牛屠宰厂来源的单增李斯特菌的耐药性研究

牛屠宰厂来源的单增李斯特菌的耐药性研究

冯晓慧1，张琳1，朱立贤2

(1.枣庄学院生命科学学院，山东枣庄277160；2.山东农业大学食品科学与工程学院，山东泰安271018)

[摘要]了解牛屠宰厂来源的单增李斯特菌的耐药性情况.采用牛屠宰厂来源的的55株单增李斯特菌为研究对象，采用Kirby-Bauer法检测对16种抗生素的耐药情况.所检55株单增李斯特菌株对青霉素G、诺氟沙星、复方新诺明等不耐药，对头孢噻吩、多粘菌素B、头孢噻肟、依诺沙星的耐药率分别为1.82%、25.45%、36.36%、38.18%，耐3种以上抗生素的有44株，其中耐3种抗生素的27株(49.09%)，耐4种抗生素的17株(30.90%).单增李斯特菌对4种抗生素存在耐药情况，并且存在不同程度的多重耐药情况的菌株，今后应加强对单增李斯特菌的污染情况和耐药性检测，以保证食品安全和人类健康.

[关键词]牛肉；单增李斯特菌；耐药性[收稿日期]2015-08-07

[基金项目]山东省现代农业产业技术体系牛创新团队项目(项目编号：SDAIT-12-011-09).

[作者简介]冯晓慧(1986-)，女(回族)，山东枣庄人，枣庄学院生命科学学院助理实验师，农学硕士，主要从事食品微生物理论研究.

[中图分类号]O657.32 [文献标识码]A

0引言

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM，简称单增李斯特菌)属于李斯特菌属，是常见的食源性致病菌[1]，也是李斯特菌属中致病力最强的细菌，20世纪80年代后，欧美国家曾多次发生该菌引起的食物中毒事件，死亡率达30%以上[2].LM广泛存在各种生食和即食食品中，包括生肉及熟肉制品、速冻米面食品、奶酪、蔬菜、沙拉和海产品等[3]，其中肉制品的检出率最高[4-6].

自1988年首次报道李斯特菌四环素耐受株以来[7]，不断从食品、环境及临床李斯特菌病病例中分离到对一种或多种抗生素耐药菌株，包括用于治疗李斯特菌病抗生素[8-10]，有关该菌耐药性问题应引起重视.目前有关牛屠宰厂来源的单增李斯特菌的分子分型抗生素敏感性方面的研究较少，因此本研究对牛屠宰厂来源的单增李斯特菌的RAPD分型以及耐药性情况进行了分析，为单增李斯特菌的控制提供依据.

1材料与方法

1.1材料

1.1.1菌株

55株单增李斯特菌实验室保存，分离自牛屠宰厂肉牛屠宰过程中的牛胴体及屠宰环境.单增李斯特菌标准菌株CMCC54002和CMCC54004购自中国医学细菌保藏管理中心，金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923实验室保存.

1.1.2培养基和主要试剂

M-H培养基、脑心浸液琼脂(北京陆桥技术有限责任公司)、抗生素(杭州天和微生物试剂有限公司).

1.2方法

采用WHO推荐的标准Kirby-Bauer纸片法，使用杭州天和微生物试剂有限公司生产的药敏纸片及判断标准，部分判定标准按照NCCLS手册2005版.

用接种环挑取经纯化、传代的LM接种于3～5ml M-H肉汤中，35℃培养24 h，用生理盐水校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准，用无菌棉拭蘸取已准备好的菌液，均匀涂布接种于M-H琼脂平板表面，置室温干燥3～5 min后用镊子将含药片贴于含菌琼脂平板表面.平板经室温放置15 min再倒放于35℃培养箱中培养48 h后，测量抑菌环直径并记录结果.每次实验均用金黄色葡萄球菌ATCC 25923做质控.

2结果与分析

屠宰厂中单增李斯特菌耐药性监测结果见表1、表2.由表1中可以看出单增李斯特菌对头孢噻吩、多粘菌素B、头孢噻肟和依诺沙星耐药，其耐药率分别为1.82%，25.45%、36.36%和38.18%；对青霉素G、诺氟沙星、复方新诺明、氯霉素、环丙沙星、四环素、卡那霉素、红霉素、庆大霉素、头孢唑啉、氨苄西林、呋喃妥因均敏感，其中对诺氟沙星(20%)、氯霉素(1.82%)、环丙沙星(21.82%)、多粘菌素B(60%)、头孢噻吩(7.27%)、头孢噻肟(60%)、呋喃妥因(18.18%)及依诺沙星(49.09%)存在一定程度的中度敏感情况，而对青霉素G、复方新诺明、头孢唑啉、氨苄西林、四环素、卡那霉素、红霉素、庆大霉素均为100%敏感，因此推荐为临床使用时首选药物；虽然肉牛屠宰厂中分离的单增李斯特菌对多数抗生素耐药性不高，但是均存在着不同程度的耐药及多重耐药性，在55株单增李斯特菌中(表2)，耐3种以上抗生素的有44株，其中耐3种抗生素的27株(49.09%)， 耐4种抗生素的17株(30.90%).

