胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪蓝耳病抗体的比对试验

宋忠旭，雷 彬，李良华，孙 华，彭先文，梅书棋，李明波，陈明银，吴 飙

（1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，湖北 武汉 430064；2.武汉市江夏区畜牧兽医局，湖北 武汉 430200；3.通城县畜牧兽医局，湖北 咸宁 437400）

胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪蓝耳病抗体的比对试验

宋忠旭1，雷 彬1，李良华1，孙 华1，彭先文1，梅书棋1，李明波1，陈明银2，吴 飙3

（1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，湖北 武汉 430064；2.武汉市江夏区畜牧兽医局，湖北 武汉 430200；3.通城县畜牧兽医局，湖北 咸宁 437400）

胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体的结果中强阳性、中阳性、弱阳性、阴性分别为48.67%、18.58%、31.86%、0.88%，检测猪蓝耳病抗体合格率99.12%；ELISA检测猪蓝耳病抗体合格率95.58%，符合率为96.43%。胶体金免疫层析试纸条能够评价猪蓝耳病疫苗临床免疫状况，可进行猪蓝耳病抗体的定性检测。

猪蓝耳病；胶体金免疫层析试纸条；ELISA ；抗体比对

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪繁殖障碍、呼吸系统疾病、高热和神经症状为特征的传染病，是影响养猪生产的最重要疫病之一[1]。

结合前期猪群PRRS临床流行病学、PRRSV感染和抗体状况的监测分析，我们确定母猪免疫方案是产后3周接种猪蓝耳病JXA-1R活疫苗，并与猪瘟疫苗间隔1周以上。为了验证免疫效果，用IDEXX公司ELISA试剂盒进行血清抗体检测，同时，进行了胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体的比对试验，现将试验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 血清样本的采集

抽样113头免疫猪蓝耳病疫苗后3～4周的成年母猪，前腔静脉采血，离心血液，将同一头猪的血清分成2份，一份用于ELISA检测猪蓝耳病抗体，另一份用于胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体。

1.2 ELISA检测猪蓝耳病抗体

将用于ELISA检测的血清，冷藏送至华中农业大学，用美国IDEXX公司ELISA试剂盒进行检测，依据标准为国家生猪产业技术体系方法，IDEXX：S/P≥0.4判定为阳性；S/P＜0.4判定为阴性。

1.3 胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体

1）胶体金免疫层析试纸条，由河南省农业科学院动物免疫学重点实验室提供，密封、干燥、4 ℃保存。

2）将试纸条从冰箱中取出，待其恢复至室温再打开密封使用。

3）根据已编号的待检血清样品份数取出稀释杯，每杯加入200µL（约7滴）的稀释液，取1µL的待检样品加入对应的稀释杯中混匀，1∶200稀释样品，取出试纸卡编号、平放，取稀释好的样品溶液100µL（约4滴）加入相应的试纸卡样品中，静置5～10 min后观察结果。

4）结果判定：对照样品 阳性对照应出现两条红线（检测线和质控线），阴性对照只出现一条红色质控线。

被检样品 视窗区出现两条红色线（检测线和质控线），检测线明显强于质控线时判为强阳性，可记为“+++”；检测线与质控线显色强度相当时判为中阳性，可记为“++”；检测线明显弱于质控线时判为弱阳性，可记为“+”；只出现一条红色质控线时判为阴性，可记为“-”；质控线不显红色时，表示操作有误或试纸失效。

2 结果

胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体，结果如表1。胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体与ELISA法检测猪蓝耳病抗体，比对结果见表2。

表1 胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体结果

表2 胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体与ELISA法检测猪蓝耳病抗体比对结果

3 讨论

1）胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体的结果中强阳性、中阳性、弱阳性、阴性分别为48.67%、18.58%、31.86%、0.88%，说明胶体金免疫层析试纸条能够评价猪蓝耳病疫苗临床免疫状况，为猪蓝耳病免疫提供参考。

2）胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体合格率99.12%，ELISA检测猪蓝耳病抗体合格率95.58%，胶体金免疫层析试纸条比ELISA法检测猪蓝耳病抗体敏感，与金颜辉等的结果不一致[2]，与刘凯等的结论不一致[3]，影响胶体金标记蛋白质质量的因素很多[4]，说明胶体金免疫层析试纸条还需要进一步调整和完善，但是，胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体与ELISA检测猪蓝耳病抗体符合率为96.43%，说明胶体金免疫层析试纸条可以进行猪蓝耳病抗体的定性检测。

3）胶体金免疫层析试纸条可用于检测猪蓝耳病毒感染或活疫苗免疫后血清抗体，只要知道猪群蓝耳病的免疫背景，就可以诊断猪群是否感染了猪蓝耳病，是未来畜禽疾病诊断的一种新的手段[5]。

4）产品包含试纸条、样品稀释液、稀释杯、滴管、阳性对照和阴性对照，操作简便。

4 结论

由于胶体金免疫层析试纸条中胶体金标记蛋白质是一物理结合过程，结合牢固，很少引起蛋白质活性改变，所以试剂非常稳定，不受温度等外界因素影响，可随身携带，随时检测，检测结果也可长期保存，能够用于猪血清中猪蓝耳病抗体的定性检测，非常适合于基层兽医和相关技术人员、养殖场户对猪蓝耳病的诊断、抗体水平的快速监测。

[1] 孙淑清，王剑.断奶仔猪蓝耳病的诊治[J].中国兽医科技，2003，33(11)：61-62.

[2] 金颜辉，黄印尧，张长弓，等.应用金免疫层析技术检测猪瘟抗体的研究[J].中国动物检疫，2004，21(5)：26-27.

[3] 刘凯，刘忠清，李文德.牛出血性败血症胶体金免疫层析快速诊断方法的建立[J].动物医学进展，2012，33(11)：134-136.

[4] 黄芬，叶绍辉，龚振明.免疫层析快速诊断试纸条的制备及其应用[J].当代畜牧，2006（8）：20-22.

[5] 张凤珍.免疫胶体金技术的基本原理及其在兽医临床中应用的研究进展[J].畜牧兽医科技信息，2009（1）：7-9.

2015-08-22）

国家科技支撑计划项目(2011BAD28B01-3)、国家生猪产业技术体系项目(CARS-36)、湖北省农业科技创新中心创新团队项目(2011-620-001-003)、湖北省重大人才工程高端人才引领培养计划

宋忠旭（1969-），男，高级畜牧师，研究方向猪育种及生产管理，E-mail:songzx365@163.com

梅书棋（1971-），男，研究员，研究方向猪遗传育种，E-mail:msqlfe@163.com