γ－干扰素对自发性高血压大鼠左室质量指数及糖基化终末产物的影响

γ-干扰素对自发性高血压大鼠左室质量指数及糖基化终末产物的影响

刘畅李莉崔天祥赵狄刘洪洋

(郑州大学第二附属医院心血管内科，河南郑州450000)

摘要〔〕目的研究γ-干扰素(INF)对自发性高血压大鼠(SHR)左室质量指数(LVMI)及糖基化终末产物(AGEs)的影响。方法选取16周龄雄性SHR(SPF级别)32只，按照完全随机法1∶1分成2组，将16只予生理盐水大鼠作为SHR实验对照组，16只予INF-γ 20万U·kg-1·d-1作为SHR干预组，另选16只同周龄健康雄性维斯塔京都大鼠(WKY)作为正常对照组(WKY组)，分析治疗后的血压(SBP)、LVM、左室质量指数(LVMI)与AGEs含量。结果与WKY组比较，SHR各组大鼠的SBP、LVM与LVMI水平、AGEs与受体RAGE蛋白、mRNA含量及RAGE蛋白免疫组化阳性面积率均显著升高(P<0.05)；SHR干预组治疗8 w SBP明显低于同时期SHR实验对照组，LVMI水平与AGEs含量均有下降(P<0.05)。结论INF-γ能够降低SHR LVMI水平与AGEs、RAGE含量，抑制RAGE mRNA的表达。

关键词〔〕γ-干扰素;自发性高血压大鼠;左室质量指数;糖基化终末产物

中图分类号〔〕R54〔

通讯作者：李莉(1957-)，女，主任医师，教授，主要从事高血压及相关疾病研究。

第一作者：刘畅(1986-)，女，在读硕士，主要从事高血压及相关疾病研究。

高血压合并左室肥厚(LVH)是高血压患者发生心血管事件的独立危险因素，严重影响患者预后。如何预防LVH及LVH的逆转成为高血压和预防心血管事件的关键，而左室质量指数(LVMI)对LVH的判定具有特异性。随着高血压患者LVH进展，冠状动脉储备功能减低，心肌缺血、心力衰竭、心律失常、猝死等事件发生率明显上升〔1〕。本实验通过观察干扰素(INF)-γ对自发性高血压大鼠(SHR)LVMI及糖基化终末产物(AGEs)表达的影响，为原发性高血压伴LVH患者的治疗提供新的理论依据、开辟新思路。

1资料与方法

1.1一般资料选取16周龄雄性SHR(SPF级别)32只，体重240～256 g，平均(253.67±2.94)g，按照完全随机法1∶1分成SHR实验对照组和SHR干预组，每组16只；另选16周龄健康雄性维斯塔京都大鼠(WKY)16只作为正常对照组(WKY组)，体重240～256 g，平均(253.76±2.97)g。实验大鼠均购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SCXK(沪)2007-0005。所有大鼠均予相同饲养方法，即单笼饲养，自由摄食(以鼠粮为饲料)饮水，环境适宜(室内温度20℃～25℃，相对湿度40%～60%，空气流通，明暗间隔周期12 h)。

1.2实验动物的用药方法各组大鼠均在适应性喂养1 w后行相应药物治疗，治疗时间均为8 w。SHR实验对照组与WKY组大鼠于每日上午予等量生理盐水(浓度0.9%)腹腔注射，SHR干预组于每日上午均予注射用重组人INF-γ 20万U·kg-1·d-1腹腔注射(克隆伽玛，国药准字S20020040，上海克隆生物高技术有限公司)。

1.3血压与左心室质量测定方法各组大鼠均于治疗前与治疗后4 w和8 w测量尾动脉收缩压(SBP)。将鼠尾动脉压袖套(已与大鼠尾动脉血压计、血压记录仪连接)套入待测大鼠尾根部，在其安静状态下行充气加压，连续记录3次SBP后取其平均值；于实验第8周行左心室质量(LVM)测量，称大鼠体重，予30 mg/kg戊巴比妥腹腔注射，采用快速取材法处死大鼠，处死前称重(BM)。剥离心脏后剪去大血管(沿主动脉根部)，以0.9%生理盐水灌洗并吸干残余液体后，将右心室游离壁、心房去除，仅保留左心室以获得LVM，计算LVMI〔LVMI=LVM(mg)/BM(g)〕。

1.4生化指标检测方法标本采集自大鼠胸主动脉段，以生理盐水灌洗干净后取50 mm血管，用多聚甲醛(浓度10%)固定，石蜡包埋以备相应检测。采用免疫荧光法〔2〕测定AGEs；采用免疫组化法〔3〕测定AGEs受体(RAGE)，石蜡脱水处理与表达结果获取方法同AGEs。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)〔4〕检测大鼠胸主动脉段组织内RAGE mRNA，参照Tizol RNA提取试剂盒说明书提取总RNA，按照反转录试剂盒说明书行逆转录反应，按照SYBR Premix Ex Taq TM Ⅱ试剂盒说明书行Real Time PCR反应。

1.5统计学处理应用SPSS19.0软件进行统计学分析，组间比较行t检验。

2结果

2.1各组大鼠治疗前后的SBP变化情况与WKY组比较，SHR各组大鼠不同时间段的SBP显著升高(P<0.05)；SHR干预组治疗8 w的SBP显著低于治疗前，与SHR实验对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1　各组大鼠治疗前后的SBP变化情况

