热敷腾包质量标准建立的方法研究

廖 欣 岩林苹 白玲玲 王 婷 苏 华 陈 星

江苏省南京军区南京总医院制剂科，江苏南京 210002

热敷腾包质量标准建立的方法研究

廖 欣 岩林苹 白玲玲 王 婷 苏 华 陈 星▲

江苏省南京军区南京总医院制剂科，江苏南京 210002

目的研究建立热敷腾包的质量标准。 方法 采用薄层色谱鉴别法对方中艾叶、乳香、黄柏、赤芍、续断、桑寄生6味中药进行定性分析；采用醇溶性浸出物热浸法测定制剂中浸出固体物。 结果薄层色谱斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，专属性强；浸出固体物≥2.0%。 结论建立热敷腾包质量标准的方法有效可行，专属性强，重复性好，制剂质量稳定可控。

热敷腾包；质量标准；薄层色谱法；醇溶性浸出物

热敷腾包由艾叶、透骨草、乳香、丹参、黄柏、赤芍等19味中药组成，为南京军区南京总医院（以下简称“我院”）自主研发的外用制剂。采用化学发热剂热包作为热源，药材经粉碎渗漉提取精制后吸收于无纺布而制成药物纸，使用时先将药物纸敷于患处，再用热包进行热敷，借助热的传导作用促进局部血液循环，进而促进药物吸收，并发挥治疗作用。适用于关节炎、肩周炎、腰腿痛、慢性肠炎、痛经、子宫内膜异位等症。为了更好地控制热敷腾包的质量，对其质量标准进行了研究，根据中医药理论采用薄层色谱法对方中君药艾叶、贵重药材乳香、臣药黄柏、赤芍和佐药续断、桑寄生进行了定性鉴别并对其浸出固体物做了限量测定，方法专属性强，操作简便，准确可靠，可有效控制热敷腾包的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

WFH-203B三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司），AE240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ-250DB台式数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司），HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），SC202-00电热恒温干燥箱（江苏省南通市金余科研仪器设备厂）；以上仪器均检定合格，实验所用玻璃量具均经过校验合格。

1.2 试剂和试药

艾叶对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121345-201002），乳香对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120970-201305），盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110713-200208），赤芍对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121092-201003），芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-200732），川续断皂苷Ⅵ对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111685-201305），桑寄生对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121075-201003）。热敷腾包（规格：热包1个加435 mm×160 mm药物纸 1张，我院自制，批号：150423、150528、150612），其余所用试剂均为分析纯。薄层层析硅胶G（薄层色谱用，青岛海洋化工厂）。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 艾叶的薄层色谱鉴别 艾叶主含挥发油，为多成分混合物，经分离鉴定的有：萜品烯醇-4、芳樟醇、桉油素、樟脑等。该薄层检查法选择这些成分作为观察指标进行薄层鉴别。具体说明如下：取本品一袋，取出药物纸，加石油醚（30～60℃）100 mL浸泡2 h，滤过蒸干，残渣加石油醚（30～60℃）溶解并定容至1 mL，作为样品溶液。另取艾叶对照药材1 g，同样品溶液制备法制成对照药材溶液。除艾叶外的药材按处方比例称取、粉碎，按生产工艺及上述样品溶液制备法制成阴性溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，吸取样品溶液与阴性溶液各20 μL，对照药材溶液10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂自制的硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸-乙酸乙酯 （8∶0.5∶2）的上层溶液为展开剂展开晾干，置紫外灯（365 nm）下检视，结果显示，样品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同的红色荧光斑点，阴性对照在此位置上无斑点，见图1（封四）。

2.1.2 乳香的薄层色谱鉴别 乳香主要含有树脂、树胶和挥发油，树脂的主要成分为游离α/β-乳香酸等；树胶主要成分为阿糖酸的钙盐和镁盐；挥发油含蒎烯、α，β-水芹烯等。该薄层检查法选择这些成分作为观察指标进行薄层鉴别[1-2]。具体说明如下：取本品一袋，取出药物纸，加150 mL乙醚室温超声30 min，滤过蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1 mL，作为样品溶液。另取乳香对照药材0.5 g，加50 mL乙醚，同样品溶液制备法制成对照药材溶液。除乳香外的药材按处方比例称取，粉碎，按生产工艺及上述样品溶液制备法制成阴性溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，吸取样品溶液与阴性溶液各10 μL，对照药材溶液2 μL，分别点于同一市售的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-石油醚（30～60℃）（1∶10）为展开剂展开晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热3 min。结果显示，样品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点，阴性对照在此位置上无斑点，见图2。

