安舒液质量标准研究

刘东顺 陆文铨 朴淑娟 熊筱娟

摘要：目的 建立安舒液的质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中地肤子、黄柏进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对制剂中盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量进行测定，ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m）分离，以乙腈?0.1%磷酸（1000 mL加50 ?L二乙胺）为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长284 nm。结果 薄层色谱分别检出黄柏中的盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱及地肤子中的地肤子皂苷Ic。盐酸小檗碱线性关系为Y=23.109X-30.548（r2=0.999 8），加样回收率RSD=2.97%，表明盐酸小檗碱进样量在0.050 5～2.525 0 ?g 范围内有良好的线性关系；盐酸黄柏碱线性关系为Y=10.038X-2.446 6（r2=0.999 9），加样回收率RSD=1.24%，表明盐酸黄柏碱进样量在0.050 0～2.500 0 ?g范围内有良好的线性关系。结论 该方法准确、快速、稳定、可靠，重复性好，可用于安舒液的质量控制及评价。

关键词：安舒液；盐酸小檗碱；盐酸黄柏碱；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.024

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）01-0100-03

Study on Quality Standards for Anshu Liquid LIU Dong-shun1，2， LU Wen-quan2， PIAO Shu-juan2， XIONG Xiao-juan1 （1. College of Chemical and Biological Engineering， Yichun University， Yichun 336000， China； 2. Shanghai Changzheng Hospital， Second Military Medical University， Shanghai 200003， China）

Abstract： Objective To establish quality standards for Anshu Liquid. Methods Phellodendri Chinensis Cortex and Kochiae Fructus were qualitatively identified by TLC method. The contents of berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in the preparation were determined by HPLC method. The chromatographic column was ZORBAX SB-C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）； the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid （0.5% diethylamine） gradient elution； the flow rate was 1.0 mL/min； the detection wavelength was 284 nm. Results Berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in Phellodendri Chinensis Cortex and saponin Ic in Kochiae Fructus were detected by TLC method. The linear relationship of berberine hydrochloride in the preparation was Y=23.109X?30.548， r2=0.999 8， RSD=2.97%， showing that the linear range of berberine hydrochloride was 0.050 5– 2.525 0 ?g. The linear relationship of phellodendrine hydrochloride in the preparation was Y=10.038X?2.446 6， r2=0.999 9， RSD=1.24%， showing that the linear range of phellodendrine hydrochloride was 0.050 0–2.500 0 ?g. Conclusion The method is accurate， rapid， stable and reliable， with good reproducibility， which can be used for the quality control and evaluation of Anshu Liquid.

Key words： Anshu Liquid； berberine hydrochloride； phellodendrine hydrochloride； HPLC

安舒液为第二军医大学上海长征医院院内制剂，由黄柏、地肤子、白鲜皮、白芷、当归5味药提取加工而成，具有清热燥湿、祛风止痒功效，用于治疗湿疹、皮炎、皮肤瘙痒症等。本研究采用薄层色谱法（TLC）对方中黄柏、地肤子进行鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对黄柏中的盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量进行测定，为建立该制剂的质量标准提供依据。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪（Agilent，美国），包括G1311C输液泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B-DAD紫外检测器、Chemstation色谱工作站；十万分之一天平（Sartorius CPA225D，德国）；旋涡振荡混和器（WL-901 Vortex，海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；超声仪（SK7200H型，上海科导超声仪器有限公司）。

黄柏对照药材（批号130801）、地肤子对照药材（批号130801），购自安徽亳州利锋药业有限公司；盐酸小檗碱对照品（批号110713-201212.）、盐酸黄柏碱对照品（批号111895-201303）、地肤子皂苷Ic对照品（批号111723-201404），购自中国食品药品检定研究院；安舒液（批号140528、140529、140530），第二军医大学上海长征医院制剂中心提供；乙腈为色谱纯（Merck，德国），水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 黄柏

取本品10 mL置于锥形瓶中，加20 mL纯水，混匀，再加浓氨水0.5 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次30 mL），合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成供试品溶液。取黄柏药材0.1 g，加1%醋酸甲醇20 mL，超声处理0.5 h，过滤，取滤液蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成对照药材溶液。取除黄柏外的处方药材，同法制成阴性对照溶液。另取盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱对照品，分别制成每1 mL含1 mg的对照品溶液[1]286。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B）试验，取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-水-醋酸（4∶5∶1）[2]的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，以碘化铋钾显色，供试品及对照药材色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置上无干扰。

