胃癌中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2表达与临床病理的关系及罗格列酮对其表达的影响

胃癌中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2表达与临床病理的关系及罗格列酮对其表达的影响

遇常红曲义坤1程开

(佳木斯大学附属第一医院消化科，黑龙江佳木斯154002)

摘要〔〕目的探讨胃癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(RhoGDI)2的表达与临床病理的关系及可能机制。方法60例胃癌患者，取相邻的胃癌癌旁组织为对照组。检测两组RhoGDI2的表达，并对RhoGDI2的表达与胃癌临床病理进行统计学分析。结果胃癌组织中RhoGDI2的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)；胃癌组织中RhoGDI2表达的阳性率(76.67%)显著高于癌旁组织(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7)；胃癌组织中RhoGDI2的表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小有显著相关性(P<0.05)；胃癌组织中RhoGDI2及MMP2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)；罗格列酮作用后胃癌组织中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达水平明显低于作用前(P<0.01)；罗格列酮作用前和作用后胃癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.595，P=0.000；rs=0.612，P=0.000)。结果RhoGDI2在胃癌中呈高表达；胃癌中RhoGDI2的表达参与了胃癌的发病、转移和进展；罗格列酮可以抑制RhoGDI2的表达；RhoGDI2可能通过调控MMP2的表达参与胃癌的发病、转移及进展。

关键词〔〕胃癌；鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2；罗格列酮

中图分类号〔〕R737〔

基金项目：黑龙江省卫生计生委科研课题(2014-207)

通讯作者：程开(1978-)， 女，硕士，副主任医师，主要从事消化道肿瘤研究。

1佳木斯大学附属第一医院普外科

第一作者：遇常红(1977-)，女，硕士，主治医师，主要从事胃肠病学研究。

胃癌是一种预后较差的消化系统恶性肿瘤〔1,2〕，具体发病机制尚未完全明晰，近年来其发病率、死亡率呈逐年上升趋势〔3,4〕。鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(RhoGDI)2为重要的肿瘤转移相关基因〔5〕，在恶性肿瘤中可呈现异常表达，在机体肿瘤转移及进展过程中起重要作用〔6,7〕。本研究通过检测胃癌中RhoGDI2的表达，旨在探讨RhoGDI2在胃癌发生、转移和进展中的可能作用机制。

1资料与方法

1.1一般资料2011年6月至2014年9月我院60例胃癌患者，男38例，女22 例；年龄45～85〔平均(57±5)〕岁，体重指数(21.61±3.12)kg/m2。均经手术病理证实为胃癌，符合胃癌的诊断标准〔5〕。按照病理分期，Ⅰ期12例，Ⅱ期48例。取相邻胃癌癌旁组织为对照组。获我院伦理委员会审核批准，并经患者签署知情同意书。均首次手术；已行常规影像学检查；无严重心血管疾病。排除标准〔5〕：近3个月内接受靶向治疗、放化疗者；严重精神疾病者；肺结核者；免疫性疾病者；急性感染者；其他系统恶性肿瘤；过度饮酒者；资料缺失，未完成随访者。

1.2标本采集冷冻癌组织和癌旁组织蜡块，切片厚度约5 μm，在45℃水箱中展片，并于65°C烤箱中过夜。

1.3免疫组化检测检测RhoGDI2的表达，兔抗人RhoGDI2多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，鼠抗人RhoGDI2多克隆抗体购自美国Abcam 公司，试剂盒兔抗羊IgG二抗及SP试染色剂盒购自上海华大科技有限公司。

1.4荧光定量PCR采用Trizol 法提取RNA，逆转录获得cDNA，使用SYBR Green Master Mix，行实时荧光定量PCR(RT-PCR)，以β-actin为内参。RhoGDI2、基质金属蛋白酶(MMP)2和β-actin的上游引物、下游引物见表1。PCR反应步骤如下：94℃预变性3 min;94℃变性20 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s；35个循环，72℃延伸10 min。

