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扎考比利对大鼠离体冠状动脉环的舒张作用及其机制

2015-12-08刘成芳王瑾刘宇和荣丽张卫国牛龙刚吴博威

中国循环杂志 2015年12期
关键词:阻断剂离体比利

刘成芳,王瑾,刘宇,和荣丽,张卫国,牛龙刚,吴博威

扎考比利对大鼠离体冠状动脉环的舒张作用及其机制

刘成芳,王瑾,刘宇,和荣丽,张卫国,牛龙刚,吴博威

目的:研究扎考比利(zacopride) 舒张大鼠冠状动脉环的作用及其可能机制。

方法:雄性SD大鼠冠状动脉环的张力舒缩状态采用PowerLab和DMT系统记录,SD大鼠随机分为4组,内皮完整[+Endo, +Endo(vehicle)]组、+Endo(zacopride)组、完全去除内皮[-Endo, -Endo(vehicle)]组和-Endo(zacopride)组,每组6只大鼠,观察zacopride对KCl、血管收缩剂血栓素A2类似物(U46619)预收缩离体大鼠冠状动脉环的舒张作用;研究不同作用类药物对zacopride舒张血管作用的影响。

结果:在+Endo(zacopride)组和-Endo(zacopride)组,Zacopride对 KCl(60 mmol/L)和 U46619 (10-6mol/L)预收缩的冠状动脉环呈现浓度依赖性地舒张作用,+Endo(zacopride)组Zacopride 对 KCl 和 U46619 预收缩冠状动脉的最大舒张幅度分别为(90.15±6.38)% 和(81.67±4.97)%,-Endo(zacopride)组 zacopride 对 KCl 和 U46619预收缩冠状动脉的最大舒张幅度分别为(85.48±5.04)% 和(79.65±3.51)%,两组zacopride 对 KCl 和 U46619 预收缩冠状动脉的最大舒张幅度都显著高于其+Endo(vehicle)组和-Endo(vehicle)组,差异有统计学意义(P<0.05);内向整流钾通道(IK1)阻断剂 BaCl2明显减弱 zacopride 的舒张血管作用,使zacopride对 KCl 和U46619 预收缩动脉环的最大舒张幅度均减小 (P<0.05),差异有统计学意义。而一氧化氮合酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、钙激活钾通道阻断剂四乙胺(TEA)、三磷酸腺苷敏感性钾通道阻断剂格列苯脲(Glib)和电压依赖性钾通道阻断剂 4-氨基吡啶(4-AP)对 zacopride 的舒张血管作用没有明显影响(P均> 0.05)。

结论:Zacopride 对 KCl 和 U46619预收缩大鼠冠状动脉环有明显的舒张作用;Zacopride对冠状动脉的舒张作用与激动IK1通道有关。

扎考比利;冠状动脉;血管舒张;内向整流钾通道

Objective: To investigate the effect with its possible mechanisms of zacopride on vasodilatation of isolated coronary arterial rings in experimental rats.

Methods: The tension of vasodilatation of isolated coronary arterial rings of male SD rats was recorded by Powerlab and DMT system. The rats were divided into 4 groups: +Endo (vehicle) group, +Endo (zacopride) group and -Endo (vehicle) group, –Endo (zacopride) group. n=6 in each group. The vasodilatation effects of zacopride on KCl (60 mmol/L) and U46619 (10-6mol/L) pre-constricted arterial ring were recorded; the effects of different agents on zacopride caused vasodilatation were studied.

Results: In both +Endo (zacopride) and –Endo (zacopride) groups, zacopride showed a dose dependent vasodilatation effect on coronary ring pre-constricted by KCl and U46619. The maximum vasodilatation effect of zacopride in KCl treated +Endo (zacopride) group was (90.15 ± 6.38) %, in U46619 treated-Endo (zacopride) group was (81.67 ± 4.97 ) %; themaximum vasodilatation effect of zacopride in KCl treated-Endo (zacopride) group was (85.48±5.04) %, in U46619 treated–Endo (zacopride) group was (79.65 ± 3.51) %, compared to each corresponding vehicle group, all P<0.05. The inhibitor of IK1 channel, BaCl2could signifcantly reduce the vasodilatation effect of zacopride in KCl and U46619 pre-constricted coronary ring, P<0.05. However, the inhibitor of eNOS (L-NAME), the blocker of KCachannel (TEA), blocker of Kv channel (4-AP) and blocker of KATP channel (Glib) had no such signifcant effects, all P>0.05.

