泰山紫草中总萘醌提取方法的研究

*基金项目：山东省中医药科技发展计划项目(编号：2013255)，泰安市科技发展计划项目(编号：20132082)。

泰山紫草中总萘醌提取方法的研究

*基金项目：山东省中医药科技发展计划项目(编号：2013255)，泰安市科技发展计划项目(编号：20132082)。

沙南南刘克苏延友宁卫华代潇潇曲晓兰

(泰山医学院药学院，山东 泰安271016)

摘要：目的优选泰山紫草总萘醌类成分的提取方法。方法以总萘醌类成分得率为考察指标，比较回流提取法、渗漉提取法和超声提取法的提取效率；采用紫外光分光光度法,以乙醇作溶媒,在516nm处测定吸光度,计算泰山紫草中总萘醌的含量。结果超声提取法所得总萘醌成分得率最高。结论超声提取法为泰山紫草中总萘醌类化合物较好的提取方法。

关键词：泰山紫草；总萘醌；提取方法

StudyontotalnaphthoquinonesextractionforLithospermumerythrorhizonSieb.etZucc.

SHA Nan-nan LIU Ke SU Yan-you NING Wei-hua DAI Xiao-xiao QU Xiao-lan

(PharmacyCollege,TaishanMedicalUniversity,Taian271016,China)

Abstract:Objective: Objective To establish an appropriate extracting method for Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc..Methods： Using the rate of harvesting of the naphthaquinone as the indices, compare three extraction methods including the reflux extraction, ultrasonic extraction and percolation extraction;By ultraviolet spectrophotometry, we use ethanol as solvent to determine the absorbency in 516nm and calculate the content of total naphthoquinones in Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.. Results： The highest rate of harvesting of total naphthoquinone were obtained by using ultrasonic extraction.Conclusion： Ultrasonic extraction is appropriate for Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.

Key words:Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.；the content of total naphthoquinones；extracting method

泰山紫草(又称硬紫草)为紫草科植物紫草LithospermumerythrorhizonSieb.etZucc.的干燥根，性寒味甘、咸，归心，肝经。具有清热凉血，活血，解毒透疹的功效[1],为泰山“四大名药”之一。现代研究表明紫草药理作用广泛。具有抗炎、抗菌、抗生育和抗肿瘤等作用,特别是其抗肿瘤作用尤为显著[2]。泰山紫草总萘醌类化合物,易溶于氯仿、石油醚,可溶于植物油、乙醇,微溶于水[3]。综合考虑加热对有效成分稳定性的影响、成本环保及安全等方面问题, 本实验选用乙醇为溶剂，采用低温或室温条件下进行有效成分的提取,即选择低温回流、渗漉法、超声法对泰山紫草进行提取方法比较,目的在于筛选出泰山紫草中总萘醌类化合物较为理想的提取方法。

1材料

1.1仪器

S54型紫外-可见分光光度计(上海棱光有限公司)；KQ-5200DE型超声波清洗器；万分之一电子分析天平；电热恒温干燥箱；旋转蒸发仪；LXJ-IIB低速大容量多管离心机；快速涡旋混匀器。

1.2 试剂与药品

泰山紫草(购自泰山四大名药开发有限公司), 经泰山医学院药学院苏研友教授鉴定为LithospermumerythrorhizonSieb.etZucc.。左旋紫草素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110769-200405),其它所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取方法的研究

2.1.1 回流提取法称取泰山紫草粗粉(10目)50.00g，加95%乙醇60℃回流2次,第一次8倍量,第二次6倍量,分别回流2h和1h,过滤,合并提取液，回收乙醇至浸膏状,冷冻干燥, 得干膏,备用。

2.1.2 渗漉提取法称取泰山紫草粗粉(10目)50.00g,用95%乙醇8倍量浸泡过夜,以1ml/min流速进行渗漉,回收乙醇至浸膏状,冷冻干燥,得干膏，备用。

