化疗联合DC-CIK治疗多发性骨髓瘤的疗效及其对VEGF、IL-2及TNF-a的影响

高正兴，童朝晖，张 征，李 铮

（1.首都医科大学大兴医院，北京 102600；2.首都医科大学附属北京朝阳医院，北京 100020；3.北京康爱瑞杰生物科技股份有限公司，北京100026）

化疗联合DC-CIK治疗多发性骨髓瘤的疗效及其对VEGF、IL-2及TNF-a的影响

高正兴1，童朝晖2，张 征2，李 铮3

（1.首都医科大学大兴医院，北京 102600；2.首都医科大学附属北京朝阳医院，北京 100020；3.北京康爱瑞杰生物科技股份有限公司，北京100026）

目的：探讨负载自体抗原致敏的生物免疫疗法（DC-CIK）治疗多发性骨髓瘤（MM）的疗效及其对血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-2（IL-2）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：2012年1月～2012年12月选取本院收治的120例MM患者为研究对象，根据随机数字表将患者分为对照组及观察组各60例，对照组行常规性化疗治疗，观察组在对照组基础上应用负载自体抗原致敏的DC-CIK联合治疗。结果：观察组近期总有效率为88.33%高于对照组66.67%。观察组治疗后VEGF及TNF-α水平显著低于对照组，而IL-2水平高于对照组。对两组患者随访2年，观察组总体生存时间为（42.9±3.2）个月显著长于对照组（32.5±2.8）个月，观察组治疗后卡氏（KPS）评分及生存质量（QOL-BREF）评分显著高于对照组。结论：化疗联合负载自体抗原致敏的DC-CIK可有效提高MM患者治疗效果，延长患者生存时间，提高患者生存质量，其作用机制可能与DC-CIK能有效抑制VEGF、IL-2及TNF-a过表达有关。

多发性骨髓瘤；化疗；负载自体抗原致敏；生物免疫疗法；疗效

多发性骨髓瘤（MM）是一种源自于B细胞的恶性肿瘤，其临床特征为骨髓内浆细胞的异常增生［1］。化疗是MM目前主要的治疗方法之一，但化疗无法将MM细胞彻底清除，且残存的细胞可增加复发及耐药风险［2］。近年研究发现，肿瘤过继免疫治疗在该病治疗中起到重要的作用，其中以树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）为基础的免疫治疗受到人们的广泛关注［3］。其治疗机制是通过调动及激发机体免疫系统，增强机体微环境的免疫功能，从而杀伤及控制肿瘤细胞。白细胞介素-2（IL-2）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是由T淋巴细胞分泌的Th1型细胞因子在肿瘤发生及病情转归中起到重要的调节作用［4］。血管内皮生长因子（VEGF）作为内皮细胞及特异性血管通透性诱导因子在细胞有丝分裂中起到重要的作用［5］。本研究将探讨化疗联合DC-CIK对MM患者疗效及作用机制，现报告如下。

1　资料及方法

1.1临床资料 2012年1月～2012年12月选取本院收治的120例MM患者为研究对象，纳入标准：（1）符合《血液学诊断及疗效标准》对MM的诊断；（2）经X线检查、血M蛋白检查、骨髓细胞学检查确诊；（3）均为首诊患者且预计生存期＞6个月；（4）骨髓异常浆细胞＞15%；（5）所有患者经过伦理委员会的批准，均签署知情同意书。排除标准：（1）有化疗禁忌证者；（2）合并心、肝、肾等脏器功能不全者；（3）中途滑脱者；（4）随访资料不全者。根据随机数字表将患者分为对照组及观察组各60例，对照组：男 34例，女26例，年龄22～78岁，平均（48.2±3.4）岁，肿瘤类型：IgG型 18例，IgA型 22例，轻链型 20例；临床分期（TNM）：Ⅲa期28例，Ⅲb期 32例；观察组：男 30例，女30例，年龄20～75岁，平均（47.8±3.6）岁，肿瘤类型：IgG型 18例，IgA型 20例，轻链型 22例，临床分期（TNM）：Ⅲa期30例，Ⅲb期30例，两组患者性别、年龄、肿瘤类型、临床分期无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法 对照组患者行化疗治疗，化疗方案包括地塞米松+硼替佐米+吡柔比星方案、地塞米松+ 表柔比星+长春长辛方案、地塞米松+环磷酰胺+表柔比星+长春地辛方案，患者化疗周期＞3个周期。观察组在对照组治疗基础上应用DC-CIK治疗，患者在化疗前采集外周血单个核细胞（PBMNC）并分离，同时行细胞诱导。将树突细胞（DC）、杀伤细胞（CIK）加入PBMNC中按1:10混合培养7d。7d后将细胞离心洗涤后在第9～14d向患者体内回输，同时采用100mL生理盐水重悬后2h静脉滴注，每次（2.5～5.0）×109/L，每天1次。免疫治疗周期＞3个周期。

