糖尿病大鼠坐骨神经cAMP、cGMP与微循环相关性及益气活血通络中药的干预作用

糖尿病大鼠坐骨神经cAMP、cGMP与微循环相关性及益气活血通络中药的干预作用

赵芸芸张文风王秀阁1

(长春中医药大学，吉林长春130117)

摘要〔〕目的观察糖尿病(DM)大鼠坐骨神经环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)与微循环相关性及益气活血通络方的干预作用。方法采用链脲佐菌素复制DM大鼠模型，并随机分为模型组、中药组、弥可保组，同时设正常对照组。观察益气活血通络中药对大鼠血液流变学、坐骨神经cAMP、cGMP含量的影响。结果DM大鼠血液流变学、坐骨神经cAMP、cGMP含量均发生改变，益气活血通络方药对二者有明显改善作用。结论DM大鼠血液流变学与坐骨神经改变cAMP、cGMP含量具有相关性，益气活血通络中药通过对二者的改善从而防治DM周围神经病变。

关键词〔〕糖尿病；血液流变学；cAMP、cGMP；益气活血通络方

中图分类号〔〕R285.5〔文献标识码〕A〔

基金项目：吉林省科技发展计划项目(No.20140311001YY)；长春市科技计划项目(No.2013374)

通讯作者：张文风(1970-)，女，博士后，教授，硕士生导师，主要从事中药复方的配伍及机制研究。

1长春中医药大学附属医院

第一作者：赵芸芸(1992-)，女，在读本科，主要从事中药复方的配伍及机制研究。

血液流变学是糖尿病(DM)诊断、治疗、疗效观察的客观指标之一〔1〕，其异常变化对DM的慢性并发症发生及发展影响较大。以往研究表明，益气活血通络方可以降低DM大鼠血糖、提高其体重、坐骨神经传导速度、改善血清胰岛素、C肽以及抑制细胞凋亡等作用〔2～8〕。本文探究DM大鼠血液流变性与坐骨神经环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量相关性及其作用，旨在揭示中药复方的作用机制。

1材料与方法

1.1模型的建立雄性健康Wistar大鼠，体重(240±20)g。适应性饲喂1 w后，禁食12 h，将链脲佐菌素临用配成2%浓度溶液，按剂量50 mg/kg左下腹腔内单次注射，72 h后取尾血测血糖，血糖≥16.7 mmol/L作为DM大鼠。适应性喂养3 d后将成模大鼠随机分为模型组、中药组、弥可保组各10只。并取体重、鼠龄相匹配的同批血糖值在正常范围内正常大鼠10只作为正常对照组。连续观察8 w后处死。由于高血糖及并发感染，模型组死亡3只，弥可保组死亡2只，中药组死亡1只。

1.2实验设备AnkeTDL-5-A型离心机(上海医疗器械有限公司)，GC-911-r-放射免疫计数器(中国科技大学实业总公司)，FASCO-3010全自动血液流变快测仪(重庆大学维多生物工程研究所)。

1.3药品及试剂益气活血通络方组成药物(黄芪、桂枝、生地、水蛭)均购于长春市同仁堂药房，长春中医药大学王淑敏教授鉴定，煎制成2 g/ml，置4℃冰箱保存备用。cAMP、cGMP放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所，批号121020、121026)。

1.4血液流变学检测大鼠麻醉后，腹主动脉取血，肝素抗凝，应用FASCO-3010全自动血液流变快测仪测定。

1.5大鼠坐骨神经cAMP、cGMP检测大鼠在麻醉状态下，切开双侧股后部皮肤，分离出双侧坐骨神经。剪下后快速放入干冰中保存。在冰浴环境下，将坐骨神经放入盛有2 ml冷的0.05 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.75)的匀浆器内，将组织粉碎后，悬浮液倒入10 ml试管内，用2 ml无水乙醇洗匀浆器，然后将乙醇倒入悬浮液中混匀，静止5 min，3 500 r/min离心15 min，将上清液收集在小瓶内，用2 ml 75%乙醇洗匀浆器和沉淀2次，混匀，3 500 r/min离心15 min，合并上清液，60℃水浴中吹干，残渣放于4℃保存。严格按照试剂测定盒的要求检测。

