肝癌患者血清中肿瘤标志物含量检测及其与肝癌组织中凋亡分子、免疫分子的关系研究

林佳华中国人民解放军第四军医大学，陕西西安　710032

肝癌患者血清中肿瘤标志物含量检测及其与肝癌组织中凋亡分子、免疫分子的关系研究

林佳华
中国人民解放军第四军医大学，陕西西安710032

[摘要]肝癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，有着致死率高，恶化程度快的特征。早期对疑似肝癌患者血清中的肿瘤标记物检测，有着一定的现实意义存在。肿瘤标记物对于肝癌组织中的凋亡分子与免疫分子有一定的关系存在。结合实际情况，该综述首先研究了肝癌患者血清中肿瘤标志物含量检测方法，后对肿瘤标志物和肝癌组织中免疫分子和凋亡分子之间的关联性进行深入性探讨。

[关键词]肝癌；肿瘤标志物；凋亡；Toll样受体；髓样分化因子88

肝癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，和其他消化道肿瘤相比，肝癌有着生存率低、恶化程度高的特征。在现如今的临床治疗中，治疗方案的确定与对患者肿瘤严重程度的评估有着非常密切的联系。当前一般适应血清学检测的方法，来判断患者病情的严重程度，该方式有着无创，可重复性强等优点，能够较为公允的检测出患者病情。最近几年，为了能够找到更为准确的诊断方法，血清学指标也成为了一项研究重点。其中包含了胸苷激酶，血管内皮生长因子，缺氧诱导因子，高迁移率族蛋白1等等。鉴于此，该综述对肝癌患者血清中肿瘤标志物含量检测及其与肝癌组织中凋亡分子、免疫分子的关系进行深入性研究，现综述如下。

1　肿瘤标志物诊断早期肝癌研究意义

肿瘤标志物指的是在癌细胞内部或者癌细胞表达过程中，亦或者是存在于宿主内部，作用在肿瘤反应中所产生的物质，肿瘤标志物广泛存在于细胞核与细胞质中，部分肿瘤标志物存在于细胞表面。有时也能够在患者血液或者体液中检测出来。一些肿瘤标志物仅在肿瘤患者体内出现，而部分肿瘤标志物在患者体内的总含量如果超过了正常水平，可以通过免疫学，化学等等一些基因学检测方法，将其含量测定出来，这对于鉴定肿瘤是否存在，判断肿瘤发生发展进程，判断治疗效果与复发情况，预后情况提供了可靠依据。在肝癌的早期诊断中，肝癌组织中的凋亡分子，免疫分子开创了诊断的先例，令亚临床对于肝癌的诊断成为了可能，同时也掀起了对肿瘤标志物研究的热潮。

血清指标与肿瘤组织穿刺活检是在临床上用于肝癌恶化程度检测的两种方式。和肿瘤组织初穿刺活检相比，血清学指标检查法有着无创，操作简单，可重复性强的特点，这对于判定患者病情，有着十分重要的现实意义。

2　肿瘤标志物与肝癌组织中凋亡分子之间的关系

2.1 HMGB1

专家学者们对血清学指标检测进行了深入性研究，并已经获知，在以往研究中[1]，能够发现血清指标诸如DKK、VEGF、HIF-1、HMGB1、GP73等等指标和以往相比均存在不同程度升高现象。最新研究[1]表明，HMGB1为一种氨基酸序列保守度较高的蛋白。在细胞核中，其地位相当重要，归属于结构蛋白范畴中。HMGB1不但能将细胞核与核小体加以全面稳定，与此同时也参加到了DNA的复制，与转录等过程。当细胞坏死以后，HMGB1会从细胞核中释放，该物质也能够由已经被激活的单核巨噬细胞分泌。有国内一项研究表明[2]。对肝癌患者的血清进行检测，其结果表明，样本血清中HMGB1含量的上升与患者病情恶化程度有着非常密切的关系。

