血清学诊断的运用

2015-12-31黄仁树

四川畜牧兽医 2015年1期

关键词：移液器血样试剂

李娟，黄仁树

（四川省什邡市动物疫病预防控制中心，四川什邡618400）

目前兽医实验室诊断主要分病毒学诊断、血清学诊断、细菌学诊断三类。细菌学与病毒学诊断在基层实验室开展得不多，应用最普遍的是血清学诊断。

1 血样采集、保存和运送

1.1 血液采集血清学诊断的样品主要是血清。家禽采用翅下静脉采血，小猪采用卧式采血，中猪和大猪采用立式采血，奶牛采用尾静脉采血是造成应激最小、最方便的采血方法。血清学诊断中应注意在畜禽抗体高峰期进行血样采集。

血样采集应严格按照无菌要求操作，针头、容器、采血部位均应消毒。采血人员应熟练掌握采血技术，并选用合适的注射器及针头进行采血。采血前应做好保定工作，并选准进针部位，猪的前腔静脉越往头部越浅、越细，越靠胸部越粗、越深。采血过程中应掌握好进针角度和深度，对家禽进行采血时针尖应顺着血管向前推进，若推偏则会引起血肿。

1.2 血清制取血清制取方法：自然析出法，采血后将注射器活塞向后拉1～2cm，留出血清析出的空隙，并将血液呈30°左右夹角静置，让血清自然析出，通常温度高血清析出快，夏季一般静置1h血清即可析出；离心法，即将注射器内的血液沿容器壁徐徐注入（不能用力推，也不能震荡，否则易发生溶血），待容器内的血液凝固后，用离心机离心，离心的血液上层即是血清。采用离心法需凝血后再离心，否则离心出的是血浆。

1.3 血样保存和运送血清制备后应置于4℃条件下冷藏，并在24h内送检，如24h内不能送检，则应将血清置于-20℃条件冻存，注意不可反复冻融。

血样运输过程中，避免容器破损，样品装入冷藏箱前应铺设衬垫。

需注意的是所有盛装送检样品的容器应贴上防脱标签，同时应填写采样单，标明采样时间、采样地点、编号和样品名称、畜禽品种、免疫情况等。

2 血清学诊断

2.1 试剂和器具进行血清学诊断的试剂应有批文批号，使用时应注意试剂的有效期，诊断试剂的有效期通常比较短，有的有效期只有3个月，化学试剂主要选择分析纯。

另外，移液器量程的准确性直接影响着实验结果，选用适当容量区间的移液器误差会更小，如ELISA实验中，样品的稀释倍数都较大，样品加样量很小，故移液器应选用与之较为接近的量程。在血清学检测中经常会用到96孔血凝板，通常猪瘟的间接血凝试验选用110°V型板，而禽流感和新城疫的血凝试验选用90°V型板，因为在同等时间内不同型号板的血沉降效果不同。

2.2 实验室仪器校正在血清学诊断中，常用的仪器有电子天平、水浴锅、酶标仪、纯水器、灭菌锅、移液器和恒温箱。

电子天平在第一次使用、长时间未使用、移动位置及气温变化时都要进行校准，才能保证试验结果的准确性。对水浴锅应经常检查水浴箱温度计所示的温度和实测温度是否一致，一般允许有±1℃的误差。对酶标仪应经常维护光学部分，防止滤光片霉变，并定期检测校正。纯水器应注意器滤芯、反渗透膜和纯化柱子是否超出使用寿命，如果失效应立即更换，否则会影响纯水的质量。灭菌锅的安全阀、温度表、压力表要定期校验，以确保设备正常。移液器可用分析天平辅助校正取液量。恒温箱的电动轴承每半年应加油一次，并经常检查恒温箱所示的温度和实测温度是否一致。

2.3 实验室操作实验室操作的规范性直接影响着实验结果的准确性。

在血清学诊断中，一是所用的器皿应洗净，配好的溶液都需进行灭菌处理，并注明溶液名称和配制日期，配好的溶液应置于低温条件下保存或冷冻保存。二是所用的电子仪器在用前10min应打开预热，以达最佳工作状态。三是使用移液器时，为获得较高的精度，吸头应预先吸取一次样品溶液，然后再正式移液，吸液时应保证枪头无气泡，每次实验后应将移液器刻度调至最大，让弹簧复原，以延长移液枪的使用寿命。四是所用溶液和试剂应取多少用多少，未用完的溶液或试剂不能倒回瓶中。五是控制好实验室温度，通常实验室温度控制在20～25℃，特定的实验要控制到相应的实验室温度。

2.4 生物安全措施基层兽医实验室一般不从事高致病性病原微生物检测实验，但进行人畜共患病等检测（如布鲁氏菌病血清学检测）仍对实验室工作人员有潜在威胁。实验室工作人员应提高防护意识，了解生物安全措施对自身和环境安全的重要性。

实验室应定期或不定期地用紫外灯或消毒剂消毒。实验结束后应对实验室、实验台面进行消毒，废弃物应消毒后做统一处理。个人应戴好手套、口罩，穿好鞋套和实验服，实验结束后应洗净双手。