野生黑斑狗鱼血液学常值的研究

张永泉，尹家胜，郭文学，白庆利

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，哈尔滨　150070）



野生黑斑狗鱼血液学常值的研究

张永泉，尹家胜，郭文学，白庆利*

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，哈尔滨150070）

摘要：对野生黑斑狗鱼血液生理、生化和流变学指标进行比较研究。结果表明,红细胞平均体积、甘油三酯、碱性磷酸酶和阴离子间隙等指标呈显著性差异（P<0.05），血小板分布宽度和尿素氮差异极显著（P<0.01），其余生理生化指标差异均不显著（P>0.05），雌性个体全血粘度值均明显高于雄性个体，且雌雄个体全血粘度均随切变率增加呈典型的对数模式降低，方程分别为Y=-2.711ln(x)+19.966，R2=0.9672；Y=-0.755ln(x)+7.4088，R2= 0.9524。这些血液生理学数据表明，未成熟前黑斑狗鱼雌雄个体血液主要指标值已存在差异，雌性个体体内脂肪含量要高于雄性，雄性黑斑狗鱼耐低氧能力要高于雌性个体，所得检测指标除谷丙转氨酶、谷草转氨酶/谷丙转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、低密度脂蛋白和肌酸激酶个体变异系数较大外，其余血液指标均可作为野生健康黑斑狗鱼基础血液指标参数，为黑斑狗鱼在自然资源监测和人工养殖鱼病防治提供重要理论参考。

关键词：黑斑狗鱼；血液；生理指标；生化指标

网络出版时间2015-3-13 15:21:00

[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150313.1521.008.html

张永泉,尹家胜,郭文学,等.野生黑斑狗鱼血液学常值的研究[J].东北农业大学学报, 2015, 46(3): 81-86.

黑斑狗鱼（Esox reicherti），俗称狗鱼、勾心鱼，属于鲑形目、狗鱼亚目、狗鱼科、狗鱼属。黑斑狗鱼是中国重要的经济冷水性鱼类，分布于北纬44°以北的寒冷水域，主要在多瑙河、涅斯特河和欧洲、西伯利亚、咸海水系及北美、库页岛等地，在中国分布于黑龙江、乌苏里江、嫩江、松花江等水系支流[1]。

该鱼肉质坚韧少刺、味道鲜美、生长迅速。黑斑狗鱼以前是松花江重要的经济鱼类，但由于过度捕捞和水质污染，松花江黑斑狗鱼已近绝迹。乌苏里江上游（虎头镇对岸）的大型支流—伊曼河（属俄罗斯），是乌苏里江黑斑狗鱼最大的产卵场之一，黑斑狗鱼作为乌苏里江重要的经济鱼类，近年资源量急剧下降[2]。本研究团队近年一直致力于黑斑狗鱼开发，目前以初步实现野生黑斑狗鱼人工繁育，开展黑斑狗鱼相关基础研究对于野生资源恢复保存以及为市场提供新养殖品种具有重要意义。

血液是动物体内循环系统的重要组成部分，起物质运输、生理调节及疾病防御等重要功能[3]。血液指标作为全世界公认的重要生理、病理和毒理学指标之一，目前已被广泛地引用于评价哺乳[4]、禽类[5]和鱼类[6]的健康状况、营养状况及对环境的适应状况，目前国内外学者已对白斑狗鱼（Esox lu⁃cius linnaeuse）、军曹鱼（Rachycentron canadum）、大马哈鱼（Oncorhynchus keta）、虹鳟（Oncorhynchus mykiss）和鲈鱼（Dicentrarchus labrax）[7-11]等鱼类血液学方面进行大量研究，但有关黑斑狗鱼的研究尚未见报道。

本研究测定黑龙江流域野生黑斑狗鱼血液生理、生化和流变学指标，并对雌雄个体进行对比分析，可丰富我国鱼类血液生理基础理论研究，也为黑斑狗鱼自然资源监测和人工养殖鱼病防治提供重要理论依据。

1　材料与方法

1.1材料

试验鱼采自乌苏里江虎头段，抽取健康，鱼体完整且游动正常的3龄野生鱼，在中国水产科学研究院黑龙江水产研究所渤海冷水性鱼类试验站同一水泥池中暂养30 d，在暂养期间投喂野生鲫鱼保证所有试验鱼处于相同生活环境。

