血清和卵泡液中NGF水平与PCOS的相关性研究

王春艳，樊桂玲，易建平

血清和卵泡液中NGF水平与PCOS的相关性研究

王春艳1，樊桂玲2，易建平2

目的检测多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清与卵泡液中神经生长因子（NGF）水平，探讨NGF水平与PCOS发生的相关性以及对PCOS患者助孕结局的影响。方法收集2011年12月—2012年11月在唐山市妇幼保健院生殖遗传科行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的PCOS患者65例及同期因输卵管因素行IVF-ET的非PCOS患者31例作为对照组。采用ELISA检测96例患者绒毛膜促性腺激素（HCG）注射日血清和取卵日卵泡液中NGF的水平。比较PCOS组与正常对照组妊娠与未妊娠患者血清与卵泡液中NGF的水平。结果PCOS患者血清［（14.38± 0.42）ng/L］及卵泡液［（9.61±0.49）ng/L］中的NGF水平明显高于正常对照组［（11.39±0.38）ng/L、（7.55±0.40）ng/L］；PCOS患者妊娠组血清［（14.22±0.35）ng/L］和卵泡液［（9.30±0.31）ng/L］中的NGF水平低于未妊娠组［（14.51±0.43）ng/L、（9.86±0.46）ng/L］，差异有统计学意义（均P＜0.01）。结论PCOS患者血清和卵泡液内存在NGF水平高表达，血清和卵泡液内过高的NGF水平可能不利于PCOS患者成功妊娠。

多囊卵巢综合征；神经生长因子；血清；卵泡液

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是生育期女性常见的内分泌紊乱性疾病，是引起育龄妇女不孕的重要原因之一。尽管有关PCOS的病因及发病机制的研究已经经历了60多年，但是目前其具体发病原因临床仍无定论。自从在卵泡液中检测到神经生长因子（nerve growth fac⁃tor，NGF）受体后，各国学者开始研究NGF对卵泡发育和生长的影响，有关NGF对卵巢功能影响的研究报告主要来自动物，人类研究较少。本研究通过检测体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期PCOS患者血清与卵泡液中NGF水平，从细胞因子水平探讨NGF与PCOS发生的相关性以及NGF对PCOS患者助孕结局的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2011年12月—2012年11月在唐山市妇幼保健院生殖遗传科就诊、行IVF-ET的不孕患者96例，其中符合鹿特丹标准［1］的PCOS患者65例。另选取同期因输卵管因素行IVF-ET治疗的非PCOS患者31例作为对照组。患者年龄23～38岁，平均（29.74±3.17）岁。治疗前所有患者夫妇双方均签署促排卵药物治疗及方案知情同意书。

1.2 主要仪器及设备人神经生长因子试剂盒（上海永叶），化学发光免疫分析仪（瑞士ROCHE公司），高精度加液器（美国FALCON公司），恒温培养箱（GNP-9080），超低温冰箱（SANYO），γ计数器（美国R&D），自动洗板机（北京原子能），低速离心机（科大创新股份），阴道超声（ALOKA-3500），CO2培养箱（美国FORMA）。

1.3 方法

1.3.1 方案介绍所有患者均采用长方案，即口服去氧孕烯炔雌醇（妈富隆）第10天开始降调节，促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a，曲普瑞林，广东丽珠制药有限公司）0.05～0.1 mg/d，皮下注射，直至注射HCG日。于降调节第20天时检测血促卵泡生成素（FSH）＜5 IU/L，促黄体生成素（LH）＜5 IU/L，雌二醇（E2）≤50 ng/L及阴道超声检查子宫内膜厚度≤5 mm，最大卵泡径线＜10 mm时认为垂体完全达到降调节，加用促性腺激素（Gn）-福特蒙（瑞士伊伯萨制药有限公司），起始剂量为150～300 IU/d，根据E2水平和阴道超声监测卵泡大小调整Gn的使用剂量。

