舌质辨证治疗对脓毒性休克兔肠系膜微循环及炎症因子的影响*

范开亮　辛雪飞　田正云　周春利　郝浩孔立△代洪彬

（1.山东中医药大学附属医院，山东济南250001；2.山东省莱州市中医医院，山东莱州261499；3.山东中医药大学，山东济南250355；4.山东省济宁市中医院，山东济宁370800）

·研究报告·

舌质辨证治疗对脓毒性休克兔肠系膜微循环及炎症因子的影响*

范开亮1辛雪飞2田正云3周春利4郝浩1孔立1△代洪彬3

（1.山东中医药大学附属医院，山东济南250001；2.山东省莱州市中医医院，山东莱州261499；3.山东中医药大学，山东济南250355；4.山东省济宁市中医院，山东济宁370800）

目的观察舌质舌苔辨证诊疗对脓毒性休克新西兰大白兔模型微循环的影响。方法80只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为正常对照组及造模组，正常对照组10只，造模组70只。采用兔耳缘静脉注射脂多糖（LPS）制作大白兔脓毒症休克模型。根据舌质辨证分型，将同证型家兔随机分为治疗组和实验对照组，造模后1 h，治疗组给予相应中药灌胃治疗，正常对照组及实验对照组给予灌胃等量蒸馏水。监测0、3、6 h平均动脉血压、心率、血清乳酸（Lac）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内皮素-1（ET-1）水平变化。通过BI-2000医学图像分析系统观察3、6 h新西兰大白兔脓毒症休克肠系膜微动静脉管径、流速、流态、毛细血管网交点开放数，观察根据家兔舌质使用中药辨证治疗后各项指标的变化。结果根据家兔舌质使用中药辨证治疗能明显改善各治疗组脓毒症休克新西兰大白兔模型平均动脉压、心率、血清乳酸、血清TNF-α、血清ET-1水平及肠系膜微循环动静脉管径、流速、流态、毛细血管网交点开放数，与各造模实验对照组比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论应用舌质辨证治疗可以改善脓毒性休克动物模型的微循环状况。

脓毒性休克微循环舌质辨证TNF-αET-1

脓毒症存在着发病率高、病死率高、治疗费用高的“三高”现象，严重威胁人类健康。中医药在治疗脓毒症方面取得了良好疗效。本研究结合脓毒症病机，通过观察脓毒症动物模型舌质，运用中药辨证治疗，比较治疗前后各项指标变化，观察根据舌质辨证诊疗对脓毒性休克微循环的影响。现报告如下。

1　材料与方法

1.1动物新西兰大白兔80只，由山东省实验动物中心提供，雌雄不限，体质量2.0～2.5 kg，于动物实验室适应性饲养1周后禁食12 h，可自由饮水。

1.2试药与仪器中药由笔者所在医院科室具有丰富经验的中医专家开具，根据每组家兔的舌质利用中医理论、辨证论治选择方药，通过鼻饲给药。参附汤（人参45 g，炮附子18 g，甘草12 g）、清营汤合生脉散（水牛角15 g，生地黄15 g，玄参12 g，竹叶6 g，麦冬15 g，丹参12 g，人参18 g，五味子9 g）、桃红四物汤加味（当归12 g，川芎12 g，白芍12 g，生地黄15 g，桃仁12 g，红花6 g，人参18 g，黄芪30 g）。浓煎100 mL，质量浓度为平均含生药量为2.3 g/mL。大肠杆菌内毒素（LPS）：购自美国Sigma公司。10%水合氯醛：山东中医药大学动物实验中心提供。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内皮素-1（ET-1）酶联免疫分析试剂盒：购自上海逸峰生物科技有限公司。BI-2000医学图像分析系统（成都泰盟科技有限公司），罗氏cobas b123血气分析仪。

1.3分组与造模80只新西兰大白兔适应性饲养1周，按随机数字表法随机分为正常对照组10只及造模组70只。造模组采用兔耳缘静脉注射脂多糖2 mg/kg制备脓毒症休克模型［1］，观察其体温、心率、呼吸频率变化。实验动物麻醉后，进行颈动脉置管，并将插管连接颈内动脉监测仪器，持续心率、平均动脉压监测。注射LPS后平均动脉压（MAP）逐渐下降，下降至基础值的60%表明造模成功。造模成功后根据舌质情况进行分组，A组22例（舌质淡）、B组24例（舌质红绛）、C组20例（舌质紫暗），结合脓毒症病机分别辨证为阳气暴脱证、毒热内盛证、瘀血阻滞证［2］，另有3例为其他舌质，无法达到统计分组最小样本量，不进入分组统计，另有1例造模不成功，亦不进入分组统计。A、B、C组再随机分为中药治疗组（A2组、B2组、C2组）、实验对照组（A1组、B1组、C1组）。

