慢性HBV感染相关肝细胞癌血清GP73和AFP-L3水平及意义

姚向波，尹 毅，王黑豆，王凤兰

（西安市第八院肝病三科，西安 710061）

慢性HBV感染相关肝细胞癌血清GP73和AFP-L3水平及意义

姚向波，尹 毅，王黑豆，王凤兰

（西安市第八院肝病三科，西安 710061）

目的：探讨慢性HBV感染相关肝细胞癌血清中高尔基体蛋白73（GP73）和甲胎蛋白异质体（AFP-L3）水平的变化及其在疾病诊断中的价值意义。方法：应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测167例慢性HBV感染相关肝癌，92例肝硬化患者和134例慢性肝炎血清GP73和AFP-L3水平的变化，并分析其余ALP、GGT、ALT、AST和AFP的相关性。结果：慢性HBV感染相关肝细胞癌患者血清GP73和AFP-L3水平明显高于肝硬化和慢性肝炎，与ALP、GGT和AFP均存在明显相关性。结论∶血清肿瘤标志物均具有广谱性，诊断 HCC 时缺乏高度的特异性，进行单项检测时，易弃漏部分阳性患者，阳性率不高。联合检测 GP73和AFP-L3 可联合检测提高诊断率，为早期发现及治疗提供依据。

高尔基体蛋白73；甲胎蛋白异质体；慢性HBV感染相关肝细胞癌

原发性肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球恶性肿瘤中排名第五，死亡率居第三位［1］，而在我国是死亡率排名第二的恶性肿瘤，且目前发病率和死亡率具有逐渐上升的趋势。其病因和发病机制尚未确定，目前认为与肝硬化、病毒性肝炎以及黄曲霉素等化学致癌物质和环境因素有关［2］。我国是HBV感染的重灾区，在我国原发性肝癌的发病原因中，90%以上患者合并慢性HBV感染，同时慢性HBV感染后，疾病逐渐发展成慢性肝炎，肝硬化和肝细胞癌［3］。随着国内外在肝细胞癌进行的各种研究，在这方面的治疗也取得了较大的进展，但是因为在临床过程中，肝细胞癌诊断时，往往是在中晚期，而此时期患者治疗效果差，严重影响了疾病的治愈率和患者的生存率，因此肝细胞癌的早期诊断显得尤为重要。

GP73（Golgi protein 73）是功能未知的Ⅱ型高尔基体跨膜蛋白，国外科学家是在研究CMV病毒感染患者的肝细胞中发现的，此种蛋白的发现为肝细胞癌的诊断提供了积极的意义［4］。AFP（Alpha-Fetoprotein，AFP），属胚胎性蛋白，是目前诊断肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的重要指标，但是仅AFP对HCC诊断是不够的，研究中发现AFP存在3种结构片段，其中AFP-L1存在于肝炎和肝硬化中，为非恶性肝病的主要片段；AFP-L2主要来源于卵黄囊肿瘤，也可在孕妇血清中检出；AFP-L3为HCC细胞特有［5-6］。因此我们研究GP73和AFP-L3在慢性HBV感染相关肝细胞的表达，对疾病的诊断具有一定的指导意义。

1　资料与方法

1.1一般资料 所有入组病例均来自西安市第八医院2012年3月～2014年4月住院患者。慢性HBV感染393例，其中男性267例，女性126例，平均年龄52.23± 13.61岁。其中慢性乙型肝炎患者134例，男性90例，女性44例，平均年龄46.14±岁；乙肝肝硬化患者92例，男性63例，女性29例，平均年龄51.94±11.66岁；乙肝肝细胞癌患者167例，男性114例，女性53例，平均年龄59.23±9.43岁。所有患者 HBsAg 均为阳性，诊断标准依据中华医学会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》及第4届全国肝癌学术大会讨论通过的原发性肝癌诊断标准［7-8］，且半年内未使用免疫调节剂和抗病毒治疗。研究对象均为中国陕西籍或长期居住在陕西地区的汉族人，且均为随机选择，无血缘关系。