2.2 地肤子

取本品10 mL置于锥形瓶中，加20 mL纯水，混匀，再加浓氨水0.5 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次30 mL），合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成供试品溶液。称取地肤子1 g，加10 mL甲醇，超声处理0.5 h，过滤，取滤液蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成对照药材溶液。取除地肤子外的处方药材，同法制成阴性对照溶液。另取地肤子皂苷Ic对照品，制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液[1]114。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B）试验，取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-水-醋酸（4∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，热风吹至斑点显色清晰[3]，供试品及对照药材色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置上无干扰。

3 盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱号880975-902；流动相：乙腈?0.1%磷酸[1000 mL加50 μL二乙胺（DEA）]梯度洗脱（0～8 min，10%～18%乙腈；8～13 min，18%～30%乙腈；13～20 min，30%乙腈）；检测波长：284 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品2.02 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，使其母液浓度为1.01 mg/mL；精密称取盐酸黄柏碱对照品2.00 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，使其母液浓度为1.00 mg/mL。各取上述溶液0.5 mL混合定容至1 mL，制成每毫升含盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱分别为505、500 ?g的对照品母液。

3.3 供试品溶液的制备

取本品10 mL置于锥形瓶中，加20 mL纯水，混匀，再加浓氨水0.5 mL，用二氯甲烷萃取3次（每次30 mL），合并下层萃取液，45 ℃蒸干，用5 mL甲醇溶解并用初始流动相定容至25 mL，过滤，取续滤液，即得。

3.4 阴性对照溶液的制备

取除黄柏外的其余药材，按安舒液制备方法制成阴性对照品，按“3.3”项下方法制备，即得。

3.5 空白试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果显示阴性对照无干扰，见图1。

3.6 线性关系考察

将混合对照品贮备液用初始流动相逐级稀释，制成每毫升含盐酸小檗碱5.05、0.1、12.625、25.25、50.5、63.12、101、126.25、252.5 ?g/mL及盐酸黄柏碱5.0、10.0、12.5、25.0、50.0、62.5、100、125、250 ?g/mL的系列溶液，按上述色谱条件测定，以峰面积对浓度（?g/mL）进行线性回归，得回归方程。盐酸小檗碱：Y=23.109X-30.548（r2=0.999 8），表明盐酸小檗碱进样量在0.050 5～2.525 0 ?g范围内有良好的线性关系；盐酸黄柏碱：Y=10.038X-2.446 6（r2=0.999 9），表明盐酸黄柏碱进样量在0.050 0～2.500 0 ?g范围内有良好的线性关系。

3.7 精密度试验

取同一对照品溶液进样10 ?L，重复进样6次，测定峰面积，结果盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的峰面积RSD分别为0.2%、0.8%，表明精密度良好。

3.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、16、20、24 h进样测定，结果盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的峰面积RSD分别为0.33%、0.76%，说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

3.9 重复性试验

取同一批安舒液6份，按样品测定方法测定，盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的峰面积RSD分别为0.8%、0.4%，结果表明本方法重复性良好。

3.10 加样回收率试验

分别精密称取6份已知含量的样品，置于具塞锥形瓶中，精密加入一定量的对照品，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表1。

3.11 样品测定

按“3.1”项下色谱条件测定3个批号的样品，每批平行3份，结果见表2。

4 讨论

安舒液制剂液体较黏，辅料较多，需要对其稀释碱化后再富集测定有效成分含量。本试验先后比较了大孔树脂柱分离、乙酸乙酯萃取、二氯甲烷萃取等方法，结果发现使用二氯甲烷萃取操作简便，效果较好。本研究使用同一展开体系对安舒液中君药黄柏和臣药地肤子进行鉴别，阴性对照无干扰，斑点清晰。

本研究通过总结现有文献关于制剂及黄柏药材中盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量测定方法的报道[4-9]，先后尝试了乙腈-乙酸、乙腈-甲酸、乙腈-磷酸体系，发现盐酸小檗碱拖尾严重，在乙腈-磷酸体系中加入二乙胺可明显改善盐酸小檗碱的拖尾现象，峰形改善。本试验对制剂中盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱进行含量测定，方法学考察表明，在本文色谱条件下，其他成分几乎不干扰其含量测定，系统适用性符合要求，测定方法简便，结果准确，重复性好，能够有效控制安舒液的质量。

参考文献：

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（收稿日期：2015-03-08）

（修回日期：2015-03-26；编辑：陈静）