葛花提取物对小鼠急性酒精肝损伤治疗及预防作用的研究

高飞云 李充璧

(1.内蒙古医科大学 内蒙呼和浩特 010110; 2.肇庆学院 广东肇庆 526061)

葛花是豆科植物野葛[Pueraria Lobata(Willd)Ohwi]的干燥花蕾,葛花在历代本草中均有记载,其主要用于解酒醒脾,其余疗效较为广泛,如:抗肿瘤、降糖、护肝等功效,是中药中具有标志性的解酒药。起主要有效成分为黄酮类化合物[1-3]。本实验是通过葛花提取物对酒精诱导的小鼠急性肝损伤模型的作用,提示葛花提取物对此类损伤具有的保护和预防的作用。酒精性肝病(alcoholicliver disease,ALD)是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病,初期通常表现为脂肪肝,进而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化,严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死甚或肝功能衰竭。至今临床上还没有有效防治其发生发展的理想药物。本试验旨在观察葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂

主要仪器 台式多功能冻干机(heto power dry LL3000);RE-3000 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂); Waters高效液相色谱系统(含Waters 1525泵,Waters 2487双通道紫外检测器,Waters 717plus自动进样器, Breeze色谱工作站,美国Waters公司);

3-1 小鼠ALT测定结果

主要试剂 葛花(肇庆学院自购);冰醋酸、石油醚、乙酸乙酯、邻苯三酚、甲醇、乙醇等均为分析纯,购置于广州化学试剂厂;ALT/AST试剂盒,购自上海生物工程科技有限公司。

1.2 实验方法

葛花提取物的制备 称取葛花10克,准确称取100ml 70%的乙醇,浸泡1小时后,连续回流3次,每次均有70%的乙醇100ml,每次提取1h,收集3次的滤液,在旋转蒸发仪上回收乙醇,冷冻干燥。

1.3 小鼠急性酒精肝模型的制备

方法参照周琼在《小鼠急性肝损伤模型的建立及GSTA1分析》中提到的乙醇至小鼠急性肝损伤模型的复制。

小鼠在隔夜禁食后,以15ml/ml的剂量灌胃56度红星二锅头,每日灌胃一次,连续7d。末次染毒后处死小鼠,检测肝功能指标后发现小鼠出现肝功能损伤,并出现肝脏细胞的形态学变化。

1.4 葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的治疗作用

1.4.1 取制作好的小鼠急性酒精肝模型90只,随机分为3组。分别为1组对照组、2组治疗组、3组空白组。

1.4.2 1组对照组每天以0.02g/kg的剂量灌胃三也真品舒肝片,每天2次。2组治疗组以0.005g/kg的剂量灌胃葛花提取物,每天次。3组空白组灌胃同样剂量的生理盐水,每天2次。其他实验条件保持一致。

1.4.3 连续灌胃一周后,末次灌胃后8小时处死小鼠,取小鼠肝脏,研磨匀浆后,利用ALT/AST试剂盒测试小鼠的ALT/AST指标,并与空白组及对照组做对比。

1.5 葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的预防作用

1.5.1 取正常小鼠90只,随机分为3组。分别为1组对照组、2组治疗组、3组空白组。

1.5.2 1组对照组每天以0.02g/kg的剂量灌胃三也真品舒肝片,每天2次。2组治疗组以0.005g/kg的剂量灌胃葛花提取物,每天次。3组空白组灌胃同样剂量的生理盐水,每天2次。其他实验条件保持一致。

1.5.3 连续灌胃一周后,采用小鼠急性酒精肝模型的制备方法,以15ml/ml的剂量灌胃56度红星二锅头,每日灌胃一次,连续7d。末次染毒后处死小鼠,取小鼠肝脏,研磨匀浆后,利用ALT/AST试剂盒测试小鼠的ALT/AST指标,并与空白组及对照组做对比。

2 统计学分析

用SPSS13.0版统计软件包进行统计学处理,实验所得数据数据用均数±标准差(± S)表示,显著性检验采用T检验,P＜0.05为有统计学差异。

3 实验结果

3.1.葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的治疗作用

提示葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤有治疗作用,在小鼠ALT/AST指标的测定中,治疗组与对照组及空白组比较,P值均<0.05,具有统计学意义。故认为葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤有效。

与空白相比,*P<0·05,**P<0·01,对照组与治疗组均有效

讨论:

ALD发病机制可能与乙醇及其代谢产物对肝脏的毒理作用、氧应激、免疫诱导和细胞因子、细胞凋亡、遗传、病毒的叠加作用等有关[4]。对于葛花的研究,其药理作用研究的非常之多,而对于急性酒精性肝损伤,研究也相对较多。现在已经有较多的针对急性酒精性肝损伤治疗和预防的药物问世,像柴胡、咖啡因等。但迄今为止,临床上还没有有效防止急性酒精性肝损伤发生发展的有效药物。近年来,有许多研究提示饮用咖啡因(caffeine)为基础的饮料可以减少肝脏患病的几率,尤其对嗜酒者效果更加明显[5-6]。也有学者指出栀子京尼平苷对小鼠急性酒精性肝损伤有保护作用[7]。中医本草记载葛花有护肝作用,但葛花对急性酒精性肝损伤的效果还研究较浅。血清的ALT和AST是反映肝细胞受损的重要指标,在葛花提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的研究中发现,ALT的变化是较为明显的,AST的变化不是很明显。由此可以说明,姜黄素对小鼠肝脏的保护是有局限性的。如果搭配其他药物,效果应该会进一步提升。

[1]尹俊亭,仲英,孙敬勇,等. 葛花的研究进展[J]．中草药,2005,36(12):1905-1906.

[2]Shin J E,Bae E A,Lee Y C,et al. Estrogenic effect of main compo－nents kakkalide and tectoridin of Puerariae Flos and their metabo－lites[J]. Biol Pharm Bull, 2006,29(6):1202-1206.

[3]Lee M K,Cho S Y,Jang J Y,et al. Effects of puerariae flos and puer－ariae radix extracts on antioxidant enzymes in ethanol-treated rats[J]. Am J Chin Med,2001,29(2):343-354.