奶牛醋酮血症最佳检测方法的筛选

陈凤梅 程光民 刘英龙 范作良 胡士林（山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061 ）

奶牛醋酮血症最佳检测方法的筛选

陈凤梅 程光民 刘英龙 范作良 胡士林*（山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061 ）

本试验选取90头规模化奶牛场产后0～28d奶牛，采用酮粉法与TNN型奶牛血酮测试仪相结合的方法，调查规模化奶牛场奶牛醋酮血症的发病情况，并以TNN型奶牛血酮测试仪BHBA含量大于1.2mmol/L作为醋酮血症奶牛的诊断标准，采用酮粉法分别对尿、乳和血样品进行检测，并将定性检测的结果与定量检测的结果相比较。结果表明，血酮仪检测β-羟丁酸测得的阳性率为18.89%，与此结果相比较,符合率最高的是酮粉法测血酮，符合率为96.18%；其次是酮粉法测乳酮，符合率为92.47%；酮粉法检测尿酮与乳酮、血酮相比较差异极显著(P<0.01)；检测尿酮与乳酮结果差异显著不(P>0.05)。假阳性率最低的方法是用酮粉法测血酮,假阳性率为9.08%，酮粉法测乳酮为21.06%，而假阳性率最高的是酮粉法测尿酮，为48.56%。从假阳性率分析3种检测方法差异极显著(P<0.01)。几种方法中漏检率最低的是酮粉法测乳酮，漏检率为9.11%；其次为酮粉法测尿酮,漏检率为9.18%；漏检率最高的方法是试酮粉法测血酮，漏检率为17.96%。酮粉法测血酮与测尿酮乳酮相比漏检率差异极显著(P<0.01)。

奶牛 醋酮血症 BHBA

奶牛醋酮血症具有三高一低，即血液、乳汁、尿液中酮体含量低，同时低血糖。临床醋酮血症奶牛有较明显消化紊乱症状，容易作出诊断;而亚临床醋酮血症无明显的临床症状，很难诊断。而目前规模化牧场酮病的发生给养殖户带来很大损失，因此早期醋酮血症的的及时准确的检测对应预防高产奶牛的醋酮血症至关重要。通常检测奶牛血液中β-羟丁酸(BHBA)的含量作为衡量醋酮血症的“金标准”[1]，但此方法由于价格昂贵在生产一线难以推广。本试验旨在以β-羟丁酸测定结果为依据，探讨最佳检测方法，为奶牛生产一线预防醋酮血症筛选经济适用的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 在山东潍坊某集约化奶牛场随机选择产后0～28d内荷斯坦奶牛共90头，胎次主要为2～6胎，年产奶量为7500～9000kg。成乳牛预产期前2月转入干奶牛群，预产期前15d转入产房，产后1w转入泌乳牛群。饲喂方式TMR饲喂，精粗比5:5，3次/d饲喂，分别于5:00、12:00、19:00。2次/d挤奶。

1.1.2 仪器 TNN型奶牛血酮测试仪及试纸条 北京怡成生物电子技术有限公司生产

1.2 方法

1.2.1 血样的采集 所有试验奶牛均在清晨空腹状态下用10ml注射器采集尾静脉血大约5ml，肝素抗凝，血液推入5ml真空采血管，置冷藏采样箱内。采集的血液尽快以3000rpm/min离心10min，将析出的血清移入离心管中，记好牛号，放入-20℃冰箱中保存待检。1.2.2 尿液的采集 早晨饲喂前用50ml大离心管采集新鲜尿液，置冰盒待检。尿样尽快检测。

1.2.3 乳样的采集 机器挤奶前采集新鲜乳样，盛放于5ml离心管中，采集完立即放入带有冰块的冷藏采样箱。采集的乳样尽快检测。

1.2.4 酮粉的配置[2]以及检测方法 取约0.2g酮粉，置于载玻片上，用滴管吸取2～3滴新鲜尿样、乳样或血清滴于粉剂上，浸湿粉末即可，约3min后判读结果。根据颜色变化做出判断：浅紫红色为弱阳性(＋)；紫色为阳性(＋＋)；深紫色或暗紫红色为强阳性(＋＋＋，＋＋＋＋)。不变色为阴性(－)；颜色反应不明显为可疑(±)。

