葎草提取物治疗仔猪腹泻

周平平，宫新城，赵兴华，钟秀会

（1.河北农业大学理学院，河北保定071001；2.河北农业大学动物医学院，河北保定071001;3.河北农业大学中兽医研究所，河北保定071001）

为了验证葎草提取物对仔猪腹泻的治疗效果，对葎草中挥发油、多糖、黄酮进行了提取，并对小鼠腹泻模型进行了治疗，同时用葎草总提取物对仔猪腹泻进行了治疗。结果葎草挥发油葎草多糖和葎草黄酮都对大肠杆菌引起的腹泻有抑制作用；葎草总提取物经母猪给药可以预防仔猪腹泻，试验组的腹泻率为11.28%，明显低于对照组，差异显著（P＜0.05），死亡率也比对照组降低了8.1 个百分点；直接给仔猪用药，治愈率为90%。说明葎草提取物对仔猪腹泻有治疗作用。

葎草味甘、苦，性寒，具有清热解毒，主水痢的功效，民间常用来治疗家畜腹泻，尤其是家兔腹泻。但因为葎草茎蔓多具小刺，导致采集困难，同时葎草粗纤维多，不利于直接添加到动物饲料中，导致当前葎草在兽医临床应用较少，因此对葎草有效成分进行了提取并对仔猪腹泻进行了治疗。

1 试验材料和方法

1.1 材料

葎草，采于河北定州河北农业大学中兽医学院标本园；大肠杆菌，购于中国兽药监察所；小鼠，购于河北医科大学实验动物中心；紫外-可见分光光度计（SP- 756 型），上海光谱仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 葎草有效成分提取

准确称取葎草粉末250 克，首先用水蒸气蒸馏法提取挥发油；药渣用水提醇沉法提取多糖；滤液部分浓缩得到黄酮A 部；再将药渣部分醇提得到黄酮B 部。

1.2.2 大肠杆菌致泻模型

大黄200 克，煎煮浓缩至200 毫升。将20～22 克昆明系小鼠50 只，随机分为5 组，分别灌服生理盐水、葎草挥发油、葎草多糖、黄酮A 部、黄酮B 部0.5 毫升/只，每日给药一次，连续给药3 天。末次给药时，每只小鼠注射氢化可的松0.1毫升，并腹腔接种大肠杆菌2×108/只，观察小鼠排出稀粪数和排出的时间。

1.2.3 葎草总提取物经母猪给药防治仔猪腹泻

将提取的葎草挥发油、葎草多糖和葎草黄酮混合后，加入医用淀粉，混合均匀，阴干后用粉碎机粉碎，制成每克含生药1 克的葎草总提取物，按1%添加于猪的基础日粮中。

选择年龄胎次相近的预产期相近的经产母猪20 头，随机分为2 组，即对照组和试验组，每组10 头。在怀孕第107 天时，在对照组的基础日粮中添加1%的医用淀粉，在试验组的基础日粮中添加1%的葎草总提取物，直到产后7 天。28天断奶，观察至产后35 天。

测定指标：

平均初生重：以窝为单位测定初生仔猪的平均初生重。

生长性能：自断奶之日起记录每组仔猪平均日增重。

腹泻率、死亡率：试验开始后，每天观察仔猪排粪情况，记录每天每组发生腹泻个体数、死亡只数，并记录死亡仔猪的饲养天数，计算每组仔猪的腹泻率、死亡率。

1.2.4 葎草总提取物仔猪给药防治腹泻

选择健康无病、体重相似的21日龄仔猪30头，随机分为3 组，每组10 头，分别为空白对照组、葎草总提取物组、环丙沙星治疗组。分组后注射氢化可的松1 毫升/只，两小时后，每头仔猪接种大肠杆菌6×108个/只，发病后各组分别灌服生理盐水2 毫升/千克体重、葎草总提取物2 克/千克体重、环丙沙星溶液2 毫升/千克体重。观察各组仔猪的死亡率，治愈率。

取十二指肠，加入一定量的PBS 及1 微克/升蛋白酶抑制剂。用匀浆器将标本匀浆充分，3000 转数/分条件下离心20 分钟左右。取上清液测按试剂盒说明测定cAMP 和cGMP 含量。

2 试验结果

2.1 葎草提取结果

试验中得到具有特殊浓香气味的棕褐色挥发油(0.95±0.08)克，所采葎草中挥发油的含量约为0.38%。得水提粗多糖(2.98±0.15)克，葎草中多糖的含量为1.19%。药渣部分得到黄酮（B）部(0.75±0.04)克；提取多糖的滤液部分得到黄酮（A）部(4.20±0.21)克，葎草中总黄酮的含量为1.98%。

2.2 葎草各成分对大肠杆菌致泻小鼠的作用

在注射大肠杆菌后3 小时，小鼠开始精神倦怠，被毛猬立，浑身发抖，并且开始腹泻，72 小时后没死的小鼠不再出现腹泻现象。排出稀粪情况差异也比较大，葎草挥发油组，排稀粪次数为（45.67±3.37）次，葎草多糖组排稀粪次数为（35.35±2.36）次，对大肠杆菌引起的腹泻有一定的抑制作用，与生理盐水组相比差异显著（P＜0.05），而葎草黄酮（A）能够明显的抑制大肠杆菌引起的腹泻，为（30.37±3.13）次，与生理盐水组相比差异极显著（P＜0.01），详见表1。

