结核杆菌特异性抗原对结核病诊断价值研究

孙丽娜，孙京涛，田永全

1.廊坊市疾病预防控制中心，河北廊坊 065000；2.廊坊市人民医院，河北廊坊 065000；3.廊坊市食品工程学校，河北廊坊 065000

结核病（Tuberculosis，TB）是一种结核分枝杆菌为病原菌的慢性传染性疾病。TB 多见于青年人，可人际间接触、体液、血液传播，严重威胁人类生命健康，据WHO 统计年报表明全球每年约有20 亿人感染结核分枝杆菌 （M.tuberculosis，MTB），TB年发病1000 万人、死亡300 万人[1-3]。目前，已有关于MTB 抗原血清学技术诊断TB 方法，具有操作简单、快捷、所需器材少等优点，在结核病快速筛查、诊断中具有无可比拟的技术优势，应用前景较好。该研究在2013年2月—2014年5月采用ELISA，评价结核杆菌特异性抗原单一、联合诊断结核病效用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2013年2月—2014年5月，该地疾病预防控制中心结核病防治所提供实验用血清、阳性标准品血清、阴性标准品血清。阳性血清人群100例，其中男61例、女39例，年龄22～71 岁、平均（44.4±6.8）岁，以不同程度低热、消瘦、乏力为症状表现，咳血61例，肺结核91例、支气管结核9例。阴性对照组血清均取自100例健康体检者，其中男60例、女40例，年龄22～70 岁、平均（46.8±10.5）岁。抗体检测采用美MP 公司产IgG 检测试剂盒检测。

1.2 方法

1.2.1 实验 确定最佳ELISA 条件：①采用棋盘滴定法，确定最佳抗原包被浓度和血清稀释度[4]；②分别用以上计算所得的最佳抗 原浓度包被ELISA 板，确定CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 四种结核分枝杆菌特异性抗原二抗稀释度；③以①-②确定的各类结核分枝杆菌特异性抗原最佳ELISA 条件，检测100 份阳性血清、100 份阴性血清。

1.2.2 检测性能评估 整理各抗原检测结果，整理抗原组合列表，预测联合诊断性能，选择最佳抗原混合，比较各组合诊断效率，并进行重复性、精密度实验，评价方法稳定性。

1.3 统计方法

以SPSS18.0 软件包处理所获数据资料，以n（%）表示计数资料，组间比较采用χ2检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义，计算各抗原组合诊断Cut-off 值。

2 结果

2.1 单一蛋白诊断

单一蛋白诊断，38kDa 灵敏度最高，其次为CFP10-ESAT6，再次为HsPX，最次为Ag85B，38kDa 灵敏度高于Ag85B，差异有统计学意义（χ2=10.86，P＜0.05）；Ag85B 特异度最高，其次为CFP10-ESAT6，再次为HspX，最次为38kDa，但差异无统计学意义（χ2=0.31，P＞0.05）；38kDa、HspX 符合率最高，其次为CFP10-ESAT6，差异无统计学意义（χ2=3.02，P＞0.05），见表1。

表3 38kDa＋CE＋HspX 实际诊断[n(%)]

表1 四种蛋白单一诊断效用对比[n(%)]

2.2 联合蛋白诊断预测

筛选Youden 指 数＞0.5 组合主要包括：38KDa＋CE、38kDa＋HspX、38kDa＋CE＋HspX，灵敏度（χ2=1.52）、特异度（χ2=1.52）、符合率（χ2=0.76）均在72%以上，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 三种联合蛋白诊断效率较好蛋白组合[n(%)]

2.3 ELISA 检验与重复性实验

38kDa＋CE＋HspX 联合检查Youden 指数最高为0.445，拟作为诊断组合。

2.4 实际诊断

以38kDa＋CE＋HspX 组合诊断2014年1月—2014年10月，收治的疑似肺结核患者，结果显示任意蛋白DTH 阳性诊断肺结核敏感度达80.39%，特异度18.99%，可满足需要，见表3。

3 讨论

目前，TB 诊断主要方法包括痰涂片抗酸染色法、 痰结核菌培养法，但前者假阴性与假阳性率高，后者耗时长、操作相对繁琐，不利于大规模推广应用，两者均不适用于TB 潜伏期患者筛查、诊断[5]。

CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 是目前发现时间较早、研究时间相对较长、提取较方便的四种结核杆菌特异性抗原，部分已被应用于临床诊断[6]。研究结果显示，四种蛋白单一或联合均可应用于TB 诊断，灵敏度略高于痰涂片，不同抗原灵敏度、特异度、符合率存在一定差异，38kDa 灵敏度、符合率均居首位。值得注意的是，三类组合中均有38KDa，这与38kDa 灵敏度、符合率均居首位有关。ELISA 检验与重复性实验结果显示，三种组合诊断效用不受混合方式影响，且稳定性较好，其中38kDa＋CE＋HspX 联合检查Youden 指数最高为0.445，可作为联合诊断组合。实测结果显示，以任意蛋白DTH 阳性作为诊断标准，诊断TB敏感度达80.39%、特异度81.01%、符合率80.077%，高于痰涂片、PPD 皮试、X 线诊断。此外还应注意的是，联合诊断与X 线片结合空洞影一致性较好，敏感度达到97.06%，有助于提高X 线应用水平，与Davidow 研究发现一致[7]。

结核杆菌特异性抗原诊断结核病是当前研究热点，如Deng[8]等以38ku＋16ku＋LAM 共同检测MTB，敏感度高达96.1%，但尚无诊断TB 结果。目前，许多学者致力于构建融合蛋白，进行血清学检测，弥补单一蛋白无法检测所有抗体的弊端，也是今后该领域研究的重要发展方向。

[1]王芸.云南省2000、2010年结核病流行病学抽样调查分析[J].预防医学论坛，2014，20(1):11-19.

[2]马均.结核病[M].北京:人民卫生出版社，2006.

[3]全国结核病流行病学抽样调查技术指导组.第四次全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中华结核和呼吸杂志,2002,25（1）:3-7.

[4]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京:中国教育文化出版社，2006.

[5]王桥霞.结核杆菌特异性抗原对结核病诊断价值研究[J].中国热带医学，2009，9(11):2085-2087.

[6]聂恒.结核分枝杆菌特异性蛋白抗原研究进展及其应用策略探讨[J].中国病原生物学杂志，2014，9(2):180-181.

[7]孙艳.肺结核患者涂阳率及其影响因素的研究[J].临床肺科杂志，2012，17(9):1619-1621.

[8]Deng S，Yuan Y，Xia J，et al.Clinical utility of combination of lipoarb inomannan，38-kDa antigens as a diagonsis tool for tuberculosis[J].Diagn Microbiol Infect Dis，2011，71(1):46-50.