2.2 GP73

GP73属于高尔基体顺面蛋白的一种，一般情况下，GP73应该在肝细胞的内部，分泌到细胞外的情况是非常少见的[3]。当人体肝细胞发生病变的时候，GP73就会从细胞中的高尔基体顺面循环到细胞胞浆内部，并在分泌小体中，完成了整个出细胞的过程，并最终进入到血液循环之中。GP73在上皮细胞上表达，因此这种蛋白和其他的上皮性细胞肿瘤有着非常密切的关系。在正常情况下，GP73主要在胆管上皮细胞中表达，在肝脏细胞中并不会表现出表达现象，或者极少出现表达现象。但肝脏细胞一旦发生了癌变，在胆管上皮细胞中GP73的表达数量会比以往少，在肝脏中会呈现出高表达状态。该物质的表达异常和肝癌的产生关系密切。GP73信使RNA和蛋白在受到感染以后，其会在内部HEPG2细胞中表达，没有发生癌变的细胞中该物质则不表达。

2.3 TK1

TK1和细胞的分化与增殖有着非常密切的联系，在通常情况下，该物质存在于细胞质当中，可以对胸腺胞嘧啶DNA和磷酸DNA之间的转化。TK1是一种较为特殊的激酶，同时也是癌变肝脏细胞在进行脱氧核苷酸合成时必有的前提物质，当人体肝脏内癌细胞大量繁殖的时候，该物质的含量较以前相比明显增高。如发生癌变现象，那么肿瘤细胞会快速的增殖。和其他激酶相比，TK1的含量与活性均与之较高，在这种环境下，该物质超过正常水平25~100倍左右。

检测患者血清中TK1的水平，有着非常重要的临床意义存在，这样能够将患者体内癌细胞增殖的活动信息加以全面了解，并对治疗肿瘤的效果进行全面评测。对于预防肿瘤复发上，有着非常重要的现实意义。

2.4 DDK1

分泌蛋白DDK1在多种癌变细胞中呈现高度表达，在对肝癌患者的血清学指标检测过程中，分泌蛋白DDK1呈现高表达[4]，能够最为检测癌症肿瘤的主要标志物，最近几年，相关学者[5]对分泌蛋白DDK1进行了深入性研究，结果表明，在肝癌细胞中，DDK1的敏感性高达70%，特异性约为91%。在肝癌早期检测中，其敏感性为约为71%，特异性约为92%。另外，对DKK1蛋白的检测能够在根本上弥补使用甲胎蛋白检测造成的不足，实验中表明，对于AFP阴性患者，其诊断肝癌细胞的敏感性约为71%，特异性约为90%。AFP阳性者主要是由慢性HBV与肝硬化患者组成，它们是罹患肝癌的危险人群，使用分泌蛋白DKK1，能够从阳性样本中检测肝细胞癌，其敏感性为70%，特异性约为84%。将AFP和DKK1合并使用，能够提升肝癌的检出率。值得一提的是，对术后患者的DKK1指标进行检测，其血清中分泌蛋白DKK1浓度和以往相比有所下降，由此能够看出，分泌蛋白DKK1能作为诊断肝癌的重要指标。

有研究对上述三种物质进行了分析[6]，其结果表明，在肝癌患者血清中，TK1，DDK1、HMGB1三者的信使RNA与蛋白的含量明显高于健康组，这种现象在一定程度上说明，肝癌患者血清中TK1，DDK1、HMGB1含量明显高于正常水平。

血清样本中肿瘤标志物信使RNA和蛋白含量升高，主要和癌细胞增殖有关，有特异性的血清指标不但能够根据肝癌特征，为医生提供诊断依据，还要能够辨别出肝癌病情的严重程度。肝癌细胞最为明显的特点就是远处转移和无限繁殖。在以往，一般使用肿瘤细胞穿刺的方式，检验肿瘤的恶性程度。

3　肿瘤标志物与肝癌组织中免疫分子之间的关系

肝脏细胞在增殖的过程当中，会受到凋亡多个凋亡抑制和促进基因的调节和控制，细胞凋亡是一种受多细胞有机体内相对复杂遗传机制调控的，是一种位数身体机能正常运转和保证内部环境稳定的重要过程。是一个由细胞基因决定的自行或者程序化终结生命的过程。促凋亡基因的缺少和抗凋亡基因的高度表达，会提升细胞发生癌变的风险，P1K1属于丝分裂中苏氨酸/丝氨酸激酶家族的一份子。P1K1的序列非常保守，同时也是调整细胞周期的重要分子，对细胞分裂有着很强的促进作用。该物质在G0、G1和S期中低度表达，在G2期内，该物质开始高度表达，并在M形成顶峰。有专家[7]的离体实验表明，受到干扰的P1K1的表达，能够将癌细胞增殖的过程加以抑制。