2.3 葎草总提取物经母猪给药治疗结果

2.3.1 葎草总提取物经母猪给药对仔猪生产性能的影响

在母猪怀孕107 天时，在母猪的基础日粮中添加葎草总提取物，结果发现试验组和对照组产仔数没差异，而试验组初生均重为（1.45±0.48）千克，显著高于对照组，差异显著（P＜0.05）；断奶日均重试验组也显著高于对照组，差异显著（P＜0.05）；断奶后试验组的平均日增重为（339.57±8.48）克，明显高于对照组，差异显著（P＜0.05）。详见表2。

表1 葎草不同提取部位对大肠杆菌致泻小鼠的作用

表2 葎草总提取物经母猪给药对仔猪生产性能的影响

2.3.2 葎草总提取物经母猪给药对仔猪腹泻率与死亡率的影响

由试验可以看出葎草总提取物经母猪给药可以预防仔猪腹泻，试验组的腹泻率为11.28%，明显低于对照组，差异显著（P＜0.05）；死亡率也比对照组降低了8.1 个百分点。结果详见表3。

表3 葎草总提取物经母猪给药对仔猪腹泻率与死亡率的影响

2.4 仔猪直接用药对仔猪腹泻治疗效果

2.4.1 葎草总提取物对仔猪腹泻的治疗效果

试验观察发现，各组仔猪在接种大肠杆菌3小时后都开始出现腹泻现象，粪便稀软不能成形。到4 小时腹泻率达80%，5.5 个小时时全部表现出腹泻现象，个别出现剧烈水泻。这时进行治疗处理，对照组灌服生理盐水2 毫升/千克体重，试验组灌服葎草总提取物2 克/千克体重，而化药对照组灌服环丙沙星溶液2 毫升/千克体重。结果对照组只有一只没有死亡，其余9 只死亡；而试验组和化药组治愈率都为90%，详见表4。

表4 葎草总提取物对仔猪腹泻的治疗效果

2.4.2 葎草总提取物对腹泻仔猪肠道上皮cAMP 和cGMP 含量影响的比较

由于对照组只有一只没有死亡，因此试验只测定了葎草总提取物组和环丙沙星组中cAMP和cGMP 含量，结果葎草总提取物组cAMP 和cGMP 含量分别为298.58±25.67pmol/g（皮摩尔/克）和21.17±3.18pmol/g，均低于环丙沙星组，差异显著（p＜0.05）。详见表5。

表5 葎草总提取物和环丙沙星对腹泻仔猪肠道黏膜cAMP 和cGMP 含量影响

3 讨论

《唐本草》认为葎草有“止水痢”的功效，这也是民间用葎草治疗家兔等动物腹泻的依据所在。但是因为葎草茎蔓多生小刺，采集不便或者葎草粗纤维多等原因，导致其还未在临床广泛应用。把葎草的挥发油、多糖和黄酮提取出来，去掉粗纤维等不易被动物利用的成分为葎草的进一步开发利用提供方便。当前仔猪腹泻主要是由大肠杆菌引起的，因此试验中用大肠杆菌建立了小鼠腹泻模型，发现葎草挥发油和葎草多糖对大肠杆菌引起的腹泻有一定的抑制作用，与生理盐水组相比差异显著；而葎草黄酮（A）能够明显的抑制大肠杆菌引起的腹泻，与生理盐水组相比差异极显著。因此认为葎草治疗动物腹泻可能与葎草挥发油、葎草多糖和葎草黄酮都有关。

仔猪腹泻可影响仔猪生长发育和降低饲料报酬而造成较大经济损失。因此在试验中我们使用大肠杆菌复制了仔猪腹泻模型。各组仔猪在灌服大肠杆菌3 小时后都开始出现腹泻现象，粪便稀软不能成形。到4 小时腹泻率达80%，5.5 个小时时全部表现出腹泻现象，个别出现剧烈水泻。这时进行治疗处理，对照组灌服生理盐水2毫升/千克体重，试验组灌服葎草总提取物2克/千克体重，而化药对照组灌服环丙沙星溶液2 毫升/千克体重。结果对照组只有一只没有死亡，其余9 只死亡；而试验组和化药组治愈率都为90%，说明葎草总提取物，对仔猪腹泻的治疗效果和环丙沙星相当。在试验过程中由于对照组接种大肠杆菌后，有9 头死亡，只有一头存活，因此只测定了葎草总提取物和环丙沙星组cAMP 和cGMG 的含量。大肠杆菌可产生两种肠毒素即不耐热肠毒素和耐热肠毒素。不耐热肠毒素可激活上皮细胞中的腺苷酸环化酶，从而导致细胞内ATP 转化为cAMP，cAMP 可促使小肠液和电解质分泌增加。耐热肠毒素能激活上皮细胞内的鸟苷酸环化酶，使细胞内的GTP 转化为cGMP，cGMP 也能促使肠液分泌增加。因此降低肠道上皮cAMP、cGMP 能够减少肠道上皮细胞的液体分泌，从而达到缓解腹泻的作用。在本试验中葎草总提取物组肠道上皮cAMP、cGMP含量均比环丙沙星低，造成此种差异的原因可能是由于葎草总提取物中某些中药组分有干扰肠毒素和肠上皮受体结合。

当然对于仔猪腹泻还是以预防为主，由于仔猪腹泻发病比较早，只能采取经母猪给药的方式，由实验可以看出，在孕107 天给药后不仅可以预防仔猪腹泻，提高成活率，还可以提高仔猪的初生重，并对后期仔猪的增长有一定促进作用。