1.2.5 BHBA的检测 血酮仪试纸条检测奶牛血液，按照血酮仪说明书进行。

1.2.6 数据处理 用SPSS 12.0数据处理软件对相关数据进行差异显著性分析。P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著，P>0.05为差异不显著。

2 结果与分析

见附表。

附表 不同检测方法的检测结果 (个、%)

本试验中每种检测方法样品总数均为90个，血酮仪检测β-羟丁酸测得的阳性率为18.89%。β-羟丁酸(BHBA)的含量为衡标准，符合率最高的是酮粉法测血酮，符合率为96.18%；其次是酮粉法测乳酮，符合率为92.47%；准确率最差的是酮粉法测尿酮，符合率为83.27%。酮粉法检测尿酮与乳酮、血酮相比较差异极显著(P<0.01)；检测血酮与乳酮结果无显著差异(P>0.05)。从假阳性率上分析，假阳性率最低的方法是用酮粉法测血酮，假阳性率为9.08%，酮粉法测乳酮为21.06%，而假阳性率最高的是酮粉法测尿酮为48.56%。3种方法检测结果差异极显著(P<0.01)。几种方法中漏检率最低的是酮粉法测乳酮，漏检率为9.11%；其次为酮粉法测尿酮，漏检率为9.18%;漏检率最高的方法是试酮粉法测血酮，漏检率为17.96%。酮粉法测血酮与测尿酮乳酮相比漏检率差异极显著(P<0.01)。3 讨论

（1）目前随着奶牛养殖集约化规模化的发展，养殖户不断追求奶牛的高产奶量，不断增加精料的饲喂量，奶牛的产奶量有了显著的提升，但是与之而来的醋酮血症的发生也愈演愈烈，给养殖户带来难以估量的损失。因此早期醋酮血症的及时准确的检测对预防高产奶牛的醋酮血症至关重要。夏成等[3]、张生福等[4]报道，用酮粉法测定的阳性与水杨醛比色法或改良式水杨醛比色法定量测定的结果一致，表明酮粉法对奶牛隐性醋酮血症检测具有灵敏度高的特点。（2）本试验中采用酮粉法与TNN型奶牛血酮测试仪相结合的方法，以TNN型奶牛血酮测试仪BHBA含量大于1.2mmol/L作为醋酮血症奶牛的诊断标准，采用酮粉法分别对尿、乳和血样品进行检测，并将定性检测的结果与定量检测的结果相比较，来分析不同检测样品结果的可靠性。（3）从成本上计算，血酮仪测BHBA能准确定量检测，但成本较高，不适合栏圈旁的检验。本试验中用酮粉法测定不同的样品，血、乳、尿，虽然符合率最高的是酮粉法测血酮，但是操作最复杂，从操作难度上来比较，酮粉法测乳酮、尿酮均比较简单;从样品的采集难易度来看，乳样的采集最简单，其次为血样，最难采集的是尿样，而其中酮粉法测乳酮漏检率最低。综上所述，酮粉法测乳酮相对来说简单易行，准确度较高，比较适合大型牧场醋酮血症发病情况的监测。

[1]Tyopponen J, and Kauppinen K. The stability and automatic determination of ketone bodies in blood samples taken in field conditions[J]. Acta Veterinaria Scandinavic, 1980, 21: 55-61.

[2] 王建华主编. 家畜内科学3版[M]. 北京: 中国农业出版社, 2002. 6.

[3] 夏成, 张洪友, 冯万宇等. 酮粉法检测泌乳牛尿酮乳酮的应用研究[J]. 中国兽医杂志, 2003(12): 3-4.

[4] 张生福, 何宝祥, 王应安. 对酮粉法测定奶牛尿液、乳汁中酮体的评价[J]. 青海畜牧兽医杂志, 1992(3): 5-7.

S858.23

A

1007-1733(2015)12-0008-02

2015–20–20）

山东省现代农业产业技术体系牛产业创新团队建设项目(SDAIT-06-011-05)

*通讯作者