1.4给药方法造模1 h后给药，各中药治疗组给予中药（10 mL/kg）灌胃治疗，阳气暴脱证应用参附汤治疗，毒热内盛证应用清营汤合生脉散治疗，瘀血阻滞证应用桃红四物汤加味治疗。正常对照组及各实验对照组给予等量蒸馏水灌胃。

1.5标本采集及检测1）肠系膜微血管管径、流速及交叉网点数测定。造模后3 h在腹中线做长约10 cm切口，暴露兔肠道，轻轻拉出回盲部一段肠系膜，将肠系膜轻轻平铺于盛有恒温0.9%氯化钠注射液（温度38℃左右）的台式灌流槽的观察台上，通过显微镜及BI-2000微循环图像分析系统，测量选定区域3 h、6 h肠系膜微血管管径、流速、流态、毛细血管网交点开放数。2）心率、平均动脉压监测。3）TNF-α、ET-1检测。于动物实验0 h、3 h、6 h在颈动脉置管处抽取动脉血1 mL做血气分析，检测乳酸，股静脉抽取静脉血1.5 mL离心20 min后冻存用于TNF-α、ET-1检测。

1.6统计学处理采用SPSS 20.0统计学软件。计量资料以（±s）表示；组间采用方差分析t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组心率、平均动脉压、乳酸、TNF-α、ET-1的比较见表1。与正常对照组比较，造模组心率、乳酸、TNF-α、ET-1值明显升高，血压显著下降，差异有统计学意义（均P＜0.01）。治疗6 h后，治疗组心率、乳酸、TNF-α、ET-1较治疗前明显下降，血压升高，与实验对照组比较，差异有统计学意义（均P＜0.01）。

表1　各组不同时间点指标比较±s）

表1　各组不同时间点指标比较±s）

与A1组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与B1组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与C1组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。下同。

TNF-α（pg/mL）ET-1（pg/mL）91.73±6.1660.23±6.63 94.37±4.9862.42±7.97 95.36±5.5468.53±8.82 A1组0h56.80±2.55249.36±7.234.80±0.26166.25±6.59132.13±4.97（n=11）3h55.82±3.14266.64±7.214.85±0.26246.69±7.27167.99±3.76 6h55.10±3.03271.18±7.195.24±0.32348.42±12.13197.10±4.31 A2组0h55.82±3.05250.01±7.194.81±0.16165.98±6.01133.86±5.03（n=11）3h62.51±3.49△257.09±7.31△4.55±0.14△245.25±7.37153.45±3.27△6h73.01±4.50△△243.18±6.59△△3.95±0.17△△202.45±10.41△△128.75±4.18△△B1组0h57.02±2.88249.08±6.924.64±0.23163.46±5.84133.39±4.54（n=12）3h56.50±2.84265.42±6.614.75±0.22243.98±9.43169.33±5.00 6h56.19±2.81270.17±5.975.10±0.24342.78±10.99197.48±5.84 B2组0h56.37±3.02250.17±5.804.71±0.19162.72±4.70131.86±4.96（n=12）3h63.71±3.67*256.75±5.99*4.43±0.18*241.73±4.69151.53±5.55*6h74.33±4.01**243.33±5.61**3.85±0.27**200.81±4.98**125.58±5.63**C1组0h56.46±3.49248.00±8.714.82±0.13164.85±8.64130.47±10.41（n=10）3h54.78±3.42265.70±9.434.99±0.33245.95±6.80168.42±7.59 6h54.96±3.92269.10±6.195.36±0.28364.71±19.32196.79±8.99 C2组0h57.41±1.78248.80±7.004.84±0.42159.39±8.59135.73±11.68（n=10）3h64.23±3.66▲255.50±9.71▲4.51±0.40▲251.49±8.23155.68±7.09▲6h75.62±2.84▲▲240.8±11.29▲▲4.00±0.30▲▲204.62±12.91▲▲129.99±6.91▲▲组别时间正常对照组0h（n=10）3h 6h MAP（mmHg）HR（次/min）Lac（mmol/L）99.73±2.62206.60±7.561.83±0.09 100.35±2.78207.90±7.501.86±0.12 100.64±2.73209.60±6.591.87±0.13

2.2各组肠系膜微静脉及微动脉管径、速度及交叉网点开放数比较见表2。与正常对照组比较，造模组微静脉及微动脉管径收缩、血流速度显著减慢，毛细血管交叉网点开放数明显减少（均P＜0.01）。与实验对照组比较，6 h时，治疗组微静脉及微动脉管径扩张，血流速度增快，毛细血管交叉网点开放数增多（均P＜0.01）。