Conclusion: Zacopride had vasodilatation effect on coronary arterial ring which was pre-constricted by KCl and U46619, which might be related to the channel of IK1.

(Chinese Circulation Journal, 2015,30:1212.)

扎考比利(zacopride),属于苯甲酰胺衍生物,为5-HT4受体激动剂和5-HT3受体阻断剂,是一种全胃肠动力药[1]。近年来国内外学者还发现zacopride具有促进呼吸、止吐和抗焦虑等作用[2-4]。在心血管方面的研究中,本课题组前期研究发现并证实了zacopride对大鼠心室肌内向整流钾通道 (IK1)具有显著的激动作用,并且zacopride通过激动IK1可以抑制触发性心律失常和缺血性心律失常[5-7]。Liao等[8]和Wu等[9]的研究发现,Zacopride可加强缺血后适应和减轻离体心脏的缺血/再灌注损伤,这些研究从不同侧面观察到zacopride对心脏损伤的保护作用。但关于zacopride对冠状动脉的作用还少见报道,因此本研究拟通过离体血管张力测定实验观察zacopride对成年大鼠离体冠状动脉环的舒张作用,并分析其可能的舒张机理。

1 材料和方法

实验动物: 清洁级雄性 SD 大鼠,体重 240~260 g,由山西医科大学实验动物中心提供,许可证号为SCXK( 晋) 2009-0001。

实验试剂及仪器: Zacopride hydrochloride,购于英国Tocris公司;苯肾上腺素(PE)、乙酰胆碱(Ach)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、4-氨基吡啶(4-AP)、格列苯脲(Glib)、四乙胺(TEA)和血栓素A类似物(U46619)均购自美国 Sigma 公司;其余试剂为市售分析纯。HEPES缓冲液的成分及其浓度(mmol/L)如下:NaCl:144,KCl:5.8,MgCl2:1.2,CaCl2:2.5,葡萄糖:11.1,HEPES:5,pH=7.38。610 M多通道血管张力测定仪(Multi Myograph System-610M)丹麦 DMT 公司;Powerlab生物信号采集处理系统 澳大利亚埃德仪器国际贸易有限公司。

离体冠状动脉环的制备: SD大鼠脱臼处死后,立即取出心脏,浸入4℃,pH= 7.38 的 HEPES 液中。钝性分离大鼠冠状动脉,在前降支处剪取 2 mm 的血管环。将分离干净的冠状动脉环穿入两根直径为40 µm 的钨丝,然后将血管环固定在血管张力测定仪浴槽内传感器上。浴槽内持续通以 95 % O2和 5% CO2的混合气体,温度恒定为 37℃。动脉环平衡 90 min 后开始实验,平衡期间每隔 15~20 min 更换浴槽内 HEPES 一次。冠状动脉环的张力变化通过 DMT的换能系统采集,并用 Chart5.5记录在计算机上。

血管环活性检测: 冠状动脉环在 HEPES 液内平衡 90 min 后,用 60 mmol/L KCl 收缩动脉环 3 次, 当 3次的收缩幅度相差不超过 10% 时,则认为冠状动脉环反应良好。选取收缩张力达到 2 mN以上并且收缩平台稳定的血管环进行zacopride舒张实验的研究。

冠状动脉环的去内皮: 用 10-6mol/L PE 预收缩反应良好的冠状动脉环,收缩稳定后加入10-5mol/L Ach 检验血管内皮的完整性,若加Ach 后使 PE 预收缩的血管舒张大于 90%,认为内皮完整(+Endo);用比冠状动脉内径稍细的细管插入冠状动脉内,然后向其内温和的打入气泡,连续几次后,即可将冠状动脉内皮机械性地去除掉[10],随后用 10-6mol/L PE 预收缩,再加入10-5mol/L Ach,当 Ach 不产生舒张作用或舒张幅度小于预收缩的 10%时,认为已完全去除内皮(-Endo)。

