液相色谱仪示差折光率检测器的检定*

何海红，何雅娟，王卫华

(中国计量科学研究院化学与分析研究所，北京 100029)

液相色谱仪示差折光率检测器的检定*

何海红，何雅娟，王卫华

(中国计量科学研究院化学与分析研究所，北京 100029)

以配置日本岛津制作所生产的RID-10A示差折光率检测器的液相色谱系统的检定为例，介绍了按照新版液相色谱仪检定规程JJG 705-2014的要求对液相色谱仪示差折光率检测器进行检定的过程。说明了检定方法更改的原因、新方法的优点及所解决的问题，总结了检定过程中的注意事项。

液相色谱仪；检定规程；示差折光率检测器

示差折光率检测器（RID）是通用型检测器［1］，常用于检测没有紫外吸收或无发色基团的物质，如醇类［2-5］、糖类与防腐剂［6］、聚合物［7］等，其原理是通过连续测定参比池和测量池中溶液的折光率之差(样品流路和参比流路之间折光率的变化)来测定样品的含量，只要样品组分与流动相的折光率不同就可以被检测，二者折光率相差越大，检测器对该样品灵敏度越高［8］。但是RID检测器不能进行梯度洗脱，而且对温度非常敏感，因为室温的变化会影响基线的稳定性。

新版液相色谱仪检定规程JJG 705-2014［9］（于2014年8月14日实施）中更改了RID的检定方法，主要原因如下：（1）在实际的检定工作中经常碰到客户配置该检测器而又不用来检测糖类物质或者不使用的情况，但是客户要保留这方面的测量能力，所以必须要对该检测器进行检定，按照旧规程［10］的要求需使用纯水作为流动相，这样难免会遇到客户缺少可以使用纯水作流动相的色谱柱的情况，从而导致检定工作变得困难，不得不采取其它方式解决或者强制采用普通C18色谱柱，这些做法都存在隐患；（2）笔者经过长时间的实验发现，RID对于胆固醇样品的最小检测浓度约为10-6g／mL，与丙三醇最小检测浓度相当。鉴于以上两点，为了方便检定工作，在新规程中更改了检定方法。

1 主要仪器与试剂

液相色谱系统：LC-20AT型，配置RID-10A型示差折光率检测器，日本岛津制作所；

甲醇：色谱纯，德国Merk公司；

甲醇中胆固醇溶液：200 µg／mL，编号为GBW(E) 130405，不确定度为2.0%（k=2）；

甲醇中胆固醇溶液：5.0 µg／mL，编号为GBW(E) 130406，不确定度为5.0%（k=2）。

2 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱（50 mm×4.6 mm，3.5μm）；流动相：甲醇；流量：1.0 mL／min；柱温箱温度：35℃；检测池温度：40℃；进样体积：20 μL。

3 RID检定

3.1 检定方法

（1）以甲醇为流动相（流动相需提前用超声波震荡器脱气约10 min），并将色谱柱安装到柱温箱中；

（2）连接色谱工作站后进入检测器参数设定部分，设定检测池温度；

（3）进入柱温箱参数设定界面，设定柱温箱温度；

（4）设定泵流量并运行，然后冲洗参比池，等仪器达到稳定状态后（约需60 min），停止冲洗参比池，准备进样；

（5）定性定量重复性检定。用200 µg／mL甲醇中胆固醇溶液标准物质进行定性定量重复性检定，连续进样7次，每次进样20 μL，取连续6次数据作为定性定量重复性数据，记录每次进样中胆固醇色谱峰的保留时间和峰面积，分别计算保留时间和峰面积测定结果的的相对标准偏差；

（6）用5.0 µg／mL甲醇中胆固醇溶液标准物质进行最小检测浓度检定，连续进样3次，每次进样20 μL，记录每次进样中胆固醇的色谱峰高，取3个峰高的平均值作为最终峰高值；

（7）按照色谱条件，不进样，采集30 min空白基线，记录色谱图。

3.2 检定数据

3.2.1 定性定量重复性数据

利用200 µg／mL甲醇中胆固醇溶液标准物质对RID-10A型示差折光率检测器进行定性定量重复性［11］检定，色谱图见图1，色谱峰面积及保留值数据见表1。

图1 定性定量重复性色谱图

表1 定性定量重复性检定数据

3.2.2 最小检测浓度数据

利用5.0 µg／mL甲醇中胆固醇溶液标准物质对RID-10A型示差折光率检测器进行最小检测浓度检定，色谱图见图2，色谱峰高数据见表2，根据式(1)计算最小检测浓度，检定结果见表3。

图2 最小检测浓度色谱图

表2 最小检测浓度峰高数据

式中：cL——最小检测浓度，g／mL；

Nd——基线噪声峰高，mV；

c——标准溶液浓度，g／mL；

V——进样体积，μL；

20——系数，μL；

H——标准物质色谱峰高，mV。

表3 最小检测浓度检定结果

3.2.3 检测器的噪音、漂移数据

对RID-10A型示差折光率检测器进行检测器噪音与漂移检定，检定数据见表4，色谱图分别见图3、图4。

表4 RID-10A示差折光率检测器噪音、漂移数据

图3 RID-10A示差折光率检测器噪音色谱图

图4 RID-10A示差折光率检测器漂移色谱图

4 注意事项

（1）示差折光率检测器检定过程中，由于检定机构配制溶液所用的甲醇试剂与现场流动相所用的甲醇试剂有差别，这就导致色谱图中有一个大的溶剂峰，该峰会对积分结果有影响。目前色谱工作站均可以进行积分事件的设定，把积分开始时间设定在溶剂峰之后就可以保证积分结果不会产生误差。