2.1.3 黄柏的薄层色谱鉴别 选择盐酸小檗碱作为观察指标对黄柏进行薄层鉴别，具体说明如下：取本品一袋，取出药物纸，加甲醇150 mL加热回流30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为样品溶液。另取盐酸小檗碱对照品适量加甲醇制成每毫升含0.5 mg的对照品溶液。除黄柏外的药材按处方比例称取，粉碎，按生产工艺及上述样品溶液制备法制成阴性溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，吸取样品溶液与阴性溶液各20 μL，对照品溶液10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂自制的硅胶G薄层板上，以甲酸-乙酸异戊酯-36%醋酸（3∶7∶1）为展开剂展开晾干，置紫外灯（365 nm）下检视，结果显示，样品色谱在与对照品色谱相应的位置上显相同的黄色荧光斑点，阴性对照在此位置上无斑点，见图3。

图2 乳香鉴别的TLC图谱

图3 黄柏鉴别的TLC图谱

2.1.4 赤芍的薄层色谱鉴别 赤芍含芍药苷、芍药内酯苷等，具有清热凉血，散瘀止痛的功效[3]147-148。该薄层检查法选择芍药苷作为观察指标进行薄层鉴别[4-5]，具体说明如下：取本品一袋，取出药物纸，加150 mL乙醇水浴加热回流1 h，滤过蒸干，残渣加水30 mL溶解，用乙醚振摇提取（15 mL×2次），弃去乙醚液，水层再用正丁醇振摇提取（20 mL×3次），合并正丁醇提取液，再用纯化水洗涤（20 mL×2次），弃去水液，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至1 mL，作为样品溶液。另取赤芍对照药材0.5 g，加50 mL乙醇，同样品溶液制备法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品适量加甲醇制成每毫升含1 mg的对照品溶液。除赤芍以外的药材按处方比例称取，粉碎，按生产工艺及上述样品溶液制备法制成阴性溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，吸取样品溶液与阴性溶液各20 μL，对照药材溶液与对照品溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂自制的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶40∶10∶0.4）为展开剂展开晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，105℃下加热3 min。结果显示，样品色谱在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性对照在此位置上无斑点，见图4。

图4 赤芍鉴别的TLC图谱

2.1.5 续断的薄层色谱鉴别 川续断皂苷Ⅵ为其主要作用成分，该薄层检查法选择此成分作为观察指标进行薄层鉴别[6]。具体说明如下：取本品一袋，取出药物纸，加100 mL甲醇室温超声30 min，滤过蒸干残渣加水30 mL溶解，用正丁醇振摇提取（30 mL×2次），合并正丁醇提取液，用30 mL氨试液洗涤一次，氨试液弃去，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至1 mL，作为样品溶液。另取川续断皂苷Ⅵ对照品适量加甲醇制成每毫升含1 mg的对照品溶液。除续断外的药材按处方比例称取，粉碎，按生产工艺及上述样品溶液制备法制成阴性溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，吸取样品溶液与阴性溶液各15 μL，对照品溶液10 μL，分别点于同一市售的硅胶G薄层板上，以甲醇-三氯甲烷-水（7∶13∶2）的下层溶液为展开剂（分层时间久一些，使其分至澄清），展开晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热3 min。结果显示，样品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫色斑点，阴性对照在此位置上无斑点，见图5。

2.1.6 桑寄生的薄层色谱鉴别 桑寄生主要含黄酮类化合物：槲皮素、槲皮苷及少量的右旋儿茶酚[3]281，该薄层检查法选择这些成分作为观察指标进行薄层鉴别[7-8]。具体说明如下：取本品一袋，取出药物纸，加甲醇-水（1∶1）100 mL，加热回流1 h，趁热滤过，滤液浓缩至约20 mL，加水10 mL，再加稀硫酸0.5 mL，煮沸回流1 h，用乙酸乙酯振摇提取（30 mL×2次），合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1 mL，作为样品溶液。另取桑寄生对照药材1 g，同样品溶液制备法制成对照药材溶液。除桑寄生外的药材按处方比例称取，粉碎，按生产工艺及上述样品溶液制备法制成阴性溶液。

图5 续断鉴别的TLC图谱

照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，吸取样品溶液与阴性溶液各15 μL，对照药材溶液5 μL，分别点于同一市售的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲苯-甲酸（4∶5∶0.8）为展开剂展开晾干，喷2%三氯化铁乙醇溶液。结果显示，样品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的墨色斑点，阴性对照在此位置上无斑点，见图6。

图6 桑寄生鉴别的TLC图谱

2.2 浸出固体物限量测定

取本品一袋，取出药物纸置锥形瓶中，精密加入75%乙醇100 mL使其完全浸泡，称重，超声30 min，放冷，补足重量，摇匀，滤过，精密量取滤液10 mL置已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置恒温干燥箱中105℃干燥3 h，立即移至干燥器中，冷却30 min后，迅速称定重量[8]，计算供试品中浸出固体物的含量（%），不得少于2.0%[3]附录XA。测定10批样品，3批制剂的浸出固体物含量均在标准限度内，该标准有效可行，制剂质量稳定可控。见表1。