1.3.2 标本采集（1）血清：每例患者经超促排卵后于注射HCG日晨空腹采肘正中静脉血3 mL，立即送实验室3 000 r/ min离心10 min，分离上层血清，将血清置-80℃保存待测。（2）卵泡液：在阴道超声监测下取卵，仅留取卵泡平均直径在15 mm以上，清亮且无血染的卵泡液10 mL，离心，3 000 r/ min离心10 min，分离上清液，将分离出的上清液置-80℃冰箱中保存待测。

1.3.3 NGF水平检测采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测IVF-ET周期中96例患者HCG日血清及取卵日卵泡液内NGF水平。

1.3.4 统计学方法采用SPSS 16.0软件包进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差表示，2组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PCOS组与对照组血清及卵泡液NGF水平的比较PCOS患者血清及卵泡液内NGF水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

Tab.1 Comparison of NGF in serum and follicular fluid between PCOS group and control group表1 PCOS组与对照组血清及卵泡液内NGF水平的比较（ng/L，）

Tab.1 Comparison of NGF in serum and follicular fluid between PCOS group and control group表1 PCOS组与对照组血清及卵泡液内NGF水平的比较（ng/L，）

＊＊P＜0.01

组别PCOS组对照组t n 65 31血清NGF水平14.38±0.42 11.39±0.38 33.819＊＊卵泡液NGF水平9.61±0.49 7.55±0.40 20.597＊＊

2.2 PCOS患者妊娠组与未妊娠组血清及卵泡液中NGF水平比较PCOS患者妊娠组HCG日血清及取卵日卵泡液中NGF水平显著低于未妊娠组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

Tab.2 Comparison of NGF level in PCOS patients between pregnancy and none-pregnancy groups表2 PCOS患者妊娠组与未妊娠组NGF水平的比较（ng/L，）

Tab.2 Comparison of NGF level in PCOS patients between pregnancy and none-pregnancy groups表2 PCOS患者妊娠组与未妊娠组NGF水平的比较（ng/L，）

＊＊P＜0.01

组别妊娠组未妊娠组t n 29 36血清NGF水平14.22±0.35 14.51±0.43 2.990＊＊卵泡液NGF水平9.30±0.31 9.86±0.46 5.888＊＊

3 讨论

PCOS是一种以多毛、肥胖、卵巢多囊样改变及无排卵为特征的内分泌紊乱及多系统代谢异常性疾病，普遍存在高雄激素血症和胰岛素抵抗，在生育年龄妇女中发病率约为5%～10%［2］，是引起育龄女性不孕的主要原因。目前PCOS发生的确切病因仍不完全清楚，因此对于PCOS病因的研究一直是生殖内分泌领域研究的热点。

3.1 NGF与卵泡发育的关系有研究认为，卵泡的发育过程复杂，由许多不同来源的细胞因子和内分泌激素在不同时间和不同空间上共同完成［3］。NGF是一种由神经元支配的、靶组织分泌的小分子多肽，由118个氨基酸残基组成，属于神经生长因子家族。NGF在人类发育卵泡、成熟卵泡颗粒细胞中均有表达，而其高亲和力受体（Trk-A）主要在成熟卵泡表达。NGF除了对卵巢所支配神经的支持营养作用外，对早期卵泡发育和排卵起着直接的调节作用［4］。魏春霞［5］研究表明NGF具有促使人原始卵泡转化为初级卵泡以及促进其进一步生长发育的作用，是一种调节原始卵泡向初级卵泡转化和早期卵泡生长发育的促进因子。