1.6统计学方法选用SPSS13.0软件进行单因素方差分析和q检验。

2结果

2.1各组大鼠血液流变学变化与正常对照组相比，模型组、中药组、弥可保组大鼠全血度、红细胞聚集指数及刚性指数明显升高(P<0.05)；与模型组相比，中药组显著差异，而弥可保组没有显著差异，见表1。

2.2各组大鼠坐骨神经cAMP、cGMP含量的变化与模型组相比，中药组动物的cAMP、cGMP含量明显升高(P<0.05)；中药组与弥可保组相比无显著差异(P>0.05)，见表1。

表1　各组大鼠血液流变学及CAMP、CGMP变化的比较

与正常对照组比较：1)P<0.01，2)P<0.05；与模型组比较:3)P<0.01，4)P<0.05

3讨论

DM存在着不同程度的血液流变学改变。研究表明，DPN时神经血流灌注减少且神经内膜缺氧，神经微血管也有不同程度的病变发生，这些异常变化的程度与神经病理变化和临床症状程度极为相关。

cAMP、cGMP广泛存在于动物机体的各种组织中。cAMP具有各种调节功能，神经组织中cAMP、cGMP含量下降的同时，Na+-K+-ATP酶的活性也降低，将影响神经的正常动作电位，使神经传导速度减慢。cGMP信号的产生是鸟苷酸环化酶(GC)催化的，其中的一类胞内可溶性环化酶与NO的传导有关，NO有使血管舒张的作用〔9〕。

益气活血通络方由黄芪、水蛭、葛根、生地组成。研究表明，黄芪可扩张血管，改善血行增强机体免疫力；水蛭可抗血栓形成、抗凝血、降血脂、改善血液流变学和微循环；葛根可改善微循环、扩张血管、增加血流、提高局部血流量。本研究结果表明，DM大鼠血液流变性及坐骨神经cAMP、cGMP含量变化。血液流变性改变表现为血黏度升高，红细胞聚集指数及刚性指数发生变化。血液流变性变化的同时伴随神经组织中cAMP、cGMP含量降低，证实了二者的相关性。

益气活血通络方能改善DM大鼠血液流变性，升高神经组织中cAMP、cGMP含量，可能是其促进神经轴突的再生和修复的作用及机制之一。

4参考文献

1苗述楷，蔡惠文.糖尿病并发症防治学〔M〕.北京：中国医药科技出版社，2000：4.

2张文风.益气活血通络法对糖尿病大鼠血清胰岛素、C肽的影响〔J〕.湖南中医杂志，2008；24(6)：98-9.

3张文风.益气活血通络法防治糖尿病周围神经病变的实验研究〔J〕.中医药信息，2008；6：24-5.

4张文风，苏鑫，粟栗.糖尿病大鼠坐骨神经AGEs的表达及益气活血通络方的干预研究〔J〕.上海中医药杂志，2010；44(3)：25-6.

5张文风，朴今哲，苏鑫，等.从血液流变学和神经传导速度评价益气活血通络法对糖尿病周围神经病变的干预作用〔J〕.时珍国医国药，2010；21(2)：686-8.

6李铁成，张文风.糖尿病大鼠坐骨神经传导速度与其超微结构的相关性及益气活血通络中药的干预研究〔J〕.时珍国医国药，2010；21(7)：1657-9.

7张文风，钟慧群，汪勤.糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及其调控基因的表达及益气活血通络方的干预研究〔J〕.时珍国医国药，2011；22(4)：1121-3.

8钟慧群，张文风，苏鑫，等.糖尿病大鼠糖化血清蛋白与AGES的相关性及中药的干预作用〔J〕.时珍国医国药，2011；22(6)：1453-5.

9孙大业.细胞信号传导〔M〕.第3版.北京：科技出版社，2003：124.

〔2014-10-17修回〕

(编辑李相军/滕欣航)