1.2血样制备

采血前饥饿24 h，随即选取雌雄个体各15尾，放入0. 6 mL·L-1苯氧乙醇中进行麻醉，鱼尾椎静脉采血8.0 mL以上立刻分装，其中3.5 mL血样肝素抗凝、1.0 mL血样用EDTA抗凝、3.0 mL血样（不加抗凝剂）自然析出血清，将分装好的血液样本放入4℃冰箱中保存，用于生理、生化和流变学指标测定。

1.3生理指标及测定方法

参考姜宏波等[12]和徐革锋等[13]方法对黑斑狗鱼

血样进行血液理化指标测定分析，测定指标如下：红细胞压积Hct（%）、红细胞计数RBC（1012·L-1）、红细胞平均体积MCV（fl）、血红蛋白含量HGB （g·L-1）、血小板分布宽度PDW、血小板体积MPV、血小板压积PCT、血小板计数PLT、红细胞分布宽度RDW（%）、平均红细胞蛋白浓度MCHC（%）、平均红细胞蛋白含量MCH（pg）、单核细胞百分比MO （%）、淋巴细胞LY（%）、中性粒细胞NE（%）。

1.4生化指标测定

试验共测定33种血液生化指标：钾K（mmol· L-1）、钠Na（mmol·L-1）、氯Cl（mmol·L-1）、钙Ca （mmol·L-1）、磷P（mmol·L-1）、镁Mg（mmol·L-1）、总蛋白TP（g·L-1）、白蛋白ALB（g·L-1）、球蛋白GLB （g·L-1）、白球比A/G、谷丙转氨酶ALT（IU·L-1）、谷草转氨酶AST（IU·L-1）、谷草转氨酶/谷丙转氨酶AST/ALT、r-谷氨酪转肽酶GGT（IU·L-1）、碱性磷酸酶ALP（IU·L-1）、总胆红素TBIL（μmol·L-1）、直接胆红素DBIL（μmol·L-1）、间接胆红素IBIL （μmol·L-1）、总胆汁酸TBA（μmol·L-1）、甘油三酯TG（mmol·L-1）、总胆固醇CHOL（mmol·L-1）、高密度脂蛋白HDL（mmol·L-1）、低密度脂蛋白LDL （mmol·L-1）、乳酸脱氢酶LDH（IU·L-1）、肌酸激酶CK（IU·L-1）、a-羟丁酸脱氨酶HBDH（IU·L-1）、尿素氮BUN（mmol·L-1）、肌酐CREA（μmol·L-1）、二氧化碳结合力CO2（mmol·L-1）、阴离子间隙AG （mmol·L-1）、血浆渗透压（OSM）m OSM·L-1、葡萄糖GLU（mmol·L-1）、血淀粉酶PAMY（IU·L-1），上述所有指标使用美国BECKMAN公司DXC800型贝克曼全自动生化分析仪检测。1.5血液流变学指标测定

在（20±0.1）℃测试温度下，选择切变率由低至高方式分别选用23、46.0、115.0、230.0 s-14个切变率（γ）测定全血粘度ηb和血沉[13]。

1.6数据的统计分析

所有数据均通过SPSS 11.5统计软件完成处理分析。利用独立样本t检验，进行两两比较，结果用平均值±标准差（X±SD）表示，当P<0.05时为差异显著，P<0.01时为差异极显著，各血液指标变异系数按下式计算：变异系数（CV）=（标准差/平均值）×100%。

2结果与分析2.1野生黑斑狗鱼血液生理指标测定

黑斑狗鱼血液生理指标详细数值见表1，雌雄个体血液生理指标进行对比分析，结果表明：雌性黑斑狗鱼中性粒细胞、淋巴细胞、血红蛋白含量、红细胞压积、红细胞平均体积和平均红细胞蛋白浓度高于雄性个体，其中只有红细胞平均体积呈显著差异（P<0.05）；雄性黑斑狗鱼单核细胞、红细胞和血小板分布宽度高于雌性个体，其中血小板分布宽度呈极显著差异（P<0.01）；雌雄黑斑狗鱼血液生理指标中单核细胞百分比、淋巴细胞和红细胞平均体积比较接近，但雄性黑斑狗鱼中性粒细胞、平均红细胞蛋白浓度、红细胞数、血红蛋白含量和红细胞压积和红细胞分布宽度等6项血液生理指标变异系数明显高于雌性黑斑狗鱼，雄性个体血小板分布宽度变异系数明显低于雌性黑斑狗鱼。2.2野生黑斑狗鱼血液生化指标的测定