LIVIN是近年来最新发现的一种凋亡抑制蛋白。该蛋白会利用自身的BIR结构和CASPSE7与CASPSE3相互结合，进而对CASPSE介导和凋亡所产生的线粒体受损为重要依据细胞自我凋亡过程。

XAIP属于X染色体中凋亡抑制蛋白的一种，XAIP能够和CASPSE7、CASPSE3、CASPSE9进行全面结合，并对细胞凋亡过程产生一定的抑制作用。

XAIP基因在肝部肿瘤的发生和发展中起到了相当重要的作用，是一种具有研究价值的肝部肿瘤标记物。在对肝癌患者的早期诊断中[8]，检测XAIP含量有着非常重要的临床意义存在。XIAP基因如果被高度表达，那么肿瘤对于化疗药物的敏感性就会有所降低，这也是肿瘤产生耐药性的关键原因，该肿瘤标记物的表达，能够令细胞中的凋亡和增殖达到一个相对平衡的状态，并能够令异常的细胞消失，通过这项原理，可以将肿瘤恶化的情况加以全面抑制。对于此，将XIAP在肝部肿瘤中的表达情况进行全面研究，能够为治疗肝癌提供新的方向。有文献表明[6]，在肝部恶性肿瘤细胞系中，均能够发现XIAP的过度表达，这种过度表达的现象和肿瘤本身的耐药性有一定的关系存在，有研究表明，该物质在肝癌组织中加以表达的时候，显现出XIAP和肝部肿瘤细胞和癌组织中的表达和以往相比有所增加[7]，在正常的肝脏细胞中，XIAP呈现出了低表达的现象，这在根本上说明了XIAP的高度表达与肿瘤细胞凋亡指数降低有直接的关系，和癌细胞增殖无关。现如今[8]，通过小分子技术，能够将XIAP蛋白的表达降低，进而增加肿瘤凋亡细胞数量。也有研究证明，在腺毒介导的条件下的XAIP靶向的反义核酸可以将XIAP蛋白表达数量降低，进而减少癌细胞对于γ射线的敏感性，使用相对应的载体，将反义XIAP进行转导，除了能够将癌细胞对于化疗的敏感程度增加之外，也能够对CASPASE-3的活化程度全面提升。

相关研究表明，在肝癌组织中XAIP、LIVIN、P1K1中信使RNA中蛋白平均含量比正常人要低[9]，和上文提到的TK1，DDK1、HMGB1呈负相关，该项理论在根本上说明了，肝癌组织中的凋亡分子XAIP、LIVIN、P1K1如果表达程度过低，会增加患者罹患恶性肿瘤的风险，增加了肿瘤标志物的分泌量[9]。

肝癌患者肝部细胞在凋亡的调节过程中发生异常意外，其免疫功能也会发生异常现象。在这种环境下，为癌细胞的增殖提供了有利条件。免疫是人体的生理功能，机体依靠免疫来辨别“自己”与“异己”[10]。并将进入到人体中的抗原物质进行破坏和排斥，保证机体的正常运转，维护身体健康[10]。免疫能够抵抗和预防微生物的感染。免疫设计到非特异和特意成分，在非特异成分并不需要实现的暴露，在第一时间就可以对其进行相应。免疫系统能够有效的预防病原体入侵到人体。在人体的免疫功能发生异常的情况下，肝脏细胞更加容易出现免疫逃逸现象，并向远方转移。最近几年，人们发现了一种天然免疫受体家族———TO ll样受体。该物质能够对与病原相关的分子模式和损伤相关分子模式加以准确识别，同时发挥出免疫应答反应。

在以往，有专家认为炎症反应的相关调节和TLRs的关系非常密切，现有报告表明[10]，TLRs参与到了肝癌细胞的发生和发展中，在癌症发生的整个过程之中，已经发生癌变的细胞能够释放出数倍的DAMPS和PAMPS。之后和细胞内部结构和下游的接头蛋白相连，最终将信号的通路全面激活，最终实现对靶基因表达的调节。LTR2和LTR4的下游主要接头蛋白是myD88.该物质在接头之后，能够在JUK－STAT的通路中完成免疫应答，进而在最大程度上，阻碍了癌细胞发生逃逸的危险。myD88是一种在肝脏癌变细胞发生过程中的必须分子，在myD88被去除以后，肝脏的整个癌变过程也会被停止。有关文献指出[11]，TLRs-myd88通路中有关的免疫分子含量检测能够表明，在肝脏癌变组织中，TLR4、TLR2和-myd88中的信使RNA和蛋白的含量均比正常肝脏组织要高，和TK1，DDK1、HMGB1呈正相关。这也证明了在发生癌变的免疫分子中，TLR4、TLR2和-myd88的过度表达增加人类罹患肝癌的风险，增加肿瘤标志物的分泌。

