均匀设计法优选金锁二仙口服液的提取工艺

韩晓丽，刘光斌，毛和平，谢六生，任远

（1.嘉峪关市酒钢医院，甘肃735100；2.甘肃中医学院，甘肃兰州730000）

均匀设计法优选金锁二仙口服液的提取工艺

韩晓丽1，刘光斌1，毛和平1，谢六生1，任远2

（1.嘉峪关市酒钢医院，甘肃735100；2.甘肃中医学院，甘肃兰州730000）

目的探讨优选金锁二仙口服液的提取工艺。方法采用均匀设计法安排试验，以加聚乙二醇400（PEG400）的浓度、提取时间、溶剂用量、提取次数4项指标作为考察因素，以总黄酮提取量作为考察指标，优化提取工艺。结果最佳提取工艺：以PEG400浓度为2.8%的水溶液提取，提取60 min，提取2次，每次7倍量。结论提取工艺合理、可行，适合金锁二仙口服液生产的需要。

二仙汤/治疗应用；口服液；黄酮类/分离和提纯；中药制药工艺；均匀设计

金锁二仙口服液是根据酒钢医院经验方[1-3]自行研制的中药制剂。由金樱子、锁阳、淫羊藿、仙茅等药材组成，具有补肾固精之功效。临床用于阳痿、早泄、射精无力、性欲低下、腰膝酸软或酸痛、疲乏困倦等疾病的治疗。为了保证该制剂内在质量和临床疗效稳定性，本文采用均匀设计优选7味药材的提取工艺，从而综合考虑选择金锁二仙口服液的生产工艺。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器756紫外可见分光光度计（上海奥谱勒仪器有限公司），AUW120D型电子分析天平（日本岛津，1/ 10万），超纯水仪（杭州天创净水设备有限公司）。

1.1.2 试药芦丁对照品[批号：100080-200707，供紫外线（UV）法含量测定用，含量为92.5%]，购自中国药品生物制品检定所。水为超纯水，其他试剂均为分析纯。药材均购自甘肃省酒泉市培丰中药材生态种植加工公司，经嘉峪关药品检验所中药室鉴定符合2010版《中华人民共和国药典》药材项下标准规定。

1.2 方法

1.2.1 方法学验证

1.2.1.1 测定波长的选择用芦丁对照品溶液（0.104 mg/mL），随行试剂为空白，在波长200～700 nm下扫描。

1.2.1.2 标准曲线的制备取芦丁对照品约10.0 mg，精密称定，适量乙醇溶解后置于100 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液0、1、2、4、6、8、10 mL置于10 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。以第1个样品为空白，于359 nm处测定各对照液吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标回归分析，得回归方程。

1.2.1.3 精密度试验取最低浓度标准液（10.4 μg/mL）依法测定其吸收度（n=5），计算RSD。

1.2.1.4 供试品溶液的制备取5.0 g聚酰胺装柱（长30.0 cm，内径1.8 cm），精密称取供试品0.2 g，干法上柱，用5 mL纯化水润湿聚酰胺柱上部，3 h后再加纯化水5 mL，使柱底部聚酰胺完全润湿，过夜。先用纯化水洗至洗脱液无色，再用50mL乙醇以1mL/min速度洗脱，洗脱液收至50 mL容量瓶中，乙醇定容，备用。

1.2.1.5 重复性试验精密称取同一样品6份，每份0.2g，依法独立测定吸收度，计算RSD。

1.2.1.6 加样回收率试验精密称取同一样品6份，每份0.2 g，精密加入芦丁对照品适量（已知含量的80%、100%、120%），照供试品溶液制备方法制备样品溶液，测定，计算平均回收率、RSD。

1.2.1.7 样品溶液稳定性试验取同一样品溶液，分别在0、1、2、3、4 h测定其吸收度，计算RSD。

1.2.1.8 样品含量测定分别取样品按1.2.1.4项制备样品溶液，测定吸光度，计算样品总黄酮含量。

1.2.2 提取工艺优选

1.2.2.1 药材吸水率测定测定药材吸水率，以确定提取用水的最低水平值。按处方比例称取药材200 g，加水8倍浸泡，每隔30 min观察1次浸透情况，直至药材浸至透心，滤出未被吸收的水液，称量湿药材，按公式得吸水率：

1.2.2.2 因素及水平选择以影响提取结果的聚乙二醇400（PEG400）浓度（A）、溶剂用量（B）、提取时间（C）、提取次数（D）等为主要参数，根据吸水率结果及药材中成分性质，设定因素水平，见表1。