共测定雌雄黑斑狗鱼血液生化指标33项详细值见表2，经分析黑斑狗鱼雌雄个体血液生化指标中钠、镁和白球比3项指标基本相同；钾、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷草转氨酶/谷丙转氨酶、r-谷氨酪转肽酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、高密度脂蛋白、肌酸激酶、a-羟丁酸脱氨酶、尿素氮、二氧化碳结合力、阴离子间隙、血浆渗透压、葡萄糖和血淀粉酶共18项血液生化指标为雄性黑斑狗鱼高于雌性黑斑狗鱼；其中氯、钙、磷、总蛋白、白蛋白、球蛋白、碱性磷酸酶、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、乳酸脱氢酶和肌酐共12项血液生化指标为雌性黑斑狗鱼高于雄性黑斑狗鱼。利用SPSS统计软件对33项血液生化指标进行对比分析，雌雄个体尿素氮值差异极显著（P<0.01）；碱性磷酸酶、甘油三酯和阴离子间隙3项指标呈显著性差异（P< 0.05），但其余钠、钾、镁、白球比、谷草转氨酶、r-谷氨酪转肽酶、高密度脂蛋白、肌酸激酶、a-羟丁酸脱氨酶、二氧化碳结合力、血浆渗透压、葡萄糖、血淀粉酶、氯、钙、磷、总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶/谷丙

生理指标　雌性Female雄性Male Physiological indicesX±SDCV(%)X±SDCV(%) NE11.83±1.4912.6211.69±2.2819.52 LY91.72±1.6311.5991.18±7.698.44 MO0.33±0.1546.150.35±0.1749.48 RBC1.66±0.1810.651.71±0.3620.53 HGB99.33±11.4111.4996.50±24.6425.53 HCT29.53±3.4911.8129.23±5.5819.09 MCV*178.17±5.493.08171.25±4.432.58 MCHC336.50±6.691.99327.50±22.556.88 RDW13.80±0.654.7414.42±1.5110.49 PDW**17.61±12.2769.7322.27±1.717.68

表1雌雄黑斑狗鱼血液生理指标比较

Table 1 Blood physiological indices of both male and female Esox reicherti

注:“*”表示雌性黑斑狗鱼和雄性黑斑狗鱼间差异显著（P< 0.05）;“**”表示差异极显著（P<0.01）。下同。

Note:“*”means significant difference between males and females at 0.05 level;“**”means highly significant difference at 0.01 level. The same as below.转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、低密度脂蛋白和肌酸激酶等共29项血液生化指标差异均不显著（P>0.05）。雌雄黑斑狗鱼部分生化指标个体间变化差异较大，其中谷丙转氨酶、谷草转氨酶/谷丙转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、低密度脂蛋白和肌酸激酶等8项血液生化指标变异系数均高达50%以上，其余钠、钾、镁和白球比、谷草转氨酶、r-谷氨酪转肽酶、高密度脂蛋白、肌酸激酶、a-羟丁酸脱氨酶、尿素氮、二氧化碳结合力、阴离子间隙、血浆渗透压、葡萄糖、血淀粉酶、氯、钙、磷、总蛋白、白蛋白、球蛋白、碱性磷酸酶、甘油三酯、总胆固醇、乳酸脱氢酶和肌酐等共25项血液生化指标变异系数均低于50%。

表2　雌雄黑斑狗鱼血液生化指标比较Table 2　Comparison of blood biochemical indices of both male and female Esoxreicherti

2.3野生黑斑狗鱼血液流变学的测定

图1所示为野生黑斑狗鱼雌雄个体在23、46.0、115.0、230.0 s-14个切变率全血粘度的曲线图，雌雄黑斑狗鱼全血粘度在切变率为23 s-1时达到最高值，此时雌雄黑斑狗鱼全血粘度分别为11.95和5.20 s-1，此后随着切变率增加雌雄黑斑狗鱼的全血粘度均呈典型对数模式降低，当切变率达到最高值230.0 s-1，雌雄黑斑狗鱼全血粘度降低到最小值，此时雌雄个体全血粘度分别为5.58和3.43 s-1，雌雄黑斑狗鱼全血粘度随着切变率的变化方程分别为：

Y=-2.711ln（x）+19.966，R2=0.9672

Y=-0.755ln（x）+7.4088，R2=0.9524

图1中明显可见，在任何切变率下雌性个体全血粘度值均明显高于雄性个体。雌雄黑斑狗鱼血液血沉值分别为1.21±0.43和1.09±0.36。

图1　雌雄黑斑狗鱼不同切变率下全血粘度Fig. 1　Blood viseosity value of both male and femaleEsox reicherti at different shear rates

