马人工授精试验

霍　飞，郑新宝，毋状元，楠发鹏，董　红，张国庭，罗永明，陈静波

（1.新疆畜牧科学院畜牧科学研究所，乌鲁木齐830000；2.山丹军马场；3.石河子农业大学）

马人工授精试验

霍飞1，郑新宝1，毋状元2，楠发鹏3，董红1，张国庭1，罗永明1，陈静波1

（1.新疆畜牧科学院畜牧科学研究所，乌鲁木齐830000；2.山丹军马场；3.石河子农业大学）

试验旨在研究马人工授精中子宫角细管输精效果和浓缩精液常温保存及运输方式，验证了传统胶管输精单次追精的结果。结果表明：子宫角细管输精所得受胎率81.08%，与胶管输精所得情期受胎率差异显著（0.01＜P＜0.05）；15 mL离心管常温保存3 h获得的情期受胎率较高（P＜0.01）；群牧马单次追精情期受胎率53.62%，较多次输精效果差（P＜0.01）。

马；人工授精

近年来随着马产业的不断发展［1］，越来越多的人热衷于采用国外引进的优良种公马与本地母马杂交改良地方品种。如何利用有限的种公马资源开展杂交改良，使其获得更多的后代，成为马繁殖比较热门的研究领域。本试验在去年马子宫角输精取得成功的基础上，进一步扩大群体并对实施过程中细节进行了比较试验，现将结果总结如下。

1　材料

1.1试验动物

4～20岁伊犁母马，引进英纯血马6匹，阿尔登马2匹。

1.2仪器

离心机，水浴锅。

1.3试剂及耗材

50 mL/15mL离心管，INRA96马精液稀释液，20 mL、10 mL、5 mL、2 mL注射器，马专用输精器，0.5 mL细管，30 mL玻璃注射器，输精胶管。

2　方法

2.1卵泡发育监测

对全群母马进行直肠检查，依据卵巢上卵泡及黄体的大小建立卵泡发育档案，每日早7：00、晚6：00两次对卵泡发育至3期（ø≥30 mm）［2］，或即将发育至3期的母马进行直肠检查，监测其卵泡发育情况。根据卵泡的体积、卵泡液充盈程度、卵泡壁薄厚程度及有无排卵判断是否进行人工授精。

2.2采精

安装好假阴道，检查密闭性，灌注适量温水，使内胎壁温度保持在38℃，于内胎均匀涂抹凡士林，并吹气直至压力合适拧紧阀门。待公马阴茎勃起爬跨时，采精人员用手将阴茎导入假阴道采精。公马射精后，迅速将假阴道拿至室内，取下集精杯，用玻璃棒挑除副性腺，纱布过滤精液备用。

2.3精液质量评价

精液采集完成后，取1滴，100倍下观察精液运动情况，评价精液质量。活力高于0.35，进行后期处理和输精。

2.4精液处理

2.4.1浓缩精液细管保存及运输 用INRA96稀释液1:1稀释原精。3 000 r/min（约818 g离心力）离心5 min。去上清，管底为浓缩精液。按1:2～1:4比例用INRA96稀释液稀释浓缩精液。摇匀后装入0.5 mL细管中备用。

2.4.2常规胶皮管输精精液准备用煮沸法去除脂肪颗粒的马奶作为精液稀释液，于采精后用已处理预热马奶稀释原精（根据活力、密度及所配母马数量决定稀释倍数），吸入注射器中备用。

2.5人工授精

2.5.1子宫角细管输精保定好发情母马，消毒阴唇外阴部，将已装入细管精液的输精器缓缓插入阴道内。中指通过子宫颈口，另一只手握住输精器向前推送，使输精器枪头在中指下进入子宫内，推不动即停止推送并固定，将阴道内的手臂取出五指并拢伸入直肠深处，此时手掌向下可以感觉到输精器及马子宫分叉处。另一只手将输精器前端先斜向上，使输精器进入排卵侧子宫体内使其和输精器成直线，然后将输精器前端缓慢导入此侧子宫角内输精。

2.5.2子宫体输精保定好发情母马，消毒阴唇外阴部，将连接有精液玻璃注射器的输精胶管插入阴道内。四指握住输精胶管将输精胶管推送到马子宫颈口至子宫体分叉处，另一只手握住玻璃注射器，利用下巴或前胸向前推送，将精液推送至子宫内。