1.3疗效评价 治疗结束后采用RECIST 1.1标准对患者近期疗效进行评价，完全缓解（CR）：病灶疾病消失或肿瘤直径前小于10mm；部分缓解（PR）：病灶较治疗前缩小体积＞30%；疾病稳定（SD）：患者病灶既无增长也不见消失。疾病进展（PD）：病灶较治疗前体积增长大于20%。总有效率（RR）=（CR+PR）/总病例 ×100%。

1.4观察指标 （1）VEGF、IL-2及TNF-a表达水平：分别于治疗前及治疗结束后1周抽取患者静脉血5ml，经离心处理后，采用ELISA法测定患者血清VEGF、IL-2及TNF-a水平，VEGF试剂盒是由上海依科赛生物制品有限公司提供，IL-2试剂盒由上海拜力生物科技有限公司提供，TNF-a试剂盒由北京赛驰生物科技有限公司提供，操作过程严格按照试剂盒说明书进行操作。（2）对两组患者随访2年，记录患者患者平均生存时间，随访过程中采用卡氏评分（KPS评分）对患者健康状况进行评分，分值越高患者健康状况越好，采用生存质量测定量表（QOL-BREF）对患者生存质量进行评分，分值越高患者生存质量越理想。

1.5统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，组间计量资料采用t检验，组间率的比较采用χ2检验，P＜0.05具有可比性。

2　结果

2.1两组患者近期治疗效果对比 观察组近期总有效率为88.33%高于对照组66.67%，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1　两组患者近期治疗效果对比（例，%）

2.2两组患者治疗前后VEGF、IL-2及TNF-a水平对比 观察组治疗后VEGF及TNF-α水平显著低于对照组，而IL-2水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3两组患者生存时间及治疗前后KPS评分、QOLBREF评分对比 对两组患者随访2年，观察组总体生存时间为（42.9±3.2）个月显著长于对照组（32.5±2.8）个月，观察组治疗后卡氏（KPS）评分及生存质量（QOLBREF）评分显著高于对照组（P＜0.05），见表3。

3　讨论

以DC联合CIK为基础的免疫治疗受到人们的广泛关注，目前已有关于DC-CIK有效抑制恶性肿瘤生长的相关报道。DC是人体内最强的抗原提呈细胞，其在抗肿瘤免疫反应中起到重要的调控作用［6］。此外，DC细胞可激活初始的T淋巴细胞，并诱导免疫应答反应。CIK细胞具有广谱杀瘤、增殖速度快，杀瘤活性强、对多重耐药肿瘤敏感性高的特点，此外CIK杀瘤活性不受FK506与环孢素A等免疫抑制剂的影响，能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞凋亡，且不会对骨髓造血前体细胞产生明显的抑制作用［7］。两者联合应用可有效发挥免疫支持作用，且能有效修复患者免疫缺陷部分，提高患者免疫功能［8］。此外，DC-CIK均源自PBMNC，不会发生异体排斥，具有较高的安全性。本研究结果显示，在化疗的基础上应用DC-CIK能有效提高患者化疗效果，并能延长患者生存时间，提高患者生存质量。Sarkar等［9］认为以DC为基础的免疫疗法尽管可提高患者免疫功能，但由于受瘤负荷及体内免疫抑制环境的影响，因此当DC-CIK回输体内后较难维持，且容易凋亡失活，降低其治疗效果。然而本研究结果却相反，考虑其可能原因如下：尽管有研究认为化疗会抑制肿瘤应答机制，但更多研究发现，化疗可打破肿瘤抑制体制，可防止化疗与免疫队里，并能为机体提供后续免疫支持，可促进DC成熟，逆转肿瘤微环境，提供免疫靶向治疗的效果［10］。

