温度对龙血竭酚类提取物纯化工艺的影响

徐殿红 孙永成,2 萧 伟,2 陶永华,2 秦建平,2 陈利平

温度对龙血竭酚类提取物纯化工艺的影响

徐殿红1孙永成1,2萧 伟1,2陶永华1,2秦建平1,2陈利平1

目的 评价温度对龙血竭酚类提取物纯化过程中成分及性状的影响。方法 采用高效液相色谱法、粉末堆积密度检测方法，以有效成分转移率及提取物堆密度为指标，考察纯化过程中碱溶解温度以及酸沉温度对龙血竭酚类提取物的指标成分及性状的影响。结果 龙血竭酚类提取物纯化过程中碱溶解、酸沉温度均以选择65 ℃为最佳。结论 选择优化的纯化温度，制备得到龙血竭酚类提取物各指标成分转移率较高，堆密度及性状符合要求。

温度；龙血竭酚类提取物；纯化；堆密度

龙血竭是百合科龙血树属植物剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen的含脂木材经提取得到的树脂，具有活血散瘀、定痛止血、敛疮生肌等功效，主要含有黄酮类、皂苷类、甾醇类、萜类和其他化合物[1]。药理研究结果表明，龙血竭黄酮类成分（属酚类化合物）具有明显的抗血栓、抑制血小板聚集、抗心肌和脑缺血、改善血液流变学等作用。黄酮类化合物因分子中多有酚羟基而呈酸性，故可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。本文在前期研究确定对龙血竭提取浓缩干燥后的干膏采用0.35% NaOH溶液溶解、溶液用10% HCl溶液沉淀方式纯化的基础上，研究对碱溶解酸沉淀时的温度对纯化效果的影响，优选最佳碱溶酸沉温度[2]。

1 材料与仪器

1.1 材料 龙血竭提取干膏粉（江苏康缘药业股份有限公司，批号130401）；7,4'-二羟基黄酮（中国食品药品检定研究院，批号111787-201002）；龙血素A（中国食品药品检定研究院，批号111660-200301）；龙血素B（中国食品药品检定研究院，批号111558-201006）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。1.2 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER TOLEDO AB204-S电子分析天平；METTLER TOLEDO pH计；JJ-1B恒速强力电动搅拌器；HY-08高速粉碎机。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-1%冰醋酸（B），梯度洗脱，0～10 min，25%～44% A，10～40 min，44% A；流速1 ml/min；柱温40 ℃；龙血素A、龙血素B检测波长278 nm，7,4'-二羟基黄酮检测波长319 nm。

2.2 对照品溶液的制备 分别精密量取龙血素A、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮20.09、24.93、18.51 mg，分别加入 100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得混合对照品溶液。

2.3 线性关系考察 精密量取2.2项下混合对照品溶液0.2、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分别加入10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按2.1项下色谱条件测定，记录峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y），以对照品进样量（μg）为横坐标（X）计算回归方程，结果见表1。

表1 对照品线性范围、回归方程及相关系数表

2.4 最佳碱溶解温度考察

2.4.1 供试品溶液的制备 称取10.5 g NaOH，放置烧杯中，加水溶解至3 000 g，同法配制6份，分别加热至35、45、55、65、75、85 ℃；另取龙血竭提取干膏粉600 g，平均分成6份，分别投入到上述6份不同温度的NaOH溶液中，搅拌30 min使其溶解，滤过，放置至室温，备用。另取碱溶液2 g，精密称定，加入10 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4.2 取2.4.1项下制备的供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行检测，供试品中龙血素A、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮含量见表2。

表2 不同温度碱溶液中龙血素A、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮转移率(%)

2.4.3 碱溶液固含物测定 分别取碱溶液20 g，精密称定，置预先恒重后的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃干燥至恒重，计算干膏率，35 ℃时碱溶液干膏率为77.29%、45 ℃时碱溶液干膏率为72.25%、55 ℃时碱溶液干膏率为71.70%、65 ℃时碱溶液干膏率为69.16%、75 ℃时碱溶液干膏率为65.93%、85 ℃时碱溶液干膏率为60.92%。