表1 浸出固体物测定结果

3 讨论

热敷腾包共19味中药制成，药味较多，原质量标准中无薄层色谱鉴别项，此次实验对方中艾叶、乳香、黄柏、赤芍、续断、桑寄生6味中药进行薄层色谱定性鉴别。经方法学考察，所建立的薄层色谱鉴别方法专属性强，重复性和稳定性好，阴性无干扰，取3批不同批号的样品依法检验，结果均满意，可作为热敷腾包的质量控制方法。

方中艾叶含挥发油，易溶于石油醚、二硫化碳等，故采用石油醚浸泡提取。以药典收载的石油醚（60～90℃）加热回流提取为提取方法，所提取出的样品与对照药材以及阴性对照在相应位置上均有紫红色斑点，阴性干扰较大。经处方分析实验，分别以石油醚（60～90℃）和石油醚（30～60℃）为提取溶剂，采用浸泡提取的方法，后者所提取出的样品点样后斑点较前者清晰，分离度好，阴性无干扰，所以选用石油醚（30～60℃）为艾叶薄层色谱鉴别的提取溶剂浸泡提取[9]。

黄柏为方中臣药，含生物碱类等，其中生物碱类中的盐酸小檗碱为其主要作用成分，含量较多，用于抗菌、抗炎、解热等症，易溶于甲醇[10]。本研究分别用“1%醋酸甲醇溶液”与“甲醇溶液”为提取溶剂做比较，以药典中“三氯甲烷-甲醇-水（30∶15∶4）下层溶液，氨蒸气饱和为展开剂，稀碘化铋钾试液为显色剂”与“乙酸异戊酯-36%醋酸-甲酸（7∶1∶3）为展开剂，紫外灯（365 nm）下检视为显色剂”为显色条件相比较，前者所提取出的样品斑点与对照品斑点拖尾严重，分离度较差，并且样品斑点颜色较浅，不利于薄层色谱分析。后者所提取出的样品与对照品斑点位置相一致，且较前者斑点分离度高，斑点表现较好，阴性无干扰，所以选用甲醇溶液为提取溶剂，乙酸异戊酯-36%醋酸-甲酸（7∶1∶3）为展开剂，紫外灯（365 nm）下检视为显色剂作为黄柏的薄层色谱鉴别方法。

方中续断主要含龙胆碱、皂苷类成分（如川续断皂苷Ⅵ）及挥发油，其中主要作用成分川续断皂苷Ⅵ具有止血，促进骨损伤愈合，降低子宫收缩等作用，易溶于正丁醇，故供试品溶液采用正丁醇振摇提取，因杂质较多用氨水洗涤可有效除去杂质，并采用皂苷类常用显色剂10%硫酸乙醇溶液作为显色剂，斑点表现较好，可作为续断的质量控制方法。

方中桑寄生的提取方法为《中国药典》中所收载的方法，但药典以甲苯（水饱和）-甲酸-甲酸乙酯（5∶1∶4）为展开剂，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365 nm）下检视为显色剂的方法不适用于本制剂中桑寄生的鉴别，其样品与对照均无斑点。经查阅文献与实验摸索后，分别以“甲苯-乙酸乙酯（3∶1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂”与“甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （5∶4∶0.8）为展开剂，2%三氯化铁乙醇溶液为显色剂”相比较，点样结果显示后者样品与对照药材在相同位置有一相同的墨色斑点，且斑点分离度较前者好，清楚明显，阴性对照在此位置上没有斑点，故后者可作为桑寄生的质量控制方法。

热敷腾包为我院自制外用制剂，其药味较多，药量相对较小，阴性干扰大，指标成分亦较多，给含量测定及其方法学考察带来一定困难，为此本研究对制剂的浸出固体量进行限量测定，加强了热敷腾包的质量控制，质量标准也更加规范完整可靠。

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Quality standard establishment of Refutengbao

LIAO Xin YAN Linping BAI Lingling WANG Ting SU Hua CHEN Xing▲
Department of Preparation Division,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command,Jiangsu Province,Nanjing 210002,China

Objective To research the establishment of quality standard of Refutengbao.Methods TLC was used in Folium Artemisiae argyi,Frankincense,Phellodendron,Radix Paeoniae rubra,Radix Dipsaci and the Parasitic Loranthus of prescription for qualitative analysis.Solid content in the preparation was determined by the method of alcohol leaching. Results The TLC spots were clear,the separation degree was good without interference.The method was highly specific.The extract was more than or equal to 2.0%.Conclusion The established quality standard of Refutengbao is feasible and effective,strong specific,with good repeatability,the quality of the preparation is stable and controllable.

Refutengbao;Quality standard;Thin Layer Chromatography;Ethanol-soluble extractive

R927.11

A

1673-7210（2015）11（c）-0013-04

2015-07-23本文编辑：赵鲁枫）

全军医疗机构制剂标准提高科研专项课题重点项目（14ZJZ08）。

▲通讯作者