3.2 NGF与PCOS患者卵泡发育的关系始基卵泡启动生长的过程复杂而精细，主要受到旁分泌、自分泌及内分泌机制的调控。Dissen等［6］研究表明PCOS大鼠卵巢中过量的NGF降低卵巢排卵能力，并且导致早期窦卵泡的发育，最显著的卵巢形态特征是缺乏排卵前大的卵泡，该研究还显示NGF通过Trk-A，激活酪氨酸激酶信号系统，促进排卵过程，然而过量的NGF则会引起内分泌和非内分泌组织的病理变化。另有PCOS大鼠模型研究发现，卵巢内NGF及其低亲和力受体合成增加，大鼠失去动情周期，卵巢内给予对抗NGF及其受体的抗血清后，大鼠能够恢复动情周期及排卵［7］。陈炳锦等［8］通过研究PCOS患者的成熟与未成熟卵泡的颗粒细胞NGF及其受体的表达，认为PCOS可能存在NGF高表达基础，NGF可能与卵泡成熟有关。

3.3 NGF与PCOS患者妊娠结局的关系随着促性腺激素的广泛应用和IVF-ET技术的发展，PCOS患者经常联合应用促排卵［9］治疗，但在控制性促排卵中常会出现高获卵量、低胚胎质量等问题，据统计其排卵率可达70%～80%，但妊娠率仅30%左右［10］。有学者认为这可能与PCOS患者的内分泌环境紊乱及代谢异常所致的卵子质量降低有关［11］。Dissen等［6］通过大鼠模型研究认为PCOS组卵巢内NGF生成过量，通过与卵巢内的NGF受体作用，使卵巢发生形态学变化，同时伴随着促黄体绒素（LH）水平的提高，过量的NGF不但降低卵子的发育潜能，亦可导致较多早期卵泡的同时发育。

本研究发现，卵泡液内NGF水平的高表达可能是PCOS患者早期多卵泡发育、优势卵泡选择障碍，并最终导致无排卵的卵巢局部影响因子之一。同时血清和卵泡液内NGF水平的过高表达并不利于卵母细胞的发育，影响卵子质量，降低胚胎发育潜能，从而影响PCOS患者的妊娠结局，这也可部分解释PCOS患者高获卵量、低胚胎质量及流产率高的原因。

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（2014-12-03收稿2015-04-24修回）

（本文编辑李鹏）

The relationship between NGF in serum and follicular fluid and polycystic ovary syndrome

WANG Chunyan1，FAN Guiling2，YI Jianping2
1 Qianan Maternal and Child Health Hospital，Tangshan 064400，China；2 Maternal and Child Health Hospital of Tangshan

ObjectiveTo investigate the relationship of nerve growth factor（NGF）between serum and follicular fluid in patients with polycystic ovary syndrome（PCOS），and its effect on pregnancy outcomes.MethodsFrom December 2011 to November 2012，65 PCOS patients suffered with in vitro fertilization-embryo transfer（IVF-ET）were included in PCOS group and 31 non-PCOS patients with IVF-ET were used as control group.The expressions of NGF in serum and follicular fluid were detected by ELISA on the injection day of chorionic gonadotropin（HCG）.The expression levels of NGF in serum and follicular fluid were compared between PCOS group and control group.ResultsThe NGF levels in serum［（14.38±0.42）ng/L］and follicular fluid［（9.61±0.49）ng/L］were significantly higher in PCOS group than those of control group［（11.39±0.38）ng/L and（7.55±0.40）ng/L］.In PCOS group，NGF levels in serum［（14.22±0.35）ng/L］and follicular fluid［（9.30±0.31）ng/L］were significantly lower in pregnant group than those of non-pregnant group［（14.51±0.43）ng/L，（9.86±0.46）ng/L，P＜0.01］. ConclusionThe increased levels of NGF in serum and follicular fluid of PCOS patients contribute to the pathogenesis of PCOS.The high expression of NGF in serum and follicular fluid may be harmful to pregnancy in PCOS patients.

polycystic ovary syndrome；nerve growth factor；serum；follicular fluid

R711.7

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.09.015

1河北唐山，迁安市妇幼保健院生殖科（邮编064400）；2唐山市妇幼保健院

王春艳（1979），女，研究生，硕士学位，主治医师，主要从事生殖内分泌方面研究