与同组治疗前比较：1)P<0.05；与同时间段SHR实验对照组比较：2)P<0.05；与同时间段WKY组比较：3)P<0.05

2.2各组大鼠治疗后的LVM与LVMI指标情况与WKY组比较，SHR各组大鼠的LVM与LVMI水平均显著增加；SHR干预组治疗后的LVM与LVMI水平均显著低于SHR实验对照组(P<0.05)，见表2。

表2　各组大鼠治疗后的LVM与LVMI指标情况

与SHR实验对照组比较：1)P<0.05；与WKY组比较：2)P<0.05；下表同

2.3各组大鼠治疗后的AGEs与RAGE蛋白表达情况与WKY组比较，SHR各组大鼠的AGEs、RAGE mRNA含量、RAGE免疫组化阳性面积均显著上升；SHR干预组治疗后的三项指标均显著低于SHR实验对照组(P<0.05)，见表3。

表3　各组大鼠治疗后AGEs、RAGE蛋白与RAGE mRNA

3讨论

SHR作为遗传性高血压动物模型，其形成机制与人类原发性高血压类似，且经研究证实存在高血压心脏病变，因此是临床研究高血压心肌病变的理想动物模型〔5，6〕。本研究结果提示INF-γ可以一定程度延缓大鼠的心肌重构进程。Niu等〔4〕发现INF-γ可以通过下调血小板源性生长因子-B的mRNA表达，从而抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移，最终减少球囊损伤后血管内膜增生。丁钢等〔7〕研究认为，AngⅡ可明显上调TβR-I表达，而INF-γ对其有明显的抑制作用，表明AngⅡ可通过刺激血管平滑肌细胞表达转化生长因子-β1和其受体，参与血管内膜细胞外基质沉积和新生内膜形成过程，而INF-γ的作用正相反，认为INF-γ能拮抗AngⅡ诱导的细胞外基质及纤维合成作用；INF-γ可以抑制炎症细胞的浸润，抑制炎症因子如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等的表达，增加IL-10、分泌型IL-1β受体拮抗物等炎性因子的合成而发挥抗炎功效，通过减轻心肌慢性炎症反应，进而降低因炎症长期、反复发生引发SHR心室重构。

AGEs与其受体RAGE结合，可激活细胞内多种转导机制，进而造成高血压患者的心血管系统损伤〔8〕。本文结果提示AGEs可能参与SHR的高血压左室肥厚进展，而INF-γ能够有效抑制AGEs与RAGE的表达。作用机制可能是：INF-γ作为辅助性T细胞中的1型辅助性T细胞(Th1)的衍生物，通过促进Th1细胞增殖，增强细胞免疫活性，同时通过降低内源性Th1活性，可以发挥抑制体液免疫作用，进而阻滞AGEs与RAGE的转导信号，有效保护高血压靶器官〔9〕。本文结果与李必龙、范剑峰等〔10，11〕报道一致，证实INF-γ通过降低SHR中AGEs与RAGE含量，抑制RAGE mRNA的表达，具有改善心室重构进程的优势。

4参考文献

1蒋嘉烨.自发性高血压大鼠高血压进程中心肌血管紧张素转换酶的变化及卡托普利干预作用〔J〕.中国药理学与毒理学杂志，2013；27(6)：954-8.

2郑炜平，朱鹏立.替米沙坦对自发性高血压大鼠晚期糖基化终末产物及其受体表达水平影响及机制的研究〔J〕.福建医药杂志，2013；35(6)：7-9.

3Elesber A，Conover A，Denktas E，etal.Prognostic value of circulating pregnancy-associat-ed plasma protein levels in patients with chronic stableangina〔J〕.Eur Heart J，2006；35(16)：287-92.

4Niu J,Li Z,Peng B,etal.Identification of an autoregulatory feedback pathway involving interleukin-1alpha in induction of constitutive NF-kappaB activation in pancreatic cancer cells〔J〕.J Biol Chem，2004;19(7)：1045-50.

5童传凤，谢蔓蔓.雷米普利联合糖基化终末产物交联蛋白裂解剂对自发性高血压大鼠大动脉硬化的干预〔J〕.临床心血管病杂志，2013;29(8)：580-3.

6赵莉芳，缪培智.过氧化物酶体增殖物激活受体-γ在自发性高血压大鼠胸主动脉的表达和瑞舒伐他汀干预作用〔J〕.上海医学，2013;36(9)：783-7.

7丁钢，祝之明，张卓奇，等.干扰素γ及血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞表达转化生长因子β1型受体的影响〔J〕.解放军医学杂志，2003;12(4)：335-6.

8朱鹏立，余惠珍.吡哆胺和替米沙坦对自发性高血压大鼠肾脏损害的影响〔J〕.中华高血压杂志，2014;21(4)：365-70.

9朱艳利，扈丽萍.贝那普利对自发性高血压大鼠糖基化终末产物形成及肾脏损伤的抑制〔J〕.山东大学学报(医学版)，2011;49(9)：1-5.

10李必龙，汤圣兴.基质金属蛋白酶-9在自发性高血压大鼠心室重构的变化及γ-干扰素的干预研究〔J〕.心肺血管病杂志，2013;32(3)：361-4.

11范剑峰，郑春华.妊娠相关蛋白-A对自发性高血压大鼠左室肥厚的影响及γ-干扰素的干预作用〔J〕.临床心血管病杂志，2011;27(3)：233-6.

〔2014-05-17修回〕

(编辑李相军)