2.1.3 超声提取法称取泰山紫草粗粉(10目)50.00g,用95%乙醇超声2次, 第一次8倍量,第二次6倍量,每次超声30min, 合并提取液，回收乙醇至浸膏状,冷冻干燥,得干膏备用。结果见表1。

2.2 总萘醌的含量测定

2.2.1对照品溶液的制备精密称取左旋紫草素对照品2.5mg,置于50ml的容量瓶中,无水乙醇溶解,定容,即得浓度为0.05mg/ml的对照品溶液。

2.2.2测定条件参照紫外-可见分光光度法[4]的含量测定条件,以无水乙醇作溶媒,400～800nm波长扫描,确定在516nm处测定吸光度。

2.2.3线性关系的考察精密量取0.05mg/mL左旋紫草素对照品液1、2、3、4、5ml分别置于10ml的容量瓶中,用无水乙醇定容,摇匀。在516nm处测定其吸光度,以吸光度(A)为纵坐标,左紫草素对照品浓度(mg/mL)为横坐标进行回归,回归方程A=24.946C-0.0059, r=0.9994,在5～25mg/L线性关系良好。

2.2.4样品含量的测定精密称量各提取物干膏0.05g,置50ml容量瓶中,加无水乙醇至刻度,振摇使溶解,滤过。精密量取过滤液5ml,置25ml容量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得即得样品供试液。精密吸取上述样品供试液1ml，按线性关系下测定吸收度，并计算出样品中总萘醌的含量，结果见表1。

表1　不同提取方法总浸膏得率及含量测定结果

2.3加样回收率试验

精密称取已知含量的样品供试液5份，每份分别加入一定量的左旋紫草素对照品溶液，按样品测定项下操作，测得平均回收率为98.92%，RSD=1.03%(见表2)。

2.3加样回收率试验

表2　加样回收率

2.5 稳定性试验

取供试液1ml按“2.3”项下方法操作，每隔30min测定一次，连续4h考察其稳定性，结果RSD为1.65%，说明在4h内稳定。

2.6 精密度试验

按照样品测定项下方法同时制取5份样品溶液，测定吸光度，以吸光度计算，RSD=2.33%。

3 讨论

本实验采用回流提取法、 超声提取法和渗漉提取法从泰山紫草中提取出总萘醌类成分，并对其含量进行测定。结果显示，采用热回流提取时颜色迅速变深尽管回流温度选择在60 ℃下进行,有效成分仍有损失。因此,不建议采用乙醇热回流法进行泰山紫草总萘醌类成分的提取。采用渗漉法提取泰山紫草总奈醌成分具有干膏得率高的突出特点、且设备价廉、易得等突出特点，较试用于工业化大生产。

与传统提取方法相比，超声提取法不仅节省时间，所获得的总萘醌类成分含量也较高，同时它还具有成本低、投资少的优点，在工业化提取植物有效成分方面具有广阔的应用前景，是一种较好的泰山紫草总萘醌类成分的提取方法。 因此,超声法提取泰山紫草有效成分的工艺条件值得进行深入研究。

参考文献:

[1]王光辉,王琦,时元林.泰山四大名药[J].山东中医杂志,2006,25(3):203-204.

[2]贺锐锐，刘永刚，魏敏吉，等.紫草组分的抗肿瘤活性及其凋亡机制研究[J].中国临床药理学杂志,2012,28(1)：43.

[3]戴冰,冷旺,邹双华,等.新疆软紫草系统溶剂法提取工艺研究[J].中成药, 2008,30(10):1461-1464.

[4]中国药典.一部[S].2005:239.

收稿日期(2014-10-15)

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2015.02.003

中图分类号：R965.2

文献标识码：A

文章编号：7115-1004(2015)02-0128-02

通讯作者：曲晓兰(1980—)，女，讲师，quxiaolan@126.com,Tel:13954813004。

作者简介：沙南南(1993-)，女，山东德州人，2012级中药学本科专业学生。