1.2实验方法

1.2.1标本的收集 入组患者清晨空腹抽血，均无菌操作采静脉血3mL，置于EDTA试管中，保证标本无溶血，室温下以1200r/min离心10min，离心后将上清液移至EP管中，标记后置于-20℃冰箱中冻存，备用。

1.2.2血清GP73、AFP-L3、AFP、肝功能、血常规及凝血酶原时间水平的测定 采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清GP73和AFP-L3水平，购于北京热景生物技术有限公司，按照ELISA试剂盒说明书操作；AFP 检测采用美国雅培 AXSYM 免疫化学发光仪；肝功能、血常规、凝血酶原时间指标均采用标准方法检测。

1.3统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，非正态采用中位数（四分位数）表示。正态分布且方差齐的多组均数比较采用方差分析和LSD-t 检验；非正态分布的数据进行对数转换后行方差分析和LSD-t 检验。两组均数间比较如为正态性分布采用t检验，相关分析采用pearson相关检验，多组间计数资料比较采用X2分割法检验，两组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1HBV感染不同临床诊断血清GP73和AFP-L3水平比较 167例慢性HBV感染相关肝细胞癌血清GP73水平为287.5（96.7～498.1）ng/mL，血清AFP-L3水平391.7（66.8～599.2）ng/mL，92例肝硬化血清GP73水平为117.6（23.4～267.2）ng/mL，血清AFP-L3水平98.2（27.7～326.4）ng/mL，134例慢性肝炎血清GP73水平84.5（19.1～198.3）ng/mL，血清AFP-L3水平54.1（29.3～210.5）ng/mL，肝细胞癌血清GP73和AFP-L3水平明显高于肝硬化和慢性肝炎（P=0.001和P＜0.001），结果见表1。

表1　慢性HBV感染不同临床诊断的血清GP73和AFP-L3水平比较

2.2慢性HBV感染相关肝细胞癌血清GP73和AFP-L3水平的相关性 表2显示，167例慢性HBV感染相关肝细胞癌血清GP73水平与血清ALP（r=0.921，P＜0.001），GGT（r=0.572，P=0.003）和AFP（r=0.803，P＜0.001）具有相关性，差异具有统计学意义。血清AFP-L3水平与ALP（r=0.716，P＜0.001），GGT（r=0.478，P＜0.001）和AFP（r=0.891，P＜0.001）具有相关性，差异具有统计学意义。血清GP73和AFP-L3水平与HBV DNA，ALT，AST，TBIL和ALB无相关性。

表2　慢性HBV感染相关肝细胞癌血清GP73和AFP-L3水平的相关性分析

3　讨论

我国的肝细胞癌绝大多数与慢性HBV感染有关，经历慢性肝炎、肝硬化而至肝细胞癌，肝细胞炎症坏死可能对癌变有重要作用。随着疾病诊断和治疗水平的不断提高，血清肿瘤学标志物越来越受到临床研究工作者的重视，其作为一种无创性的诊断检查，在疾病发展的监测中有着积极的意义。GP73是一种跨膜糖蛋白，作为一种新近发现，并且广泛研究的肿瘤标记物，在肝细胞癌的诊断中，有着积极的研究意义，它是在CMV感染后引起的肝炎中发现的，其在多种组织中均有表达，尤其在肝脏细胞中广泛表达。在多种肝脏疾病中，GP73表达均异常增高［4，9］。近年来越来越多的研究关注GP73在肝细胞癌的表达，研究结果证实GP73蛋白的表达在肝癌患者的肝组织中显著升高，且与广泛的纤维化程度和肝脏炎症一致，它是一个颇具潜力的、新的肿瘤标志物，与肿瘤的产生过程、预后和转移密切相关。为使肝细胞癌患者诊断的阳性率提高，许多学者认为血清肿瘤标志物联合检测对肝癌患者的诊断有明显的提高作用［10］。我们的研究也发现，在慢性HBV感染相关的肝细胞癌中，血清中GP73水平是明显升高的，高于肝硬化和慢性肝炎。在慢性HBV感染中，血清GP73的水平，随着疾病的进程不断升高，这提示感染 HBV 的患者血清 GP73 表达水平普遍上调，发展为 HCC 后血清 GP73 水平显著升高，国内外学者的研究和我们是一致的。在慢性HBV感染相关的肝细胞癌中，血清ALP，GGT的变化，对疾病的诊断和预后也有一定的意义，我们在进行相关性研究时，也发现GP73与ALP和GGT具有相关性，随着ALP和GGT的升高，血清GP73也是升高，并且在肝细胞癌中最高。

