ADAM10在结直肠癌患者血清中的表达和临床意义

郑佳 盛显仓 吴婧婧 张艳

ADAM10在结直肠癌患者血清中的表达和临床意义

郑佳 盛显仓 吴婧婧 张艳

目的 探讨去整合素-金属蛋白酶10（ADAM10）在结直肠癌患者血清中的表达水平与结直肠癌发生、转移的关系及临床意义。方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测158例结直肠癌患者、98例结直肠息肉患者及110例正常对照组中血清ADAM10、糖类抗原19-9（CA19-9）和癌胚抗原（CEA）浓度。结果 结直肠癌组血清ADAM10水平显著高于结直肠息肉组和对照组（P＜0.001），肿瘤Dukes分期增加，结直肠癌组血清ADAM10水平进行性升高。结直肠癌患者血清ADAM10表达水平与性别、年龄、组织类型无关（P＞0.05），与分化程度、肿瘤的浸润深度、有无淋巴结转移及远处转移密切相关（P＜0.01）。ADAM10联合CEA、CA19-9检测，可以显著提高肿瘤诊断的准确性。结论 ADAM10在结直肠癌的诊断中有临床应用价值，有潜力成为新的肿瘤标志物。

去整合素-金属蛋白酶10 结直肠癌 肿瘤标志物

结直肠癌是常见的消化道肿瘤，其发病率在我国逐年升高，严重威胁人类健康。去整合素-金属蛋白酶10（ADAM10）属于整合素金属蛋白酶，在重塑细胞外基质和细胞迁移中有重要作用［1］。有资料显示，ADAM10能够参与肿瘤细胞转移的病理过程［2］，在胃癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、血液系统恶性肿瘤中的表达水平异常增高［3，4］，但在结肠癌中的表达情况少有报道。本文采用ELISA法探究ADAMl0在结肠癌患者血清中的表达情况及临床意义。报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2010年6月至2014年3月在本院就诊的结直肠癌患者158例，男93例，女65例；平均年龄59.3岁。所有患者均未行放化疗，经病理检查结果证实为结直肠癌。结直肠息肉患者98例，男57例，女41例；平均年龄51岁。经病理检查结果证实为结直肠腺瘤性息肉。正常对照组共110例，男64例，女46例；平均年龄43岁。肠镜检查阴性，各项生化指标正常。

1.2 ADAM10、糖类抗原19-9（CA19-9）和癌胚抗原（CEA）检测 （1）所有对象的血标本，均于次日晨空腹采集静脉血4ml于EDTA真空采血管中，4000rpm离心15min后分离血清，于-80℃保存待测。（2）ADAM10检测试剂盒购自上海晶美生物技术公司，CEA及CA199试剂盒由罗氏公司提供。（3）结直肠癌组、结直肠息肉组及健康对照组ADAM10血清浓度经ELISA方法测定后绘制标准曲线，计算上述三组样本中血清ADAM10浓度。每个样本的最小值重复测量2次，保证变异系数始终＜10%。取结直肠癌组、结直肠息肉组及对照组血清约1ml，采用IMMUL ITE 1000 分析系统（美国DPC公司）分析血清中CEA及CA19-9水平。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清中ADAM10、CEA、CA19-9表达情况 见表1。

表1 三组血清AM10、CEA、CA19-9表达水平比较（x±s）

2.2 结直肠癌患者血清ADAM10水平与Dukes分期关系 结直肠癌患者Dukes A、B、C、D期患者血清ADAM10水平分别为（193.3±20.7） pg/ml、（277.1±28.5）pg/ml、（332.8±31.9） pg/ml、（384.4±36.1） pg/ml。Dukes分期增加，结直肠癌组血清ADAM10表达水平呈进行性上述趋势，结直肠癌患者血清ADAM10表达水平与肿瘤Dukes分期呈正相关（P＜0.05）。

2.3 ADAM10与临床病理参数的关系 见表2。

表2 结直肠癌患者血清ADAM10表达与临床病理参数的关系

2.4 ADAM10、CEA及CA19-9诊断结直肠癌的价值及联合检测的意义 根据试剂盒说明书，确定ADAM10、CEA、CA19-9的临界值分别为150pg/ml、5ng/ml、37U/ml，大于临界值则为阳性。检测结直肠癌组和对照组血清ADAM10、CEA、CA19-9水平，作ROC曲线。结果显示，结直肠癌患者血清ADAM10的ROC曲线下面积显著大于CEA和CA19-9（P＜0.05）。ADAM10、CEA、CA19-9单个指标检测结直肠癌的敏感性分别为43.07%、28.5%、37.3%。三者联合检测结直肠癌的敏感性为60.7%。结果提示，ADAM10联合其他肿瘤标志物检测，能显著增强肿瘤诊断的敏感性。