表1　RhoGDI2、MMP2和β-actin的引物序列

1.5判定标准染色细胞阳性率：0 分为阴性；≤25%1分；>25%且≤50%2分；>50%且≤75%3分；>75%4分。0分阴性，1～2分弱阳性，3分中等阳性，4分强阳性〔6〕。

1.6统计学方法采用SPSS17.0软件进行χ2检验，Pearson相关分析，秩和检验，t检验或单因素方差分析，Spearman检验。

2结果

2.1胃癌、癌旁组织中RhoGDI2的表达胃癌组织中RhoGDI2的表达水平高于癌旁组织(P<0.000 1)。见表2、图1。

2.2胃癌组织、癌旁组织中RhoGDI2的检测阳性率胃癌组织中RhoGDI2表达的阳性率(76.67%)显著高于癌旁组织(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7)。

表2　胃癌组织、癌旁组织中RhoGDI2的表达( n)

图1　胃癌组织中RhoGDI2阳性(SP，×400)

因素nRhoGDI2χ2或u值P值性别 男38280.71190.4766 女2218病理分期 Ⅱ期48402.42140.0155 Ⅰ期126年龄 ≥65岁26221.26230.2068 <65岁3424肿瘤部位 胰体位28200.88980.3736 胰头3226肿瘤大小 >2cm52443.68030.0002 ≤2cm82分化程度 低分化34302.51280.0120 中分化1410 高分化126淋巴结转移 有40363.42440.0006 无2010

2.3胃癌组织中RhoGDI2的表达与临床病理的关系胃癌组织中RhoGDI2的表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小有显著相关性(P<0.05)。见表3。

2.4不同组织中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的检测胃癌组织中RhoGDI2及MMP2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。见表4。

表4　不同组织RhoGDI2、MMP2 mRNA

2.5罗格列酮作用前后胃癌组织中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达罗格列酮作用后胃癌组织中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达水平(0.371±0.028)、0.321±0.029)明显低于作用前(t=46.59、52.72，均P=0.000)。

2.6相关性分析罗格列酮作用前胃癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.595，P=0.000)；罗格列酮作用后胃癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.612，P=0.000)。

3讨论

研究显示，RhoGDI2参与了呼吸系统肿瘤、消化道肿瘤、泌尿系统肿瘤等恶性肿瘤的发生及进展，在上述恶性肿瘤组织中RhoGDI2可出现异常激活和表达〔8～11〕。胃癌发病机制复杂，可由多种因素诱发〔12〕；近期研究〔11～14〕显示，消化系统疾病中RhoGDI2表达水平可出现异常增强现象。Gildea等〔7〕检测发现，恶性肿瘤组织中RhoGDI2的表达强度明显高于良性病变及健康者。Li等〔14〕研究发现，RhoGDI2的表达与结直肠癌患者预后及转移密切相关，可能起一定的促进作用。本研究胃癌中RhoGDI2的表达水平高于癌旁组织，与相关文献〔5〕结果一致。Cho等〔5〕研究发现，胃癌患者体内生化指标的表达与机体临床病理状况有关。本研究提示RhoGDI2的表达与胃癌的临床病理密切相关，上述指标的表达在胃癌的进展中亦起一定的作用。该结果与Yi等〔12〕的研究报道一致。

研究显示，MMP2与胃癌的转移密切相关，在胃癌的进展中起重要作用。本研究胃癌组织中RhoGDI2 mRNA及MMP2 mRNA的检测水平明显高于癌旁组织，与相关文献〔5〕报道一致。本文表明RhoGDI2及MMP2可能共同参与了胃癌的发病及进展。RhoGDI2可能通过调控MMP2的表达参与胃癌的发病及进展。Li等〔14〕在研究中亦发现，RhoGDI2可通过调控机体体内一系列生化指标的表达进而促进恶性肿瘤的发生、转移和进展。RhoGDI2参与胃癌发生、转移和进展的可能机制有：①RhoGDI2在抑制机体免疫功能的同时，促进肿瘤血管生成及细胞增殖〔5〕；②RhoGDI2通过上调MMP2的表达参与胃癌的进展及肿瘤细胞的增殖和转移〔15,16〕。

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〔2014-09-27修回〕

(编辑苑云杰)