湘西州生境对杜仲叶绿原酸质量分数的影响

湘西州生境对杜仲叶绿原酸质量分数的影响*

罗会冠1，陈咏文1，熊利芝1,2

(1.吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2.吉首大学植物资源保护与

利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000)

摘要：对湘西自治州7县1市多个采集点的杜仲叶绿原酸质量分数进行检测，考察不同生境对杜仲叶绿原酸质量分数的影响.试验结果表明，湘西自治州不同地区杜仲叶绿原酸质量分数存在明显差异，不同地区及同一地区不同采集点绿原酸的质量分数均存在差异.杜仲生长在海拔401～500 m范围，坡向南坡，土壤种类为浅灰土壤，土壤母质为石灰岩或砂页岩的条件下，杜仲叶绿原酸质量分数较高.

关键词：湘西自治州；杜仲；绿原酸；生境

文章编号：1007-2985(2015)06-0069-03

中图分类号：R284.1文献标志码：B

DOI:10.3969/j.cnki.jdxb.2015.06.016

收稿日期：*2015-05-26

基金项目：湖南省高校创新平台开放基金资助项目(13K094)；吉首大学大学生研究性学习和创新性实验计划项目(JD-CX2013-17，JD-CX2013-11)

通信作者：熊利芝(1974—)，女，湖南益阳人，吉首大学生物资源与环境科学学院副教授，博士，主要从事植物化学研究.

湘西自治州森林覆盖率达66.9%.受海拔、地形、坡向等因素的影响，湘西地区独特的自然生态系统已成为野生动植物资源天然宝库和生物科研基因库.杜仲(Eucommia UlmoidesOliver) 为杜仲科杜仲属植物，是中国特有的传统名贵中药，具有增强机体特异性免疫功能、降血压、降血脂、抗衰老、抗疲劳、抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用.[2-6]绿原酸为苯丙素类物质，是杜仲的主要活性成分之一，对多种致病菌和病毒有较强的抑制和杀灭作用，也是众多药材和中成药抗菌解毒、镇痛强志、消炎利胆、补中益气的主要有效成份.杜仲叶绿原酸药用有效成分与杜仲皮基本相同，药用功能基本一致.为了更加充分地开发利用杜仲资源，为杜仲的驯化栽培提供科学依据，笔者采用HPLC法对不同生境下湘西地区的杜仲叶绿原酸质量分数进行测定和比较.

1材料与方法

1.1 试验材料

根据杜仲在湘西自治州不同地区的分布，分别采集不同的样品.样品采自花垣县(HY1-6)、龙山县(LS1-6)、保靖县(BJ1-6)、永顺县(YS1-6)、泸溪县(LX1-6)、凤凰县(FH1-4)、古丈县(GZ1-4)和吉首市(JS1-4)等地，于2012年11—12月采集杜仲叶，并用GPS仪记录有关数据.样品采集后，于实验室内60 ℃ 烘干保存，并选取有叶片的样品进行后续试验.

1.2 仪器与试剂

仪器：数控超声波清洗器(KQ-250DE型，昆山市超声仪器有限公司)；微型植物粉碎机(F2102型，天津市泰斯特仪器有限责任公司)；高效液相色谱仪(岛津LC-20AT)，包括LC-20AT型高压双泵、SPD-M20A型紫外检测器、CTO-20A柱温箱、进样器、色谱数据处理系统(LC-solution软件).

试剂：绿原酸标准品(质量分数不小于98%，成都康邦生物科技有限公司)，分析纯(无水乙醇)，色谱纯(冰醋酸、甲醇，均来自于成都金山化学试剂有限公司).

1.3 试验方法

(1)材料的预处理.对湘西自治州不同地区不同生境条件下的杜仲叶进行编号、烘干、粉碎过40目筛备用.

(2)绿原酸的提取.将样品按照料液比(g∶mL)为1∶30，提取溶剂为体积分数70%乙醇，提取温度70 ℃，超声辅助提取30 min，过滤，提取3次，合并滤液定容.

(3)绘制标准曲线.(ⅰ)色谱条件.色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：V(甲醇)∶V(水)∶V(冰乙酸)=150∶850∶5，流速1 mL/min，柱温27 ℃，检测波长232 nm.(ⅱ)绿原酸标准曲线绘制.精密称取绿原酸标准品约2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，加入体积分数30%乙醇溶液，摇匀并定容，即得对照液.分别取对照液1，2，5，10，15，20 μL按上述色谱条件进行高效液相分析得到峰面积，以峰面积为纵坐标，质量分数为横坐标，得回归方程y=1.5×106x+14 604，R2= 0.999 9.