目前较为公认的肝细胞癌的血清学标记物中，AFP的应用较为广泛，也是诊断HCC的重要手段，AFP是一种胚胎性糖原蛋白，在HCC中由肝癌细胞产生并分泌，逐渐进入血液循环中，因此其在血液中特异性强且含量较为稳定，但因其属于胚胎性蛋白，胚胎也能产生和分泌AFP，并且与肿瘤细胞所分泌的AFP有着共同的生化和免疫特点［11］。有研究发现，肝硬化、慢性肝炎、胚胎癌、胃癌等都伴有AFP一过性增高［12］，从一定程度上使原发性肝癌的诊断更为困难，当肝癌患者合并妊娠，慢性肝炎或者其他肿瘤肝脏转移时，就增加了诊断的假阳性率，因此寻找具有互补诊断意义且特异性强的检测指标显得更为重要。AFP-L3是AFP3个结构片段中的一段，其仅表达于HCC中，因此在HCC的诊断中特异性最高。曾有研究发现肝肿瘤患者血清AFP－L3水平高于慢性肝病患者，诊断肝癌的灵敏度和特异性分别为和70%和95.2%。另有一些研究表明，与肝病进展、肿，瘤分化程度及生物学恶性行为相关。因此，AFP－L3有望成为比更好的诊断及预测预后的标志物。我们的研究也发现，与慢性HBV感染相关的AFP-L3在慢性HBV感染相关的肝细胞癌中也普遍升高，明显高于肝硬化和慢性肝炎，且与ALP和GGT具有明显相关性。

总之，血清肿瘤标志物均具有广谱性，诊断 HCC时缺乏高度的特异性，进行单项检测时，易弃漏部分阳性患者，阳性率不高。联合检测 GP73和AFP-L3 可联合检测提高诊断率，为早期发现及治疗提供依据。

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Hepatocellular carcinoma associated with chronic HBV infection serum GP73 and AFP-L3 level and significance

Yao Xiang-bo， Yin Yi， Wang Hei-dou， Wang Feng-lan
（Department of Liver Disease， Xi'an Eighth Hospital，Xi'an 710061， China）

Objective To investigate the effect of chronic HBV infection in the Golgiassociated hepatocellular carcinoma serum protein 73（GP73） and Alpha fetoprotein heterogeneity （AFP-L3 ） level changes and the significance of its value in the diagnosis of disease. Methods Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） detection related hepatocellular carcinoma in 167 patients with chronic HBV infection， in 92 patients with liver cirrhosis 134 patients chronic hepatitis serum GP73 and AFP-L3 level， analyze the correlation between ALP， GGT， ALT， AST and AFP. Results The chronic HBV infection related hepatocellular carcinoma in patients with serum GP73（287.5ng/mL ） and AFP-L3（391.7ng/mL） levels were significantly higher than that of liver cirrhosis （117.6ng/mL） and chronic hepatitis B （84.5） and 54.1ng/mL）， and ALP， GGT and AFP there were significant correlation. Conclusion Diagnostic and prognostic index of serum GP73 and AFP-L3 conclusion can be used as chronic HBV infection related hepatocellular carcinoma， combined with ALP in clinic andprovide a basis for early diagnosis of GGT and AFP for chronic HBV infectionrelated hepatocellular carcinoma.

Golgi protein 73；Alpha fetoprotein heterogeneity；Chronic HBV infection related hepatocellular carcinoma

R735.7

A

1673-016X（2015）03-0114-03

2014-08-20

尹毅，E-mail:yiyi@163.com