表1　55株单增李斯特菌的抗生素敏感性

表2　55株单增李斯特菌的多重耐药情况

3讨论

由于抗生素的大量滥用，各类食源性病原菌的耐药菌株日益增多，导致多种抗菌药物治疗效果不显著，食源性致病菌的耐药性对食品安全及人类健康的影响已经引起许多国家的警惕.有研究报道，单增李斯特菌可以从质粒或其他细菌中获得耐药性基因[1,2].本研究中55株单增李斯特对青霉素G、诺氟沙星、复方新诺明、氯霉素、环丙沙星、四环素、卡那霉素、红霉素、庆大霉素、头孢唑啉、氨苄西林、呋喃妥因敏感，对头孢噻吩、多粘菌素B、头孢噻肟、依诺沙星部分耐药，这与其他地方的单增李斯特菌耐药性相似[3].潘军航[4]从食品中分离的单增李斯特菌对多数抗生素耐药性不高，对氨苄青霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素等10种抗生素的耐药性<5%，尤其是对甲氧苄氨嘧啶完全敏感.然而陈伟伟[5]调查泉州市食品中单增的耐药性发现，单增李斯特菌对环丙沙星中度敏感，对呋喃妥因耐药.余淑冰[6]也发现单增李斯特菌对依诺沙星和呋妥因耐药.炊慧霞[7]检测河南省34株单增李斯特菌中，有2株对环丙沙星耐药，1株对氯霉素耐药，1株对复方新诺明耐药.Pesavento[8]对生肉及便利店中所检出的168株单增进行药敏试验，发现30.4%的菌株耐三种及以上的抗生素；张丽萍[9]检测食品中的单增李斯特菌的耐药性，15种抗生素有9种产生了耐药性，并且出现了2株多重耐药菌株.石磊[10]检测猪肉样本中分离出的78株菌，耐受一种抗生素的有13(16.67%)株，耐受三种或三种以上的抗生素有5(6.41%)株.本研究中牛屠宰厂来源的单增李斯特菌虽然对多数抗生素耐药性不高，但是存在着不同程度的耐药及多重耐药性.多重耐药性的出现，不仅导致其耐药性能够通过食物链、人畜接触或环境散播而在人与人，或人兽之间进行传递，给食源性疾病的防治工作造成较大的困难.

4结论

55株单增李斯特菌对4种抗生素存在耐药性，并且存在不同程度的多重耐药情况的菌株，今后应加强对单增李斯特菌的污染情况和耐药性检测，以保证食品安全和人类健康.

参考文献

[1]Pintado C M B S,Oliveira A,Pampulha M E,Ferriera M A S S.Prevalence and characterization of Listeria monocytogenes isolated from soft cheese [J].Food Microbiology,2005,22,79-85.

[2]Pourshaban M,Ferrini A M,Cannoni V,Oliva B, Aureli P.Transferable tetracycline resistance in Listeria monocytogenes from food in Italy [J].Journal of Medicine Microbiology,2002,51(7):564-566.

[3]王红,张正东,陈燕梅,等.自贡市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况的调查及药敏结果分析[J]. 四川:现代预防医学,2008,35(23):4679-4683.

[4]潘军航,梅玲玲,等.食品中单增李斯特菌血清型及耐药性监测[J].辽宁:中国公共卫生,2008,24(1): 107-108.

[5]陈伟伟,杨育红,杨毓环,等.泉州市食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定性、定量及耐药性分析[J].北京:中国食品卫生杂志,2003,15(1):43-45.

[6]余淑冰,梁景涛,周强忠,等.食品中单核细胞增生李斯特菌分离及药敏试验的研究[J].北京:中国热带医学,2004,4(4):515-534.

[7]炊慧霞,李文杰,张秀丽,等.2012年河南省食源性单核细胞增生李斯特菌血清分型及耐药性分析[J].北京:中国卫生检验杂志,2014,24(12):1800-1803.

[8]Pesavento G,Ducci B,Nieri D,Comodo N,Lo Nostro A.Prevalence and antibiotic susceptibility of Listeria spp.isolated from raw meat and retail foods [J].Food Control,2010,21:708-713.

[9]张丽萍,张克俭,高涛,等.食源性单增李斯特菌血清分型及耐药性的研究[J].北京:实用预防医学,2013, 20(5): 611-613.

[10]石磊,王文燕,闫鹤.猪肉中单核细胞增生李斯特菌的分离与耐药性研究[J].广东:现代食品科技,2013, 29(12): 2826-2829.

[责任编辑：闫昕]

Antimicrobial Susceptibility of Listeria monocytogenes from Beef Cattle Processing Plants

FENG Xiao-hui1,ZHANG Lin1, ZHU Li-xian2

(1.College of life science, zaozhuang university, zaozhuang, 277160, China；

2.College of Food Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China)

Abstract：[Objective] Listeria monocytogenes isolates from beef cattle processing plants were examined for antibiotic resistance. [Methods] Antimicrobial susceptibility to 16 kinds of antibiotics of 55 Listeria monocytogenes were determined by Kirby-Bauer method, respectively. [Results] The 55 strains of Listeria monocytogenes were sensitive to penicillin G, norfloxacin, cotrimoxazole etc. Among the 55 Listeria monocytogenes isolates, 1.82% were resistant to cephalothin, followed by resistant to polymyxin B (25.45%), cefotaxime (36.36%), enoxacin (38.18%). 44 strains were resistant to more than 3 kinds of antibiotic, among them 27 strains were resistant to 3 kinds of antibiotic(49.09%), 17 strains were resistant to 4 kinds of antibiotic(30.90%). [Conclusion] Listeria monocytogenes isolates were resistant to 4 antibiotics. Listeria monocytogenes appeared multidrug resistance in different degree. So the contamination and drug resistance of Listeria monocytogenes should be monitored to ensure food safety and human health in the future.

Key words：beef; Listeria monocytogenes; Antimicrobial resistance