3　讨论

3.1鱼类血液学研究

血液是鱼类体内一种极其重要组织，因此血液学也成为鱼类生理生态学重要研究内容之一[6,14]，同时，健康状态鱼类血液指标研究也将为鱼类人工养殖、自然资源复壮和保护工作提供技术支持。目前国内外已对鱼类血细胞参数、血液无机成分和有机成分展开大量测定研究，同时也对影响血液学指标的因素进行深入探讨分析[14]。不同种之间血液学指标差异明显，徐革锋等对细鳞鱼（Brachymystax lenok）、哲罗鱼（Hucho taimen）、虹鳟和银鲑（Oncorhynchus kisutch）研究发现红细胞数、红细胞压积和血红蛋白浓度存在很大差异[13,15]，由高到低依次为银鲑>虹鳟>细鳞鱼>哲罗鱼。经过不同生物学方法培育同一种鱼类血液学指标也有明显差异，例如姜宏波等报道普通牙鲆（Paralichthys olivaceus）和克隆牙鲆红细胞数量、血红蛋白、红细胞压积、平均血红蛋白量、碱性磷酸酶、总胆固醇、尿素氮、白球比、谷草转氨酶/谷丙转氨酶和谷草转氨酶等生理生化指标都存在极显著差异[12]。贾钟贺等报道二倍体和三倍体山女鲑鳟红细胞数、红细胞压积和平均红细胞蛋白含量存在极大差异[16]。刘伟等[9]、Lund等[17]、Thomas等[18]、Bahmani等[19]和Ruane等[20]通过对大麻哈、斑点鲈（Pomoxis nigromacufatus）、黑头呆鱼（fathead min⁃nows）、波斯鲟（Acipenser persicus）、欧洲鳇（Huso huso）和鲤鱼（Common carp）等鱼类的研究认为盐度、温度、季节更替、营养状况和环境胁迫等外部环境改变对鱼类血液指标具有重要影响。

3.2野生黑斑狗鱼血液指标分析探讨

Danilo等和Lay等认为红细胞有关指标与鱼类运动方式密切相关，运动能力较强鱼类红细胞数和血红蛋白含量均高于喜欢静栖鱼类[21-22]。黑斑狗鱼是大型淡水鱼类，游泳速度较快，自然环境下主要以江河中小型鱼类为食，研究得出黑斑狗鱼红细胞数和血红蛋白含量明显高于草鱼（Ctenopha⁃ryngodon idllus）[23]、鲢（Hypophthalmichthys molitrix）和鳙（Aristichthys nobilis）[24]等饵料鱼。周玉等认为草鱼在繁殖期雌雄个体部分血液指标差异显著[6]，而鲢在未成熟前，血液主要指标值是存在雌雄差异[24]。本研究得出黑斑狗鱼未成熟前雌雄个体部分血液指标同样存在显著差异，作者分析该现象应由鱼的种类决定。Holland等研究表明，体积较小的红细胞具有较大的相对表面积和较短的扩散距离，可加速血红蛋白对氧的吸收和释放,从而具有耐低氧的特性[25]。研究得出雌雄黑斑狗鱼红细胞平均体积存在显著差异，且雄性黑斑狗鱼红细胞平均体积低于雌性黑斑狗鱼，因此认为同等条件下雄性黑斑狗鱼耐低氧能力高于雌性黑斑狗鱼，黑斑狗鱼红细胞平均体积低于同属白斑狗鱼[7]，说明黑斑狗鱼耐低氧能力强于白斑狗鱼，更加有利于活鱼运输。甘油三酯是动物体内含量最多的脂类，大部分组织均可利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏和脂肪等组织还可以进行甘油三酯合成，在脂肪组织中贮存，雌性黑斑狗鱼血液甘油三酯明显高于雄性，且呈显著差异，作者分析这可能与雌雄个体生殖系统构成有关，随着鱼类生长卵巢和精巢也在不断增大，而卵巢发育所需能量要远高于精巢，因此这就需要雌性个体体内摄取、合成和积累的脂肪远高于雄性个体，这与黑斑狗鱼解剖过程中发现雌性体腔内脂肪明显多于雄性个体的实际情况相符。动物血液与机体免疫功能密切相关,血液中某些指标是反映机体健康状况及抗病能力的重要参数[3,6,12]，研究发现黑斑狗鱼血液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶/谷丙转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆汁酸、低密度脂蛋白和肌酸激酶变异系数均高达50%以上，由于上述指标个体差异系数较大，因此建议上述指标不应作为判定鱼类健康的有效指标。研究发现雌雄黑斑狗鱼血液中尿素氮、碱性磷酸酶和阴离子间隙也存在显著差异，原因有待深入研究分析。