Zacopride 对 KCl 或 U46619 预收缩冠状动脉环的舒张作用:SD大鼠随机分为4组:+Endo(vehicle)组、+Endo(zacopride)组、-Endo(vehicle)组和-Endo(zacopride)组,每组6只大鼠。用 60 mmol/L KCl 或10-6mol/L U46619(浴槽内终浓度)预收缩每组大鼠冠状动脉环达平台后,采用累积加药的方法,+Endo(zacopride)和-Endo(zacopride)组依次加入不同浓度的 zacopride(10-6,10-5.5、10-5、10-4.5、10-4mol/L)舒张冠状动脉环,当前一浓度舒张血管达平台后再加入后一浓度,+Endo(vehicle)和-Endo(vehicle)组分别加入与zacopride等容量等摩尔浓度的 NaCl。以60 mmol/L KCl 或10-6mol/L U46619 所致冠状动脉环收缩的最大幅度为 100%,计算各个浓度 zacopride对冠状动脉环的舒张百分比。

钾通道阻断剂和一氧化氮合酶抑制剂对zacopride 舒张大鼠冠状动脉环作用的影响:实验分为 6 组,设对照组,每组 6 只大鼠,用 60 mmol/L KCl 或 10-6mol/L U46619 预收缩内皮完整冠状动脉环达平台后,分别加入钙激活钾通道(KCa)阻断剂TEA(10-2mol/L)为TEA+zacopride组、IK1阻断剂 BaCl2(10-4mol/L)为BaCl2+zacopride组、三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)阻断剂 Glib(10-5mol/L)为Glib+zacopride组、电压依赖性钾通道(KV)阻断剂 4-AP(10-3mol/L)为4-AP+zacopride组及一氧化氮合酶抑制剂 L-NAME(10-4mol/L)为L-NAME+zacopride组,对照组加入等容量等摩尔浓度的NaCl。孵育约 10 min 后冠状动脉环再达平台,各组累积加入浓度梯度的 zacopride(10-6,

10-5.5、10-5、10-4.5、10-4mol/L),以 60 mmol /L KCl或 10-6mol/L U46619 收缩达平台时的最大收缩幅度为100%,计算不同作用类药物在各个浓度 zacopride 对冠状动脉环的舒张百分比数。

2 结果

不同浓度zacopride对大鼠冠状动脉环发生浓度依赖性的舒张作用(表1):在+Endo(zacopride)组和-Endo(zacopride)组,zacopride 对 60 mmol/L KCl 和10-6mol/L U46619 预收缩大鼠冠状动脉环的最大舒张幅度分别为(90.15±6.38) % 、(81.67±4.97)%及(85.48±5.04)%、(79.65±3.51)%,均显著高于对应的+Endo(vehicle)组和-Endo(vehicle)组(P均< 0.05)。+Endo(zacopride)组和-Endo(zacopride)组之间对 60 mmol/L KCl 和 10-6mol/L U46619预收缩大鼠冠状动脉环的最大舒张幅度差异没有统计学意义(P>0.05)。

钾通道阻断剂和一氧化氮合酶抑制剂对zacopride 舒张大鼠冠状动脉环的干预作用(表2):在60 mmol/L KCl 或 10-6mol/L U46619 预收缩的内皮完整冠状动脉环上,BaCl2+zacopride组(10-4.5~10-4mol/L)对 KCl 、U46619预收缩冠状动脉环的最大舒张幅度均明显低于其对照组(P均<0.05),差异有统计学意义。4-AP、TEA、Glib 和 L-NAME 均没有显著影响zacopride 对冠状动脉环的舒张作用(P>0.05)。

表1 不同浓度zacopride 对 KCl 、U46619预收缩冠状动脉环的舒张百分比(%,

表1 不同浓度zacopride 对 KCl 、U46619预收缩冠状动脉环的舒张百分比(%,

注:U46619:血管收缩剂血栓素A2类似物;zacopride:扎考比利; +Endo(Vehicle)组:内皮完整对照组;-Endo(Vehicle)组:去内皮对照组;+Endo (zacopride)组:内皮完整扎考比利组;-Endo (zacopride)组:去内皮扎考比利组。与+Endo(vehicle)组相比*P<0.05;与-Endo(vehicle)组比△P< 0.05

