陈旧性鞭虫封片标本的制作及其形态学观察

齐莉莉，王 贺，梁文章，杨 帆，乔红秀，张 楠

（1.河北医科大学基础医学院病原生物学教研室，河北石家庄050017；2.河北中医学院中西医结合学院诊断学教研室，河北石家庄050200）

陈旧性鞭虫封片标本的制作及其形态学观察

齐莉莉1，王 贺1，梁文章1，杨 帆1，乔红秀2，张 楠2

（1.河北医科大学基础医学院病原生物学教研室，河北石家庄050017；2.河北中医学院中西医结合学院诊断学教研室，河北石家庄050200）

鞭虫属；标本制备；医学检验科学

寄生虫是一类致病性的低等真核生物，其所致寄生虫病发病率和病死率均很高，严重影响着人类的健康，并制约着国家经济和社会的发展［1］。由于寄生虫病的发病率已被认定为衡量一个地区社会经济文化发展的基本指标之一，所以我国自新中国成立之初，即开展了寄生虫病的普查和防治工作，效果显著。经过50多年的防治，至2008年底全国有血吸虫流行的12个省市区中5个已阻断传播，全国血吸虫病病例数已经降至41.3万；2007年经过世界卫生组织审核认可，中国成为全球第一个宣布消除丝虫病的国家；我国计划在2015年达到血吸虫病的传播控制或者传播阻断标准［2］。几种重大寄生虫病在我国得到了较大程度的控制，人体寄生虫的感染率日趋下降，寄生虫标本的采集就变得较为困难。而目前，各医学院校不断扩大招生规模，导致寄生虫学教研室用于实验教学的封片标本短缺现象日趋明显，亟待补充。为解决这一矛盾，作者试图用陈旧的寄生虫大体标本作为制备封片标本的来源，现将保存于10%甲醛液中十余年的鞭虫，制备成永久性封片的过程和效果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 河北医科大学寄生虫教学研室保存的鞭虫大体标本。

1.2 方法 软化，取出固定于10%甲醛液中多年的鞭虫，用蒸馏水冲洗数次后，放入甘油生理盐水液中浸泡24 h；整压，用细线扎牢虫体两端，虫体前半部分重压，再放入生理盐水中继续浸泡24 h；染色，将虫体松绑，并用昆虫针在虫体表面不同部位扎数个小孔，再用蒸馏水反复冲洗，依次移至50%、60%、70%酒精中各30 min后，放入卡红染液中染色12 h，取出虫体放入1%盐酸酒精中退色4～6 h，直至虫体外观呈粉红色为止；脱水，依次经80%、90%、95%、100%酒精，无水酒精与二甲苯1∶1溶液，脱水30 min；透明，放置于二甲苯培液中，透明10 min；封片，用中性树胶封片并加盖盖玻片，显微镜下观察。

2 结 果

经过软化、整压、染色、脱水及封存标本，虫体平整，树胶薄厚适度，外表美观，呈粉红色。低倍镜下观察虫体形似马鞭，前端细长，约占虫体长的3／5，后端明显粗大。表皮层无色透明，而内部器官颜色鲜艳，结构清晰。可见到细长的咽管、包绕于咽管外的杆状体（即呈串珠状排列的杆细胞组成），消化管与生殖器官清晰可见且易于区分（图1～3）。

图1 毛首鞭形线虫部分咽管（×100）

图2 毛首鞭形线虫部分消化系统和生殖系统（×100）

图3 毛首鞭形线虫尾部（×100）

3 讨 论

通常我们采用新鲜虫体制作封片标本［3］，经过迅速清洗、整压、固定、染色、脱水透明和封存等一系列制备过程。新鲜标本组织具有弹性和韧性，在整压过程中，不易损坏虫体原有的形态结构，可以把所要观察某些结构特征调整到理想状态，虫体也易于染色和脱水。而经过甲醛液体固定的标本则不同。

一般情况下，寄生虫大体标本保存于10%甲醛固定液内，因甲醛是一种易变性、渗透力极强的还原剂，可使组织硬化，固定时间越久者越为明显。鞭虫雌虫长35～50 mm，雄虫长30～45 mm，是一种较小的线虫，其前端细后端较粗，保存在甲醛中过久，虫体变得既硬且脆，尤其是由细长的咽管构成的虫体前端，极易折断。

在最初制作陈旧性鞭虫封片标本时，没有经过长时间浸泡、软化及整压，即直接进行染色，其结果往往出现脱水不彻底，虫体内部结构模糊的现象，多见于虫体前端。分析原因：①可能与鞭虫自身形态结构有关；②可能是因虫体没有经过整压，进而影响液体交换；③经脱水、透明后虫体变得更硬；④封片时，因虫体不平整而使得树胶过厚，影响观察效果。经过多次试验，对于陈旧性虫体进行永久性封片标本制作时，需要经过一定时间的浸泡，彻底清除甲醛残留物，并在浸泡液中加入适量的甘油，使得虫体组织充分软化，不仅易于整压，且易于染色和脱水，可收到与新鲜标本同样的效果。

人体寄生虫学属于病原生物学，是以形态学为主的医学专业基础课程，它是医学生从基础课学习过渡到临床课学习的桥梁课程［4］，是一门理论和实践联系紧密的学科［5］。目前，传统的寄生虫学实验教学主要通过观察大体标本和封片标本识别寄生虫的形态结构，以加深和巩固课堂所学内容。利用本研究的试验方法可以及时有效地准备足够的封片标本，保证教学所需，同时可为学校节约购置标本的费用，一举两得。

［1］ 高兴郑.医学寄生虫学［M］.3版.北京：北京大学医学出版社，2008：3.

［2］ 沈继龙，张进顺.临床寄生虫学检验［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2012：2－15.

［3］ Ritchie AE.Simplified specimen preparation for electron microscopic studies of an intra-erythrocytic parasite，Anaplasma marginale［J］.Proc Soc Exp Biol Med，1962，110：532－545.

［4］ 杨树国，李静霞.谈人体寄生虫学实验教学的整合与创新［J］.中国热带医学，2009，9（6）：1176－1177.

［5］ 马艳，汪琦，李娟兰，等.人体寄生虫学开放性实验教学初探［J］.山西医科大学学报：基础医学教育版，2010，12（2）：161－163.

（本文编辑：许卓文）

R383.14

B

1007-3205（2015）01-0097-03

2014－05－15；

2014－05－30

齐莉莉（1983－），女，河北保定人，河北医科大学基础医学院初级实验师，医学硕士，从事法医昆虫学研究。

10.3969／j.issn.1007-3205.2015.01.038