4　结论

本研究所得数据均来自体质健康的黑斑狗鱼，这些血液学数据表明：

a.未成熟前黑斑狗鱼雌雄个体血液主要指标值存在差异，雌性个体体内脂肪含量要高于雄性，雄性黑斑狗鱼耐低氧能力要高于雌性个体。

b.雌雄黑斑狗鱼血液测量所得红细胞压积、红细胞计数、红细胞平均体积、血红蛋白含量、血小板分布宽度、血小板体积、血小板压积、血小板计数、红细胞分布宽度、平均红细胞蛋白浓度、平均红细胞蛋白含量、单核细胞百分比、淋巴细胞、中性粒细胞、钾、钠、氯、钙、磷、镁、总蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比、谷草转氨酶、r-谷氨酪转肽酶、碱性磷酸酶、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋、乳酸脱氢酶、a-羟丁酸脱氨酶、尿素氮、肌酐、二氧化碳结合力、阴离子间隙、血浆渗透压、葡萄糖、血淀粉酶等血液理化指标均可作为野生健康黑斑狗鱼基础血液指标参数，为黑斑狗鱼在自然资源监测和人工养殖鱼病防治提供理论参考。

c.在利用黑斑狗鱼血液学值时，注意雌雄黑斑狗鱼血液理化指标中红细胞平均体积、碱性磷酸酶、甘油三酯和阴离子间隙4项指标存在显著性异（P<0.05）；血小板分布宽度和尿素氮值差异极显著（P<0.01）。

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Zhang Yongquan, Yin Jiasheng, Guo Wenxue, et al. Study on hematological constant value of wild Esox reicherti [J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2015, 46(3): 81-86. (in Chinese with English abstract)

Study on hematological constant value of wild Esox reichert

i/ZHANGYongquan, YIN Jiasheng, GUO Wenxue, BAI Qingli(Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Harbin 150070, China)

Abstract:The value of blood physiology, biochemistry and hemorheology of wild Esox reicherti was studied in this article. The results indicated that the indices of mean corpuscular volume (MCV), triglyceride (TG), alkaline phosphatase (ALP), anion gap (AG) was significiantly different among all individuals, and the difference of both platelet distribution width (PDW) and blood urea nitrogen (BUN) was highly significant, thus, no difference among other physiological and biochemical indices. The blood viseosity value of both males and females showed a logarithmic decline as the shear rate increased with equations as follows: Y=-2.711ln(x)+19.966, R2=0.9672, Y=-0.755ln(x)+7.4088, R2=0.9524. but the blood viseosity value of female Esox reicherti was higher than males. This indicated that the difference of hematological constant value between males and females was existed before sexual maturation, the fat content of females was higher but anti-hypoxia capacity was lower than males. Among all the hematological data, except for some indices suchbook=46,ebook=82as glutamic-pyruvic transaminase (ALT), oxalocetie transaminase/glutamic-pyruvic transaminase (AST/ALT), total bilirubin (TB), direct bilirubin (DB), indirect bilirubin (IB), total bile acid (TBA), low density lipoproteins (LDL), creatine kinase (CK) should be exclude in terms of their high variation coefficient, the others can be used as the basic hematological parameters of Esoxreicherti, which can provide theoretical references for nature resource monitoring and disease prevention of Esoxreicherti.

Key words:Esoxreicherti；blood；physiological index；biochemical index

*通讯作者：白庆利，研究员，研究方向为鱼类遗传育种与繁殖，E-mail: bqlharbin@163.com

作者简介：张永泉（1982-），男，助理研究员，硕士，研究方向为冷水性鱼类遗传育种与繁殖。E-mail: atai0805@163.com

基金项目：国家科技支撑计划项目（2012BAD25B10）；公益性行业科研专项（201003055）；国家电网新源控股有限公司丰满大坝全面治理（重建）工程环保科研项目（JSFW2014-75）

收稿日期：2014-05-19

文章编号：1005-9369（2015）03-0081-06

文献标志码：A

中图分类号：S965.1