2.6孕检

配种后13 d直肠检查，检查卵巢上卵泡发育情况，并于17 d进行B超诊断，判断受胎情况。

3　结果与分析

3.1输精方法对受胎率的影响

本试验在同一配种马群中，由同一名技术员进行直肠把握检测卵泡发育并配种，采取随机选择，对比3种输精方法的妊娠情况。结果显示，以子宫角细管输精所得受胎率最高，与胶管输精所得情期受胎率差异显著（P＜0.05）。详见表1。

表1　不同输精方法对受胎率的影响

3.2浓缩精液不同保存方式对受胎率的影响

浓缩精液在15 mL离心管、0.5 mL细管中保存约3 h（其中半小时为运输时间），然后根据马卵泡发育情况配种。结果显示，15 mL离心管保存获得的情期受胎率较高（P＜0.01）。见表2。

表2　浓缩精液不同保存方式对受胎率的影响

3.3单次追精与多次输精对受胎率的影响

同一配种马群中，由同一名技术员进行直肠把握检测卵泡发育并配种，采取随机选择，验证在一天2次检马情况下排卵马单次追精的妊娠情况，结果显示，多次输精受胎率显著高于单次追精。见表3。

表3　不同输精次数对受胎率的影响

4　讨论

1）国外马业发达国家目前主要采用直肠把握子宫角顶端和腹腔镜宫管结合处输精，其最低有效输精量分别为5×106个和1×106个直线前进精子［2］。子宫角细管输精较传统胶管输精有两大优势：其一，精液用量少，输精效率高。子宫角细管输精每次输细管精液1～2支。精液在浓缩时依据马不同精子密度，大概2～4 mL原精可浓缩成1支细管精液，其有效精子数在1亿以上。传统胶管输精所用原精量5～20 mL，是细管精液的2～5倍。其次，降低人工授精对马子宫的影响，子宫角细管授精每次输入精液量0.5～1.0 mL（2/3左右为稀释液），而胶管输精每次输入子宫体的精液量20～30 mL（2/3左右为马奶），子宫对马奶的脂肪颗粒及蛋白吸收能力有限。这点也很好地说明了胶管输精+子宫角细管输精的结果好于胶管输精。但子宫角细管输精较胶管输精时间长，通常为胶管输精所用时间的2～3倍，并且使用直检手套多，这是因为子宫角输精为了保证细管精液能够输送至排卵侧子宫角而需要进行的直肠把握。

2）浓缩精液由于精子密度大，在狭小空间的存活时间受到影响，可能是由于大量精子运动耗能、所产生的废弃物对小环境内的pH值等理化指标影响较大。浓缩精液在0.5 mL细管常温保存2 h后活力明显下降，而在15 mL离心管中常温条件下能够保存12 h，这也直接说明浓缩精液只能在0.5 mL细管当中进行短时间保存，最好做到精液装管后就立即使用，若要进行长距离运输，则需要使用较大的容器。

3）马卵巢卵泡发育及排卵是个漫长的过程，由于受营养、天气、草场等因素的影响，部分马匹排卵时间可持续1周［3-4］。这对直检时卵泡发育判断及配种次数都带来很大的影响。单次追精情期受胎率没有多次输精高，但53.62%的结果尚可接受。按此结果推算，3个情期，配种群的总情期受胎率至少在80%以上，这对于由于条件受限不能开展子宫角细管输精，且优秀种公马数量有限的配种地区具有实践意义。配种开始时，一部分排卵延迟马采用单次追精，可有效地减少种公马精液的使用量，而且不影响群体受胎率。

［1］ 姚新奎，欧阳文，谭晓海，等.新疆特色马产业探析［J］.新疆农业科学，2007，44（2）：199-205.

［2］ Samper J C，Gomez I，Sanchez R.Rectally guided or hysteroscopic insemination：is there a difference［J］.Equine Vet Sci，2008：28，640-644.

［3］ Samper J C，Plough T.Techniques for the insemination of lowdoses of stallion sperm［J］.Reproduction in Domestic Animals，2010，45（2）：35-39.

［4］ Davies Morel MCG.Equine artificial insemination［M］.UK：CPI Antony Rowe，Eastbourne，2006.

营养与饲料

S821.3

A

2095-3887（2015）03-0022-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.03.007

2015-04-01

新疆维吾尔自治区马产业重大专项（201130101-2）

霍飞（1980-），男，助理研究员，硕士。

陈静波，研究员，博导，主要从事动物胚胎工程及动物繁殖技术的研究与推广工作。