(4)样品分析.精密移取一定量的杜仲叶提取液，加水稀释数倍，使杜仲叶提取液绿原酸的质量分数控制在标准曲线制作的范围内.按制作标准曲线的方法测定提取液稀释液的峰面积，根据回归方程计算杜仲叶提取液中绿原酸的质量分数，并按照公式“绿原酸提取率(%)=提取液浓度×体积×稀释倍数÷原料质量×100%”计算杜仲叶绿原酸质量分数.

2结果与讨论

2.1 地区对杜仲叶绿原酸质量分数的影响

湘西自治州不同地区杜仲叶绿原酸质量分数测定结果见表1.从表1可知，湘西自治州不同地区采集的杜仲叶样品中绿原酸质量分数有较大的差异，同一地区因采集地点的不同，差异也很大.在凤凰县(FH4)和古丈县(GZ2)采集的杜仲叶绿原酸质量分数较高，而保靖县(BJ1)、龙山县(LS1)和花垣县(HY1)采集的杜仲叶绿原酸质量分数较低，花垣县(HY1-6)和永顺县(YS1-6)采集的杜仲叶绿原酸质量分数差异较大.

表1　湘西自治州不同地区杜仲叶绿原酸质量分数测定结果　%

2.2 生境对杜仲叶绿原酸质量分数的影响

根据采集信息及相同条件下杜仲叶绿原液质量分数的平均值，得到坡向、海拔、土壤种类及土壤母质等环境因素对杜仲叶绿原酸质量分数的影响(表2).

由表2可知：在坡向因素中，南坡杜仲叶中绿原酸质量分数高于北坡的；海拔对杜仲叶绿原酸的质量分数有一定的影响，海拔401～500 m的杜仲叶中绿原酸质量分数较高；从土壤种类来看，浅灰壤杜仲叶绿原酸质量分数较高，约为1.34%，高于紫壤的1.22%、黑壤的1.14%、红壤的1.09%和黄壤的0.96%.从土壤母质因素来看，石灰岩和紫砂岩等2种土壤母质的绿原酸质量分数差别不大，但均高于砂页岩的.

表2　不同生境对仲叶绿原酸质量分数的影响

3结论

(1)湘西各地区及同一地区不同采集点采集的杜仲叶绿原酸质量分数均存在差异.

(2)杜仲生长在海拔401～500 m范围、坡向南坡、土壤种类浅灰土壤、土壤母质为石灰岩或砂页岩的条件下，杜仲叶绿原酸质量分数较高.

参考文献：

[1]张街风.魅力湘西展秀篇[EB/OL].[2015-05-26].http://news.ifeng.com/gundong/detail_2013_11/01/30855956_0.shtml.

[2]杜红岩.杜仲优质高产栽培 .北京:中国林业出版社，1996.

[3]熊利芝,王溶,田伟,等.大孔吸附树脂对杜仲叶总黄酮的吸附热力学和动力学研究.离子交换与吸附，2013，29(6):526-534.

[4]陈海莉，张峰，徐婧，等.杜仲叶中有效成分的闪式提取工艺优选.中国实验方剂学杂志,2014,20(19):19-22.

[5]KIM H Y，MOON B H，LEE H J，et al.Flavonol Glycosides from the Leaves of Eucommia Ulmoides.Journal Ethnopharmacol，2004，93(2):227-230.

[6]袁天翊，方莲花，吕扬，等.杜仲叶的药理作用研究进展.中国中药杂志，2013，38(6):781-785.

MassFractionofChlorogenicAcidintheLeavesofEucommia Ulmoides

OliverinDifferentHabitatsofXiangxi

LUOHuiguan1，CHENYongwen1，XIONGLizhi1,2

(1.CollegeofBiologyandEnvironmentalSciences,JishouUniversity，Jishou416000，HunanChina；

2.KeyLaboratoryofPlantResourcesConservationandUtilization(JishouUniversity)，

CollegeofHunanProvince，Jishou416000，HunanChina)

Abstract：The contents of chlorogenic acid in leaves of Eucommia ulmoides Oliver from seven counties and one city in different habitats of Western Hunan were determined.The result showed that the contents of chlorogenic acid were significantly different in different habibats.The contents of chlorogenic acid were higher in the leaves of Eucommia ulmoides Oliver in the adrets of elevation 401～500 m，in light-grey soil，and with the parent material of limestone or sand shale.

Keywords:XiangxiAutonomousPrefecture;Eucommia ulmoides Oliver；chlorogenicacid；habitat

(责任编辑陈炳权)