表2　两组患者治疗前后VEGF、IL-2及TNF-a水平比较

表3　两组患者生存时间及治疗前后KPS评分、QOL-BREF评分比较

IL-2是由T细胞分泌的Th1型细胞因子，具有调节细胞生存、增殖及分化的作用，同时可促进抗体分泌及增强B细胞增殖能力，在杀灭NK细胞，促进单核细胞分化及成熟过程中同样起到重要的促进作用［11］。TNF-a也属于Th1型细胞因子，主要由激活的单核-巨噬细胞产生，具有极强的促炎及抗肿瘤功能［12］。VEGF为特异性血管通透性诱导因子，在血管形成过程中起到重要的作用，VEGF过表达与肿瘤细胞增殖及转移有密切的关系［13］。本研究结果显示，MM患者未接受治疗前，TNF-α、VEGF水平均高于治疗后，而IL-2水平低于治疗后，这提示VEGF、IL-2及TNF-a过表达可能参与MM病情发生及进展过程中。治疗后，观察组TNF-α、VEGF水平显著低于对照组，而IL-2水平高于对照组，进一步表明DC-CIK可发挥了免疫支持作用，促进CIK活性及免疫诱杀肿瘤细胞的能力，从而改善MM患者预后。

综上所述，化疗联合负载自体抗原致敏的DC-CIK可有效提高MM患者治疗效果，延长患者生存时间，提高患者生存质量，其作用机制可能与DC-CIK能有效抑制VEGF、IL-2及TNF-α过表达有关。

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The impact of efficacy and the levels of VEGF， IL-2 and TNF-a of chemotherapy combined immune therapy （DC-CIK） treatment of multiple myeloma

Gao Zheng-xing1， Tong Zhao-hui2， Zhang Zheng2， Li Zheng3
（1. Daxing Hospital， Capital Medical University， Beijing 102600， China；2. Chaoyang Hospital of Capital Medical University， Beijing 100020，China； 3. Beijing Kangairuijie Biotechnology Co Ltd. Beijing 100026， China）

Objective To investigate the impact of efficacy and the levels of growth factor （VEGF）， interleukin -2 （IL-2 ）and tumor necrosis factor -a （TNF-a） of chemotherapy combined DC-CIK treatment of multiple myeloma. Methods 68 cases of MM patients were divided into control group（n=34） and the observation group（n=34）. The control group were underwented with conventional chemotherapy treatment， observation group were underwented with DC-CIK combination therapy with autologous antigen sensitization. Results The total effective rate of observation group 88.23% were higher than control group 61.76%.The levels of VEGF and TNF-a of observation group were after treatment were lower than the control group， whereas the levels of IL-2 were higher than control group. Two groups of patients were followed up for 2 years， overall survival of observed group （42.9 ± 3.2） was longer than the control group （32.5 ± 2.8） months. The therapy Karnofsky （KPS） score and quality of life （QOL-BREF）of observation group after threatment were higher than control group. Conclusion Chemotherapy with autologous antigen-sensitized load DC-CIK can effectively improve the treatment of MM patients and prolong survival time and improve the quality of life of patients， and its mechanism may be related to DC-CIK can effectively inhibit VEGF， IL-2 and TNF- a overexpression.

multiple myeloma； chemotherapy； autologous antigen-pulsed load； biological immunotherapy； efficacy

R733.3

A

1673-016X（2015）03-0047-03

2015-03-20

高正兴，E-mail: ptxcpt11@163.com