3 讨论

结直肠癌的临床表现常缺乏典型症状，一旦发现症状多属中晚期。因此，早发现、早治疗是提高该病治愈率的关键。有资料显示，ADAM10在恶性肿瘤中有过表达现象，能与癌症发生发展相关的关键信号分子相互作用［5］。WU等［6］报道ADAM10在肿瘤中表达升高，Black等认为ADAM10在重塑细胞外基质和细胞迁移过程中有重要的作用［1］。据国内外相关研究报道，ADAM10在肿瘤细胞生长、浸润及转移过程中，主要通过自身蛋白酶降解胞外基质蛋白，使癌细胞从肿瘤原发灶中游离出来，并通过自身整合素介导癌细胞与正常细胞反应，介导胞间信号传递，进而促进癌细胞向邻近及远处转移［7］，如ADAM10可通过介导神经型钙粘蛋白（N-cadherin）裂解从而促进胶质瘤细胞迁移［8］。Millichip等［9］研究发现ADAM10能降解基底膜IV型胶原，促进恶性肿瘤转移。另有学者报道ADAM10可以降解淀粉前体蛋白和L1粘附分子，这有利肿瘤细胞突破细胞外基质而利于肿瘤转移［10，11］。本文结果显示Dukes分期增加，结直肠癌患者血清ADAM10水平进行性升高，提示ADAM10的过度表达与肿瘤的发生、生长、浸润、转移有关。单项检测结直肠癌患者血清中ADAM10水平，其敏感性达43.0%，优于CEA和CA19-9。结直肠癌患者血清ADAM10联合CEA及CA19-9检测，诊断敏感性达60.7%，显著高于单项检测（P＜0.05）。传统的肿瘤标志物CEA及CA19-9在结直肠癌组血清中的表达水平较结直肠息肉组和健康组明显升高（P＜0.01）。结直肠癌患者血清ADAM10表达水平与患者的性别、年龄、组织类型无关（P＞0.05），与肿瘤的分化程度、肿瘤浸润深度，有无淋巴结转移及远处转移相关（P＜0.01），提示ADAM10在结直肠肿瘤的生长演化过程中起到重要作用。

1 Black RA, White JM． ADAMs: focus on the protease domain ．Curr Opin Cell Biol, 1998,10(5):654～659．

2 Satsuki Mochizuki, Yasunori Okada． ADAMs in cancer cell proliferation and progression． Cancer sci, 2007, 98(5):621～628．

3 Mazzocca A, Coppari R,De Franco R, et al． A secreted form of ADAM9 promotes carcinoma invasion through tumor-stromal interaction ．Cancer Res, 2005,65(11):4728～4738．

4 Zhao AJ, Zheng MG, Wang GC, et al．Silencing ABCEI increase E-cadherin expression and decrease cell invasion in 95D/NCI-H446 lung carcinoma cells．Prog Biochem Biophys, 2010, 37(8):892～896．

5 Stoeck A, Keller S, Riedle S, et al． A role for exosomes in the constitutive and stimulus-induced ectodomain cleavage of L1 and CD44．Biochem J,2006,393(Pt 3):609～618．

6 Wu E, Croucher PI, McKie N, et al． Expression of members of the novel membrane linked metalloproteinase family ADAM in cells derived from a range of haematological malignancies．Biochem Biophys Res Commun, 1997,235(2):437～442．

7 Rocks N, Paulissen G, Quesada Calvo F, et al． Expression of a disintegrin and metalloprotease (ADAM and ADAMTS) enzymes in human non-small-cell lung carcinomas (NSCLC) ．British Journal of cancer , 2006,94(5):724～730．

8 Kohutek ZA, diPierro CG, Redpath GT, et al． ADAM-10 mediated N-cadherin cleavage is protein kinase C-alpha dependent and promotes glioblastoma cell migration． Neurosci, 2009,29(14):4605～4615．

9 Millichip MI, Dallas DJ, Wu E, et al． The metallodisintegrin ADAM10(MADM) from bovine kidney has type IV collagenase activity in vitro． Biochem Biophys Res Commun, 1998,45(2):594～598．

10 Gavert N, sheffer M, Raveh S, et al． Expression of L1-CAM and ADAM10 in human colon cancer cells induces metastasis． Cancer Res, 2007, 67(16):7703～7712．

11 Kohga K, Takehara T, Tatsumi T,et al． Anticancer chemotherapy inhibits MHC class I-related chain． A ectodomain shedding by down regulating ADAM10 expression in hepatocellular carcinoma． Cancer Res, 2009, 69(20):8050～8057．

Objective To investigate the relationship between the expression lever of ADAM10 in serum of patients with occurrence and metastasis of colorectal carcinoma，and analyse its clinical significance. Methods Serum samples from 158 patients with colorectal cancer，98 patients with colorctal polyps and 110 healthy human were detected by double antibody sandwich ELISA method. At the same time，to determine the serum CA19-9，CEA evels in specimens. Results ADAM10 level in colorectal cancer patients was significantly higher than that patients with colorctal polyps and normal control.（P＜0.001）.Following with the increased Dukes stage，the serum ADAM10 level was increased. Serum ADAM10 level in the colorectal carcinoma was correlated with the differentiation，infiltration extent，lymphoid node diversion，distant metastasize（P＜0.01），and it was no relationship with the sex，age，structure type（P＞0.05）. ADAM10 combinations of CEA and CA19-9 can increased the positive diagnosis rate of tumor. Conclusion ADAM10 has a certain clinical value in diagnosis of colorectal cancer，has the potential to become a nover tumor marker.

ADAM10 colorectal cancer tumor marker

浙江省台州市黄岩区基金（2011062-3）

318020浙江省台州市第一人民医院消化内科