凝胶法检测新生儿溶血病免疫性抗体的临床价值分析

王申

河南省安阳市妇幼保健院儿内三科，河南安阳 455000

新生儿溶血病为一种免疫性疾病，主要由母婴血型不合时母体血清中IgG 抗体经由胎盘进入胎儿体内，致使胎儿红细胞被破坏所引发[1]。新生儿溶血症不会对母体来造成任何影响，但胎儿会出现严重贫血、心力衰竭等问题，严重时甚至导致死亡。存活患儿也极易出现运动能力障碍或智力发育低下等后遗症[2]。基于此，积极诊断新生儿溶血症意义重大。试管法为临床传统检测方法，通过直接、间接抗人球蛋白试验及放散试验测定患儿免疫性抗体，但该方法所需时间长、步骤繁琐，且结果可重复性差，容易出现假阴性情况。微柱凝胶法为新型检测方法，有效改善了试管法缺陷，目前已经得到广泛应用。整群选取2011年6月—2014年6月该院85例溶血病疑似新生儿进行研究，探析凝胶法在新生儿溶血病免疫性抗体检测中临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以该院2011年6月—2014年6月所收治85例溶血病疑似新生儿进行研究，其中男48例，女37例，出生时间在4~10 d，平均(8.2±1.3)d。临床表现：32例为高胆红素血症、20例为血红蛋白降低、16例为新生儿黄疸，14例为贫血、3例肝脾肿大。

1.2 检测方法

1.2.1 对照组 试管法：①直接抗人球蛋白试验：生理盐水洗涤新生儿红细胞2 次后配制为浓度5%红细胞盐水悬液。取1 滴配制好的红细胞盐水悬液于干净试管中，加入抗人球蛋白血清，混合均匀后离心1 min，观察凝集反应。②间接抗人球蛋白试验：取3支干净试管，均放入2 滴新生儿血清及1 滴配制好的5%红细胞盐水悬液，由A、B、O 型血液标本制成。发生凝集表示出存在相应抗体。若未凝集，加入4 滴抗IgG 的抗人球蛋白血清，混合均匀后离心，时间为1 min，观察凝集反应。③放散试验。新生儿红细胞洗涤3 次，加入抗A、B 分型血清，混合均匀后进行离心，将上清液去掉后再洗涤3 次，加入一半体积生理盐水。之后放入37℃水浴中放散。将放散液与2%的抗人球蛋白混合，进行离心，观察结果。

1.2.2 观察组 微柱凝胶法：首先对微柱凝胶试剂卡做标记，取50 μL 患儿血清或红细胞放散液，分别加入50 μL 配制好的A、B、O 不同血型、血液标本所制成浓度为0.5%的红细胞盐水悬液，混合均匀。离心1 min 后取出，肉眼观察结果。

1.3 观察指标

比较两种检测方法：①直接抗体、游离抗体、放散试验检出率；②特异性抗体阳性率，包括IgG 抗体、IgG 抗A、IgG 抗B、IgG抗D、IgG 抗E、IgG 抗cE。

1.4 统计方法

采用SPSS17.0 软件处理数据，计数资料用百分率（%）表示，行χ2检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测HDN 免疫性抗体的比较

观察组直接抗人球蛋白试验阳性率为81.2%、抗体游离试验阳性率为87.1%、抗体放散试验阳性率为91.8%，符合率为91.8%；对照组对应阳性率分别为64.7%、70.6%、75.3%、75.3%，观察组阳性率显著高于对照组，对比差异有统计学意义（P＜0.05），详细见表1。

表1 两种方法检测HDN 免疫性抗体比较结果[n(%)]

2.2 HDN 免疫性抗体的特异性检测

两种检测方法对免疫性IgG 抗体、IgG 抗A、IgG 抗B、IgG抗D、IgG 抗E、IgG 抗cE 阳性率接近，比较差异无统计学意义（P＞0.05），详细见表2。

表2 HDN 免疫性抗体特异性检测结果[n(%)]

3 讨论

HDN 是由母婴血型不合所引起免疫性溶血性疾病，人体红细胞表面上分布有多种抗原系统，很多可引起溶血病，以ABO血型不合作为常见，Rh 血型系统比较少见[3-4]。一般情况下，母体为O 型血、父体为非O 型血最容易引发溶血病，原因在于O 型血具有更高效价抗A、抗B 的IgG 抗体[5]。

临床上常用直接、 间接抗人球蛋白试验及放散试验对疑似新生儿溶血病病例进行检测，其中直接抗人球蛋白试验可检测出红细胞是否出现不完全致敏，而间接抗人球蛋白试验则可检测血清中是否存在抗体并明确抗体具体类型，放散试验则主要检测红细胞上抗原类型[6-7]。但该种检测方法检测时步骤复杂，且容易受到外界因素干扰，进而导致偏差，引发误诊。本组将试管法与凝胶法进行对比，结果证实，凝胶法抗人球蛋白试验阳性率、抗体游离试验阳性率及符合率分别为81.2%、87.1%、91.8%、91.8%，显著高于对照组64.7%、70.6%、75.3%、75.3%，HDN 免疫性抗体特异性检出率则接近。试管法敏感性容易受离心速度及时间、血清与红细胞比例等因素影响，操作步骤繁多，耗时较长，且需对红细胞进行反复洗涤。抗原和抗体亲和力弱，洗涤次数太多容易大致抗体脱落而引发假阴性情况[8]，因此符合率仅为75.3%。微柱凝胶法为一种新型血清检测方法，将凝胶分子筛技术与抗原抗体反应结合起来，血清检测过程中，游离红细胞可穿过凝胶柱，但抗原抗体发生反应后红细胞会发生凝集而无法穿过分子筛，从而悬浮在凝胶柱上，游离红细胞与凝集红细胞就会区分开来[9]。此外，微柱凝胶法的应用可将血型抗体及抗人球蛋白提前放进去，不需逐次加入，因此检测过程得到大幅简化[10]，操作更简单，人为误差和干扰也因此得到控制，优势得到凸显，这是其符合率高达91.8%的原理基础。再有，其通过调节凝胶浓度对凝胶间隙进行控制，让细胞在离心力作用下发生凝集而分为上下2层，区分阳性与阴性。与试管法相比，不用频繁洗涤红细胞，易于标准化，影响因素少，灵敏度得以提高。有临床研究单独对Rh 血型免疫性抗体进行检测，结果显示单一抗体产生频率抗E 最高，抗e 最低，混合抗体中，抗Ce 最高，抗cD 最低。且女性免疫性抗体阳性率明显高于男性，且被检者中以孕产妇居多，多数存在反复妊娠、流产史，说明母婴血型不合妊娠免疫同样也是导致Rh血型免疫性抗体重要原因。另外，也有研究提出微柱凝胶法敏感性偏高，对于血清中含有高效价冷凝集素及自身抗体患者，抗体筛查试验可能因此导致假阳性结果的出现。为确保临床输血有效性、安全性，可联合凝聚胺法、酶法等予以确认。

综上，凝胶法检测新生儿溶血病免疫性抗体所受影响因素少，敏感性高，操作更简单，具有较高临床应用价值。

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