乌骨通胶囊对去卵巢大鼠血清肿瘤坏死因子-α和胰岛素样生长因子-1的影响

郑文奎　刘春颖李　頔　高文山　藏卫东曹广民杨照宇(河北大学附属医院，河北　保定　07000)



乌骨通胶囊对去卵巢大鼠血清肿瘤坏死因子-α和胰岛素样生长因子-1的影响

郑文奎刘春颖1李頔高文山藏卫东2曹广民3杨照宇4
(河北大学附属医院，河北保定071000)

〔摘要〕目的观察金乌骨通胶囊含药血清对去卵巢大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、胰岛素样生长因子(IGF)-1表达的影响。方法选用6月龄SD雌性大鼠60只，随机分成6组。即假手术组、模型组、金乌骨通胶囊高、中、低剂量组以及尼尔雌醇阳性对照组。按组别灌胃给药，24 w后处死，分别测定动物血清TNF-α和IGF-1含量。结果模型组与假手术组比较，血清TNF-α明显升高(P＜0. 05)，IGF-1明显降低(P＜0. 01)。金乌骨通胶囊高、中剂量组与模型组比较，TNF-α明显降低，IGF-1明显增加(P＜0. 05)。结论金乌骨通胶囊对大鼠骨质疏松的治疗作用可能是通过影响TNF-α和IGF-1来实现的。

〔关键词〕金乌骨通胶囊;去卵巢;肿瘤坏死因子-α;胰岛素样生长因子-1

1河北大学医学部2保定市莲池区五尧乡卫生院

3容城县医院4蠡县医院

第一作者:郑文奎(1975-)，男，硕士，副主任医师，主要从事骨科疾病研究。

绝经后骨质疏松(PMOP)是一种老年妇女的常见病。因为雌激素水平的降低，使骨组织显微结构发生蜕变，骨量丢失，骨骼脆性增加〔1〕。近年来有文献报道肿瘤坏死因子(TNF)-α和胰岛素样生长因子(IGF)-1等细胞因子与骨的形成、吸收和代谢有密切关系，调节着骨代谢过程中成骨细胞和破骨细胞的分化、增殖与功能活性〔2〕。本课题组在前期实验过程中发现，金乌骨通胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松有明显的预防作用，本研究探讨其对去卵巢大鼠血清TNF-α以及IGF-1的影响。

1　材料与方法

1. 1药物及试剂金乌骨通胶囊:其内容物所含主要成分为金毛狗脊、乌梢蛇、淫羊藿、土牛膝、葛根、威灵仙、补骨脂、土党参、姜黄、木瓜等，由贵州神奇制药有限公司制备(国药准字: Z20025151，批号20120620);尼尔雌醇(北京四环制药有限公司生产);戊巴比妥钠(上海化学试剂采购供应站分装厂生产); TNF-α放射免疫测定试剂盒(上海西唐生物科技有限公司进口分装); IGF-1放射免疫测定试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司生产);血清雌二醇放射免疫测定试剂盒(天津德普生物技术和医学产品有限公司生产)。

1. 2动物及分组6～9月龄未交配的雌性SD大鼠(由河北医科大学动物中心提供)60只，清洁级;体重(250±20)g，所有动物均喂养于河北大学医学部SPF实验室中。自由摄食和饮水，使用标准饲料，其中钙含量1. 33%，磷含量0. 95%。随机分成假手术组、模型组、金乌骨通胶囊低、中、高剂量组及尼尔雌醇组。

1. 3大鼠模型建立模型组:雌性大鼠在实验室适应性饲养7 d后，各组大鼠均用3%戊巴比妥钠按0. 1 ml/100 g行腹腔注射麻醉，俯卧位固定，在背部中1/3处剪毛，用碘酒、酒精局部消毒皮肤，于末肋下1 cm水平与脊柱外侧2 cm交叉处，向下做2～4 cm纵形切口，将皮肤先牵向一侧，切开筋膜，钝性分离肌肉，进入腹膜后，在子宫角上用线结扎输卵管，切断输卵管，提起卵巢(呈深粉红色颗粒状)，丝线结扎其周围相连组织，切除卵巢，缝合腹膜切口。用同样方法操作对侧，缝合皮肤切口。假手术组:手术方法同上，但不切断输卵管，不切除卵巢，仅摘除相当于卵巢大小的肠系膜。

1. 4给药手术建立模型12 w后开始给药:假手术组和模型组按3 ml·kg－1·d－1灌服生理盐水;金乌骨通低、中、高剂量组按0. 5、1. 0、2. 0 g·kg－1·d－1灌服金乌骨通;尼尔雌醇组按1. 0 mg·kg－1·w－1灌服尼尔雌醇。

1. 5血清生化指标测定大鼠股动脉采血，用放射免疫分析法测定各组大鼠血清TNF-α和IGF-1的水平。具体操作按试剂盒说明进行。

1. 6统计学方法使用SPSS13. 0软件进行单因素方差分析及LSD法。

2　结果

2. 1金乌骨通胶囊对各组大鼠TNF-α的影响与假手术组比较，模型组的TNF-α水平明显升高(P＜0. 01)，与模型组比较，金乌骨通胶囊中、高剂量组及尼尔雌醇组TNF-α水平均明显降低(P＜0. 01)，金乌骨通胶囊中、高剂量组间无显著差异(P＞0. 05)，但与低剂量组比较有显著差异(P＜0. 05)。见表1。

