放射性肺损伤大鼠肺组织MMP-2、TlMP-2蛋白在百令胶囊干预下表达变化的实验研究

衷敬华，王祥财，许明君，施华球，王钇力，黄　莉，张积仁（通信作者）

（1赣南医学院第一附属医院 肿瘤科，江西赣州341000；2南方医科大学珠江医院 肿瘤中心，广东广州510282）

放射性肺损伤大鼠肺组织MMP-2、TlMP-2蛋白在百令胶囊干预下表达变化的实验研究

衷敬华1，王祥财1，许明君1，施华球1，王钇力1，黄莉1，张积仁2（通信作者）

（1赣南医学院第一附属医院 肿瘤科，江西赣州341000；2南方医科大学珠江医院 肿瘤中心，广东广州510282）

目的：分析放射性肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）、金属蛋白酶特异性组织抑制物2（TIMP-2）蛋白在百令胶囊干预下表达变化，探讨百令胶囊防治放射性肺损伤效果。方法：将141只SD大鼠（清洁级，6周龄，雄性）随机分为随机分为正常对照组（21只）、模型组（30只）、百令预防组（30只）、百令治疗组（30只）、地塞米松组（30只），每组于不同时间点随机处死大鼠，免疫组织化学法观察肺组织MMP-2、TIMP-2蛋白的表达。结果：相比于模型组，百令预防组、百令治疗组MMP-2、TIMP-2蛋白表达明显降低（P＜0.01或P＜0.05）。结论：放射性肺损伤病理变化与TIMP-2和MMP-2表达失衡相关，调节大鼠肺组织MMP-2/TIMP-2比例平衡是百令胶囊保护放射性肺损伤大鼠的可能机制。

放射性肺损伤；百令胶囊；基质金属蛋白酶2；金属蛋白酶特异性组织抑制物2

作为胸部肿瘤放射治疗最为常见并发症之一，放射性肺损伤的病理实质为外基质成分在肺泡和间质内沉积及纤维组织过度修复造成肺组织结构的紊乱。研究表明，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）及其特异性组织抑制物（tissue inhibitors of metallo proteinase，TIMPs）在放射性肺损伤及纤维化形成过程中起着重要的调节作用。本研究通过对放射性肺损伤大鼠肺组织MMP-2、TIMP-2蛋白在百令胶囊干预下表达变化进行分析探讨百令胶囊防治放射性肺损伤效果，进而探讨可能的发生机制。

1　材料与方法

1.1实验动物：141只6周龄SD大鼠（清洁级，雄性）。

1.2药物：百令胶囊（杭州中美华东制药有限公司生产，规格：0.2克/片，批准文号：国药准字Z10910036），取1000粒百令胶囊，加入生理盐水1000ml制成浓度为0.2g/ml（200/1000）混悬液。醋酸地塞米松片（常州康普药业有限公司生产，规格：0.75毫克/片，产品批号：201135，国药准字H32021354），取24片加入90ml生理盐水制成浓度为0.2mg/ml（18/90）混悬液。

1.3实验仪器与试剂：VARIAN23EX型直线加速器（美国瓦里安生产），MMP-2，TIMP-2试剂盒。

1.4方法

1.4.1动物分组：将141只6周龄SD大鼠（清洁级，雄性）随机分为正常对照组（21只）、模型组（30只）、百令预防组（30只）、百令治疗组（30只）、地塞米松组（30只）。

1.4.2模型制作：采用直线加速器X线全胸单次照射建立放射性肺损伤大鼠模型，300cGy/min，总剂量20Gy。

1.4.3给药方法：百令预防组于照射前14d开始灌服百令胶囊，其余各组均于造模后第2天开始灌胃，1次/d。

1.5取材方法及指标检测：照射2、4、6周后空白组取7只，其余各组随机取10只，以10%水合氯醛麻醉后取右肺，10%福尔马林溶液固定24h后石蜡包埋，连续切片5 μm，采用S-P法进行免疫组化。

1.6统计学方法：采用SPSS19.0统计分析实验数据，计量资料以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，多重比较采用LSD-t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1　各组大鼠不同时间下肺组织MMP-2表达量比较（¯x±s）

表2　各组大鼠不同时间下肺组织TIMP-2表达量比较（¯x±s）

2　结果

2.1各组大鼠不同时间下肺组织MMP-2表达量比较：模型组大鼠肺组织中MMP-2均高表达，相比于模型组，百令预防组，百令治疗组各时间点大鼠肺组织中MMP-2表达均降低（P＜0.01）；地塞米松组各时间点与模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.2各组大鼠不同时间下肺组织TIMP-2表达量比较：模型组大鼠肺组织中TIMP-2表达量呈升高趋势；模型组2、4、6周大鼠肺组织中TIMP-2表达量明显高于百令预防组（P＜0.05或P＜0.01）。百令预防组2、4周TIMP-2表达降低较模型组差异无统计学意义（P＞0.05）、第6周差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3　讨论

放射性肺损伤可使肺脏发生广泛纤维化，危及生命。其主要病理特征为基质金属蛋白酶调控的肺组织结构的重塑。MMPs是一组金属依赖性蛋白酶，MMPs/TIMPs则是影响处于不断产生和降解的动态平衡中的细胞外基质的最主要的一组酶系。本研究结果显示，相比于空白组，模型组大鼠2至4周肺组织MMP-2蛋白及TIMPs表达明显增加，MMP-2/TIMPs比例升高，提示2～4周降解作用增强可导致肺组织损伤。模型组大鼠肺组织4周后TIMP-2表达增加而MMP-2蛋白表达逐渐降低，MMP-2/TIMPs比值降低，因降解作用减弱，基质沉积增强而导致肺纤维化出现。上述结果提示，调节大鼠肺组织MMP-2/TIMP-2比例平衡是百令胶囊保护放射性肺损伤大鼠的可能机制。百令预防组在2、4周优于百令治疗组，第6周差异无统计学意义，说明百令胶囊干预越早，对早期炎症阶段的调节作用越明显。本研究结果可以进一步证明MMP-2和TIMP-2的综合变化可能参与放射性肺损伤的发生、发展。

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R818.7

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1002-2376（2015）12-0003-02

江西省卫计委中药局基金支持［2014A143］

2015-09-12