2.5 最佳酸沉温度考察

2.5.1 供试品溶液的制备 称取10.5 g NaOH，放置烧杯中，加水溶解至3 000 g，同法配制6份，水浴加热至65 ℃；另取龙血竭提取干膏粉600 g，平均分成6份，分别投入到上述NaOH溶液中，搅拌30 min使溶解，滤过，滤液在温度为75、65、55、45、35、25 ℃条件下，加入10% HCl，调pH 1～2，静置24 h，去掉上清液，观察沉淀物性状，沉淀离心（5000 r/min），收集沉淀物，水洗至中性，减压干燥、粉碎。取提取物20 mg，精密称定，放置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.5.2 取2.5.1项下制备的供试品溶液，按2.1项下色谱条件检测，供试品中龙血素A、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮含量见表3。

表3 不同温度酸沉提取物中龙血素A、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮转移率(%)

2.5.3 堆密度测定 不同温度酸沉提取物堆密度检测结果显示，溶解温度为35 ℃时其堆密度为0.56、45 ℃时其堆密度为0.51、55 ℃时其堆密度为0.46、65 ℃时其堆密度为0.43、75 ℃时其堆密度为0.42、85 ℃时其堆密度为0.39。

3 结论

3.1 由最佳碱溶解温度考察结果可知，龙血竭提取干膏粉在 65 ℃碱溶液中溶解时，各指标成分转移率最高，70 ℃稍次之；干膏率随温度上升呈递减趋势。考虑到尽可能保证各指标成分转移率，并最大限度去除杂质，因此，选择龙血竭提取干膏粉最佳碱溶解温度为65 ℃。

3.2 由最佳酸沉温度考察结果可知，龙血竭干膏粉碱溶液在25～65 ℃酸沉时，各指标成分转移率相差不大，但所得沉淀物性状及堆密度差异较大，结合制剂生产时堆密度的需求，选择酸沉时碱溶液温度为65 ℃。

4 讨论

本实验选择在不同温度下对龙血竭提取干膏粉进行碱溶解、酸沉，结果表明，在温度为65 ℃条件下碱溶解、酸沉所得到的龙血竭酚类提取物各指标成分转移率较高，堆密度符合要求。

龙血竭提取干膏粉在 35～65 ℃碱溶液中溶解时，溶液呈红棕色，沉淀呈深红棕色略微发紫的粉末状，在75～85 ℃碱溶液中溶解时，溶液呈红棕色，沉淀呈深红棕色略微发紫的黏稠胶体状；酸沉时，溶液温度在55～75 ℃时，沉淀物呈颗粒状，略有黏性，25～45 ℃时，沉淀物呈泥浆状，特别细腻，考虑可能与龙血竭药材树脂类的理化性质有关。

[1] 屠鹏飞,陶晶,胡迎庆,等.龙血竭黄酮类成分研究[J].中国天然药物,2003,1(1):27-29.

[2] 屠鹏飞,王钰芳,邵杰,等.龙血竭中黄酮类成分提取工艺研究[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(6):30-32.

Temperature on the Dragon's Blood Phenol Extraction and Purification Process

Xu Dianhong Sun Yongcheng Xiao Wei Tao Yonghua Qin Jianping Chen Liping

Objective Temperature on the dragon's blood phenol extraction and purification process of composition and the influence of the shape.Methods Using HPLC method,powder bulk density detection method,in order to transfer rate and extract effective components bulk density as an index,purification process of alkali dissolving temperature and temperature of dragon's blood phenolic acid extract the influence of the purity and properties.Results Dragon's blood phenol extraction and purification process,acid alkali dissolve all choose to sink temperature 65 ℃.Conclusion Temperature purifying selection optimization,prepared from phenolic extracts including exhaust all indexes higher transfer rate,bulk density and capsule filling volume stability and meet the requirements.

Temperature;Dragon's blood phenolic extracts;Purification;Bulk density

R943;TQ460.6

A

1673-5846(2015)04-0016-02

1江苏康缘药业股份有限公司，江苏连云港 222047

2中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏连云港 222047