表1 各因素水平情况

1.3 数据处理[4-5]应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，以Backword方式进行多元线性回归。P＜0.05为差异有统计学意义。

1.2.3 工艺条件验证通过重复试验将得到的最佳工艺条件进行验证，采用试验确定的最佳工艺评价体系考察工艺的稳定性。

2 结果

2.1 方法学验证

2.1.1 测定波长的选择结果供试品溶液与对照品溶液均在359 nm波长处有最大吸收，与文献[6]报道的360 nm相近，确定测定波长为359 nm。

2.1.2 标准曲线的制备回归方程A=12.953 0C+0.0058，R2=0.999 7（n=6），线性范围10.4～104.0 μg/mL。

2.1.3 精密度试验RSD为0.81%。

2.1.4 重复性试验RSD为1.68%。

2.1.5 加样回收率试验平均回收率为100.32%，RSD为1.34%。

2.1.6 样品溶液稳定性试验4 h内RSD为1.61%。

2.2 提取工艺优选

2.2.1 药材吸水率测定计算出本处方药材吸水率为220%。

2.2.2 试验安排及结果采用均匀设计法[7]，用U5（54）表安排试验，试验安排及结果见表2。以总黄酮提取量为因变量Y，PEG400浓度（A）、总提取时间（B）、溶剂总量（C）、提取次数（D）为自变量，得回归方程为Y=12.289+ 5.532C+1.276A（F=345.2，P＜0.05），由回归方程可知，PEG400浓度、溶剂总量对试验结果有显著影响，总提取时间、提取次数对结果影响无显著性。金锁二仙口服液的提取工艺：取处方量药材，用PEG400浓度为2.8%的水溶液提取，每次用7倍量溶剂，提取60 min，共提取2次，合并提取液，即得。

表2 实验安排及结果

2.3 工艺条件验证优化工艺条件总黄酮提取量高于优化试验时的任何一组，而且结果比较接近，提示所得工艺条件不但可行而且比较稳定。见表3。

表3 工艺条件验证表

3 讨论

处方中金樱子[8]、锁阳[9]、淫羊藿[10]、仙茅[11]、巴戟天[12]、当归、甘草7味药材中的多糖类在水中溶解度较大，苷类、黄酮类等成分在水中也有一定的溶解度，因此可用大量水进行回流提取，但部分黄酮类在水中溶解度较小，该部分成分在浓缩时随水的蒸发会以沉淀形式析出，采用药用级PEG400作为潜溶剂与水组成混合溶液提取，既可保证多糖的提取，又可防止水中溶解度较小成分析出。

由于混合溶剂的溶解范围很广，可将药材中的果胶、淀粉、蛋白质等大分子杂质随黄酮及其苷类同时被提取出来，因此以出膏率作为评价指标不太严谨。鉴于本处方药材中黄酮及其苷类为主要的有效成分，因此选用总黄酮作为指标评价提取工艺较为科学。

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[2]杜维祥，沈世林，赵红云，等.金锁二仙饮对雄性肾虚大鼠性欲的调节[J].中医研究，2010，23（8）：11-13.

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Optimization of extraction technique for Jinsuoerxian oral liquid by uniform design

Han Xiaoli1，Liu Guangbin1，Mao Heping1，Xie Liusheng1，Ren Yuan2
（1.Jiayuguan Jiugang Hospital，Gansu 735100，China；2.Gansu Chinese Traditional Medical College，Lanzhou，Gansu 730000，China）

Objective To optimize extraction technique for Jinsuoerxian oral liquid.Methods It was adopted uniform design method and 4 pramaters such as the PEG400 concentration，extraction time，solvent dosage and extraction fredquency as the survey factors，as well as general flavone extraction dosage as the survey pramater to optimize extraction technique.Results The extraction technique of 2.8%PEG400 concentrations was optimum，extracting 60 min，two times，each time with an amount of 7 times.Conclusion sThe extraction technique is reasonable and feasibile，which meets the requirements of industrial production of Jinsuoerxian oral liquid.

ERXIAN decoction/therapeutic use；Peroral liquids；Flavones/isolation&purification；Pharmaceutical technology；Uniform design

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.03.006

A

1009-5519（2015）03-0335-02

2014-09-02）

韩晓丽（1968-），女，甘肃嘉峪关人，主管药师，主要从事医院制剂药品工作；E-mail：jgyylgb@sina.com。