论尚需进一步验证。

总而言之，MAGE-A9和MAGE-A11与乳腺癌患者病理特征的关系说明两者均可为乳腺癌提供新的治疗方案，并有望成为其临床诊断和预后评估的辅助指标。

参考文献

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［12］王宁，王斌，王雅杰.ER阳性乳腺癌患者Her-2和PR表达的相关性研究［J］.医学研究杂志，2010，39(10):55-59.

(学术编辑:何朗)

Expression and significance of the tumor antigen MAGE-A9 and MAGEA11 in breast cancer

LI Jun-jun，HE Yan，HU Xiao-bo，OUYANG Li-zhi

(Department of Pathology，Hunan Cancer Hospital，Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine，Central South University，Changsha 4100013，Hunan，China)

【Abstract】Objective: To analyze the expression difference of melanoma associated antigen subtypes MAGE-A9 and MAGEA11 in breast normal tissue，breast benign tumor and breast cancer，so as to search new targets for the clinical diagnosis and treatment of breast cancer.Methods:33 patients with breast normal tissue and 33 patients with breast cancer accepted in our hospital and treated with surgery were selected，and both the pathological tissue and the healthy tissue around were prepared paraffin slice.The MAGE-A9 and MAGE-A11 expression level were detected by immunohistochemical experiment，which relationship to pathological features were analyzed.Results: The MAGE-A9 had no expression in healthy tissue，and its expression rate in breast benign tumor and breast cancer accounted for 15.2％ and 54.5％，which has statistical differences (P＜0.05).The MAGE-A11 had no expression in both healthy tissue and breast benign tumor，and its expression rate in breast cancer accounted for 78.8％.The MAGE-A9 expression was affected by histological grade and ER/HER-2，and those in GradeⅢand ER/HER-2 positive were higher that the others (P＜0.05).The MAGE-A11 expression was affected by ER/HER-2 only，and those in ER/HER-2 positive were higher than negative，the difference was statistically significant (P＜0.05).MAGE-A9 and MAGE-A11 is expected to become the new targets for clinical diagnosis of breast cancer and tumor immunotherapy.Linear regression analysis results showed that the MAGE-A9 and MAGE-A11 expression level had positive linear correlation (y =0.798 1x +1.278; R2= 0.694 8).Conclusion: MAGE-A9 and MAGE-A11 is expected to become the new targets forbook=382,ebook=115clinical diagnosis and tumor immunotherapy of breast cancer.

【Key words】MAGE-A9; MAGE-A11; Breast cancer

作者简介:李俊军(1973-)，男，湖南嘉禾人，副主任医师，主要从事乳腺肿瘤方面的研究。E-mail:494427973@qq.com

收稿日期:2015-01-26

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.03.27

【文章编号】1005-3697(2015)03-0381-05

【中图分类号】R737.9; R36

【文献标志码】A

网络出版时间: 2015-6-19 17∶39网络出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150619.1739.025.html