（2）胆固醇样品在不同厂家的仪器上重复性都很好，仪器状态正常情况下进样7次即可满足要求。

（3）胆固醇样品在色谱柱内保留较强，所用色谱柱长度不宜超过150 mm，这样可以保证出峰时间在10 min以内。

（4）RID检测器对温度变化比较敏感，所以必须设定柱温箱温度，一般原则是柱温箱温度要比室温高约10℃，与检测池温度相近。

（5）现场检定之前最好用甲醇试剂预先冲洗参比池，在1.0 mL／min的流量下冲洗约1 h。

［1］于世林.高效液相色谱方法及应用［M］.北京：化学工业出版社，2005: 36-37.

［2］戴传波.采用带示差折光检测器的高效液相色谱法检测肌醇［J］.化学工业与工程技术，2006，27(4): 57-58.

［3］戴传波.示差折光检测法检测肌醇含量［J］.食品工业科技，2007，2007(4): 222-223.

［4］李风华.液相色谱法测定山梨醇等几种多元醇的含量［J］.当代化工，2008，37(6): 669-671.

［5］顾艳杰.甘露醇注射液中甘露醇的含量测定［J］.中国卫生产业，2012，29(4): 108.

［6］徐烨.高效液相色谱法测定饮料中防腐剂和甜味剂［J］.分析检测，2008，29(6): 339-341.

［7］霍芳.高效液相色谱-示差折光检测技术研究进展［J］.家畜生态学报，2013，34(7): 81-83.

［8］张庆合.高效液相色谱实用手册［M］.北京：化学工业出版社，2008: 90-101.

［9］JJG 705-2014 液相色谱仪检定规程［S］.

［10］JJG 705-2002 液相色谱仪检定规程［S］.

［11］汪正范.色谱定性与定量［M］.北京：化学工业出版社，2000: 17-19.

微生物污染成食品安全首要问题

在国家食品药品监督管理总局指导下，中国食品科学技术学会与几十名包括院士、教授等在内的专家联合发布2014年国内外食品安全热点问题解读报告。报告显示，微生物污染成为2014年食品安全首要问题。

报告显示，2014年，食品安全恶意造假事件受到扼制并开始逐渐减少，微生物污染、重金属超标及原料污染等常态食品安全事件成为主要的食品安全问题，并且这一类问题将是未来我国食品工业面临的主要问题。38个热点共涉及肉制品等12个主要行业，其中出现频次较高的行业包括6个：肉制品、白酒、休闲食品、油脂、主粮、乳制品；38个热点涉及到的关键词主要包括7类：微生物、食品添加剂、重金属、转基因、塑化剂、地沟油、反式脂肪酸。微生物污染首次列为第一热点。有专家指出，这显示出公众对食品安全的关注点正逐渐回归中国食品安全的本源，与全球食品安全面临的问题相吻合。

对于未来食品行业的发展，专家们指出，影响中国食品安全的主要因素——由于环境污染引发的我国产品原料污染等问题尚未有效化解。而原料污染必然传导到食品工业，且这种困局短期内难以有效化解。食品安全应下功夫从产业链前端发力，从优质原料入手。

（ 中国分析计量网）

欧盟成功研制工业污染毒素检测装置

欧盟第七研发框架计划(FP7)提供270万欧元资助，总研发投入350万欧元，由欧盟5个成员国荷兰(总协调)、德国、瑞典、捷克和斯洛伐克科技人员参与组成的欧洲SYSTEQ研发团队，从2009年2月开始，利用先进的生物基因标记技术，成功研制开发出更准确的工业污染毒素检测装置。

SYSTEQ研发团队首先开发出工业污染物系统性毒素参照(TEQs)用于毒理学评估，并在此基础上确认毒素新的生物基因标记。进而通过生物基因表记与口服毒性标记的比较研究，通过大量的反复实验，从TEQs确认的生物基因标记中优化筛选出被称作为AHRR的基因标记，同时证实被称作CYP1A1的基因，也可作为人体毒素的检测标记。

研发团队利用AHRR生物基因表记对人体毒素和实验动物类毒素之间的差异进行了研究，发现人类相对实验动物类对DLCs毒素具有更低的敏感性，意味着传统上基于实验动物类口服毒性标记的毒素检测被高估。

研发团队已在国际著名学术刊物上发表6篇科学论文，并为其新的检测装置申请了发明专利。研究成果已向欧委会提出申请，有可能成为新的全球工业污染毒素检测标准。

(中国化工仪器网)

Verification of the Differential Refractive Index Detector in Liquid Chromatographs

He Haihong, He Yajuan, Wang Weihua
(Chemical Metrology & Analytical Science Division, National Institute of Metrology, Beijing 100029, China)

A detailed interpretation about the verification of RID-10A type differential refractive index detector produced by SHIMADZU in liquid chromatographs as an example, the process was introduced to verify the differential refractive index detector of HPLC by the new verification regulation of liquid chromatographs JJG 705-2014. The reason of changes of the verification method was given and the advantages were introduced. A summary of the matters need to be attention for verification officers was made.

liguid chromatograph; verification regulation; differential refractive index detector

O657.7

A

1008-6145(2015)02-0095-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.02.028

*国家重大科学仪器设备开发专项(2013YQ51039104)

联系人：何海红；E-mail: hehh@nim.ac.cn

2015-01-29