4　结语

综上所述，在肝癌患者的血清中，DDK1，TK1和HMGB1量比健康人要高，上述三种物质和发生病变肝癌组织的免疫分子呈现高表达，抗凋亡分子呈现低表达。由此能够看出，对疑似肝癌患者进行血清中TK1，DKK1和HMGB1的含量进行全面监测，对于检测肝癌患者病情程度，肝癌患者的诊断，有着非常重要的临床意义。

[参考文献]

[1]王文.肝癌差异表达miRNAs阵列分析及miR-138、miR-483-5p与肝癌发生机理的研究2、HBx诱发anti-URGs用于肝硬化肝癌高危人群预警的实验研究[D].上海：第二军医大学,2012.

[2]马立兴,邵先玉,付明燕.肝癌患者血清中miR-106、miR181含量检测及其与肝癌组织中Bax、Bcl-2的关系研究[J].中国现代医学杂志, 2014（24）:49-52.

[3]谭湘芳，陈鹄，周俊.Livin和Caspase-3在原发性肝癌中的表达及意义[J].广东医学，2013，34（5）：768-770.

[4]罗文明，陈琳，曹亚丽，等.血清GP73及AFP-L3检测在原发性肝癌诊断中的意义[J].临床和实验医学杂志，2013,12(13)：1001-1007.

[5]喻宏，贾晓敏，张灿，等.PLK1、CCL18在原发性肝癌中的表达及其与临床病理的关系[J].中国现代医学杂志，2013，23（34）：48-52.

[6]曹骥,杨春,余彬彬,等.Glypican-3在肝细胞癌中的表达及其临床的意义[J].广西医科大学学报,2009（1）:46-49.

[7]吴凤霞.血清肿瘤标志物AFP、CK19、PEG10和IQGAP1在肝癌中表达的研究[D].开封：河南大学,2014.

[8]勾宏娜，孙连桃，韩丽红.肝癌患者血清中高迁移率族蛋白B1的检测及临床意义[J].现代预防医学，2013，40（15）：2875-2876.

[9]郑向文,李文省,刘景峰.肝细胞肝癌组织中Bcl-2核表达和SPARC表达临床意义的探讨[J].中国现代医学杂志,2013,23(24):58-61.

[10] ZHENG XW, LI WS, LIU JF. Relationship of Bcl-2 expressionwith SPARC expression in hepatocellular carcinoma, and theirorrelation with recurrence, metastasis, and prognosis[J].ChinaJournal of Modern Medicine, 2013, 23(24): 58-61.

[11] Zhang L, Han J, Wu H, et al. The association of HMGB1 expression with clinicopathological significance and prognosis in hepatocellular carcinoma: a meta-analysis and literature review[J]. PLoS One, 2014, 9 (10): e110626.

Serum Levels of Tumor Markers and its Relationship with Apoptosis and Immune Molecules in Hepatocellular Carcinoma

LIN Jia-hua
Department of Surgery, Fourth Military Medical University of PLA, Xi’an, Shaanxi Province, 710032 China

[Abstract]Liver cancer is a common malignant tumor of digestive tract, with the characteristics of high mortality and deterioration degree. Early detection of tumor markers in serum of patients with suspected liver cancer has a certain practical significance. The tumor markers have a certain relationship to the apoptosis molecules and immune molecules in HCC tissues. Combined with the actual situation, this paper firstly studies the detection method of serum tumors markers in patients with liver canner, and then investigates deeply its relationship with apoptosis and immune molecules in HCC tissues.

[Key words]Hepatocellular carcinoma; Tumor markers; Apoptosis; Toll-like receptor; Myeloid differentiation factor 88

收稿日期：（2015-06-26）

[作者简介]林佳华(1992-)，男，福建莆田人，本科，研究方向：外科。

[文章编号]1674-0742（2015）09（c）－0185-03

[文献标识码]A

[中图分类号]R7