2. 2金乌骨通胶囊对各组大鼠IGF-1的影响与假手术组比较，模型组IGF-1水平明显降低(P＜0. 01)，与模型组比较，金乌骨通胶囊各剂量组及尼尔雌醇组IGF-1水平均明显增加(P＜0. 05)。见表1。

表1　各组大鼠TNF-α、IGF-1水平比较(x±s)

3　讨论

PMOP的主要病因是性激素分泌的不足〔2〕，性激素替代治疗(HT)的方法虽然可以治疗PMOP，但长期使用可能增加患乳癌和子宫内膜癌的风险，使HT受到限制〔3〕。因此，寻求更为安全有效的防治药物成为对PMOP研究的重要课题。中医药防治PMOP有显著疗效、副作用小，已引起学术界的普遍重视。

《素问·至真要大论》曰:“诸风掉眩，皆属于肝;诸寒收引，皆属于肾;诸气郁，皆属于肺;诸湿肿满，皆属于脾。”肺主气，脾为生气之源，肾为气之根，因而气虚常与肺、脾、肾有关。PMOP的发病与肾之精气亏虚有十分密切的关系，骨生长的物质基础主要依赖精气血津液，功能活动取决于肾的阴阳平衡。肾为藏精之所、津液之主、生气之源，肾阴、肾阳为调控全身代谢平衡之本。故防治骨质疏松的基本立足点在于补肾，从肾气、肾精、肾阴、肾阳等方面入手有所不同，疗效机制也各不相同。金乌骨通胶囊是少数民族苗药的经典配方，处方成分由金毛狗肾、乌梢蛇、补骨脂、淫羊藿、威灵仙、姜黄、土党参、土牛膝、木瓜、葛根等10味药组成。组方中:金毛狗肾去风湿、补肝肾、强腰膝，具有很好的强腰健膝作用;乌梢蛇祛风除湿、通络止痉，具有抗炎、镇痛、镇静、抗惊厥的作用;补骨脂补肾壮阳、固精纳气;淫羊藿补肾壮阳、强筋骨、去风湿;威灵仙通络、止痛、为治疗风湿痹痛、肢体麻木、筋脉拘挛、屈伸不利的药物，此五药为主药。姜黄、土党参、土牛膝、木瓜、葛根为辅药，从破血行气、补中益气、活血化瘀、舒筋活络、发散表邪等方面增强组方作用。诸药配合，补中有通，标本兼治，发挥了较好的防治骨质疏松的作用。

近年来随着细胞生物学和分子生物学研究的不断深入，细胞因子在骨代谢方面的作用越来越受到人们的重视。其中TNF-α、IGF-1正是两种在骨质疏松中发挥重要作用的细胞因子。TNF-α作用表现为刺激破骨前体细胞的增殖和分化，也可抑制成骨细胞碱性磷酸酶的生成，抑制骨形成和钙化〔4〕。有学者认为，雌激素抗骨吸收的作用是通

过抑制TNF-α等骨吸收因子的分泌而实现的〔5〕。IGF-1具有明显的促进成骨细胞及成软骨细胞分化和增殖的作用，它介导参与了生长激素、雌激素、前列腺素、甲状旁腺素、1，25(OH)2D3等多种激素的促骨生长及骨形成作用，在骨的生长、修复及骨质疏松的发生中起重要作用〔6～8〕。本实验结果显示，提示金乌骨通胶囊可能通过影响TNF-α、IGF-1等细胞因子的作用而发挥防治骨质疏松的作用。

4参考文献

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3朱太咏，石印玉，张戈，等．补肾益精方提高卵巢切除大鼠骨质疏松模型松质骨骨质量的实验研究〔J〕．中国中西医结合杂志，2001; 21(9): 688-91．

4 Kuroki T，Shingu M，Koshihara Y，et al．Effects of cytokines on alkaline phosphatase and osteocalcin production，calcification and calcium release by human osteoblastic cells〔J〕．Br J Rheumatol，1994; 33(3): 224-30．

5 Girasole G，Jilka RL，Passeri G，et al．17 beta-estradiol inhibits inter-leukin-6 production by bone marrow-derived stromal cells and osteoblasts in vitro: a potential mechanism for the antiosteoporotic effect of estrogens 〔J〕．J Clin Invest，1992; 89(3): 883-91.

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7 Cascio S，Bartella V，Garofalo C，et al．Insulin-like growth factor 1 differentially regulates estrogen receptor-dependent transcription at estrogen response element and AP-1 sites in breast cancer cells〔J〕．J Biol Chem，2007; 282(6): 3498-506．

8 Sudo N，Shimizu T，Kawashima C，et al．Insulin-like growth factor-I(IGFI)system during follicle development in the bovine ovary: relationship among IGF-I，type 1 IGF receptor(IGFR-1)and pregnancy-associated plasma protein-A(PAPP-A)〔J〕．Mol Cell Endocrinol，2007; 264(1-2): 197-203．

〔2014-03-10修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)

通讯作者:高文山(1968-)，男，硕士，主治医师，教授，主要从事骨科疾病研究。

基金项目:2012年保定市科学技术研究与发展指导计划(12ZF122)

〔文章编号〕1005-9202(2015)20-5719-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 016

〔文献标识码〕A

〔中图分类号〕R7