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表2 四组中各药物在不同浓度 zacopride 舒张KCl、 U46619预收缩冠状动脉环中的作用舒张百分比

表2 四组中各药物在不同浓度 zacopride 舒张KCl、 U46619预收缩冠状动脉环中的作用舒张百分比

注:TEA:四乙胺;Glib:格列苯脲; 4-AP:4-氨基吡啶 ;L-NAME:左旋硝基精氨酸甲酯。与对照组相比*P<0.05。 余注见表1

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3 讨论

在 IK1激动剂的研究中发现,氟卡尼,吗啡和一氧化氮(NO)等药物有增强 IK1的作用,但都表现为非特异性[11,12]。本课题组前期研究发现并证实了首个IK1选择性激动剂 zacopride,其对大鼠心室肌IK1表现出特异性的激动作用,其对大鼠心室肌 IK1的内向电流和外向电流都有增强效应,而对 L-型Ca电流(ICa-L)、钠电流(INa)、钠钙交换电流(INa/Ca)、持续外向延迟整流钾电流(Isus)、瞬时外向钾电流(Ito)和钠钾泵电流(Ipump)等其它影响动作电位的主要离子电流均无显著作用[7]。构成 IK1通道的亚单位主要来自 Kir2 亚家族(Kir2.x)中的 Kir2.1、Kir2.2和 Kir2.3,Wang 等[13]的研究发现,Kir2.1通道是IK1的主要亚型,所介导的电流占总 IK1电流的80%以上。我们的研究进一步发现,zacopride对大鼠心肌IK1的激动作用是经 Kir2.1介导的, 而与 Kir2.2 和Kir2.3无关[14]。研究发现,在血管平滑肌上 IK1亚基主要是 Kir2.1的表达,无 Kir2.2 和 Kir2.3 的表达[15],这提示我们 zacopride 可能通过激动血管平滑肌上的IK1来发挥舒张冠状动脉的作用,这是本研究的主要目标。

本研究结果表明,无论离体动脉环的内皮是否完整,zacopride都可以浓度依赖性地舒张由KCl和U46619预收缩的大鼠冠状动脉,并且L-NAME没有影响zacopride的舒张血管作用,说明zacopride的舒张血管作用是不依赖于血管内皮的,这提示zacopride可能直接作用于血管平滑肌而使冠状动脉舒张。而钾通道是选择性允许 K+跨膜通过的离子通道,在调节血管平滑肌舒缩活动中具有重要作用。激活血管平滑肌上的钾通道,能引起细胞膜超级化,从而抑制细胞外钙内流,引起平滑肌舒张[16]。血管平滑肌细胞上主要表达四种类型的钾通道: KCa、IK1、KATP和KV,本实验观察到,IK1激动剂zacopride浓度依赖性地舒张大鼠冠状动脉环,并且IK1阻断剂BaCl2明显减弱zacopride的舒张血管作用,而KCa阻断剂TEA、KATP阻断剂Glib和KV阻断剂4-AP对zacopride的舒张血管作用没有明显影响,这进一步证实了zacopride对IK1的选择性激动作用,并且可以明显地舒张血管,这将为zacopride在心血管方面的开发利用提供进一步的参考价值。

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(编辑:常文静)

Effect and Mechanism of Zacopride on Vasodilatation of Isolated Coronary Arterial Rings in Experimental Rats

LIU Cheng-fang, WANG Jin, LIU Yu, HE Rong-li, ZHANG Wei-guo, NIU Long-gang, WU Bo-wei.
Department of Human Anatomy, Shanxi Medical University, Taiyuan (030001), Shanxi, China
Corresponding Author: WU Bo-wei, Email: qwaesd299@163.com

Zacopride; Coronary artery; Vasodilatation; Inwardly-rectifying potassium Channels

山西省自然科学基金(2015021177);山西医科大学博士启动基金(03201405);山西医科大学青年基金(Q02201205);

山西医科大学基础医学院331培植项目(201208)

030001 山西省太原市,山西医科大学 人体解剖学教研室

刘成芳 讲师 博士 研究方向为心律失常、心血管重构 Email:ljjlcf@ @126.com 通讯作者:吴博威 Email:qwaesd299@163.com

R54

A

1000-3614(2015)12-1212-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2015.12.019

(2015-03-18)

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