表2　各组肠系膜微血管管径、流速及交叉网点数比较（±s）

表2　各组肠系膜微血管管径、流速及交叉网点数比较（±s）

交叉网点开放数504.10±20.357.00±1.05 505.60±23.647.10±0.99 A1组3h 29.54±0.39369.49±17.9715.76±0.84458.18±24.454.36±0.92（n=11）6h 29.57±0.35317.20±21.4316.18±0.67370.91±16.433.91±0.70 A2组3h 29.59±0.44378.32±17.8416.31±0.44459.27±26.584.64±0.92（n=11）6h 30.18±0.48△△395.42±15.13△△18.22±0.67△△483.36±21.99△△5.73±0.79△△B1组3h 29.53±0.45376.26±16.9615.83±0.60456.67±20.594.25±0.75（n=12）6h 29.56±0.45325.42±10.7616.22±0.55369.33±13.143.75±0.62 B2组3h 29.60±0.34386.88±15.9716.36±0.42457.17±22.144.50±0.90（n=12）6h 30.35±0.37**403.30±17.48**18.18±0.49**482.42±19.82**5.75±0.75**C1组3h 29.55±0.43373.62±17.9915.53±0.89453.00±29.264.30±0.95（n=10）6h 29.66±0.30321.82±22.3716.04±0.52366.40±21.963.90±0.74 C2组3h 29.69±0.56384.60±22.0316.17±1.02455.00±26.364.70±1.06（n=10）6h 30.43±0.41▲▲401.61±19.41▲▲18.06±0.93▲▲482.40±20.96▲▲5.80±0.92▲▲组别时间微静脉管径（μm）微静脉流速（μm/s）微动脉流速（μm/s）正常对照组3h（n=10）6h微动脉管径（μm）33.30±0.74457.30±19.8021.83±0.87 33.27±0.71460.13±23.7521.75±1.54

2.3各组微循环血液流态比较与正常对照组比较，正常对照组微血管流速大多为线流，造模组微血管血流显著减慢，可出现线粒流、粒缓流，甚至血流出现淤滞状态。与相应实验对照组比较，6 h时，各治疗组微血管流态较3 h时改善，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3　讨论

脓毒性休克早期即可出现微循环变化［3-5］，表现为微循环血流量下降，毛细血管通透性升高，血流速度减慢，微血栓形成，组织缺氧，乳酸增高，造成多器官功能衰竭。脓毒症休克常导致循环障碍，很多均与严重炎性反应有关，而TNF-α是炎症反应过程中急性早期促炎性因子［6-7］。TNF-α分泌可诱发IL-1、IL-6以及继发性炎症介质释放，同时能够增加内皮细胞通透性，引起循环血容量的降低、血液浓缩及组织低灌注，加重脏器损伤。ET-1由全身多种组织细胞合成，是一种具有强烈缩血管作用的生物活性多肽，可导致微循环损害、组织损伤和炎症反应［8-9］。

舌诊是中医重要诊断方法，具有悠久历史，随着疾病的发展变化，舌质舌苔也随之发生相应的变化，其犹如内脏的一面镜子。五脏系于舌，无脉不通于舌，舌诊为中医辨证提供了客观依据，脓毒症导致的微循环障碍在舌诊上有较好体现［10］。实验证实，中药辨证治疗能有效拮抗内毒素、下调促炎介质水平、调节免疫反应，并通过保护受损内皮改善微循环、避免内毒素攻击所致组织损伤［11-12］。

本研究通过耳缘静脉注射脂多糖制作新西兰大白兔脓毒症休克模型后，根据大白兔舌质进行分组，运用中医药辨证治疗。结果示治疗组家兔血乳酸、血清TNF-α、ET-1浓度明显降低，各时相点肠系膜微循环管径变粗，血流增快，脓毒症休克模型的微循环障碍明显改善，表明运用中医药辨证治疗脓毒症休克具有良好疗效，为临床运用中药辨证治疗脓毒症休克提供了有效的依据。

［1］DOI K.How to replicate the complexity of human sepsis：development of a now animal model of sepsis［J］.Crit Care Med，2012，40（11）：2722-2723

［2］中国中西医结合学会急救医学专业委员会，《中国中西医结合急救杂志》编辑委员会.脓毒症中西医结合诊治专家共识［J］.中华危重病急救医学，2013，25（4）：194-197.

［3］Pierrakos C，Vincent JL.Sepsis biomarkers：a review［J］.Crit Care，2010，14（1）：R15.

［4］Ventetuolo CE，Levy MM.Biomarkers：diagnosis and risk assessmentin sepsis［J］.Clin ChestMed，2008，29（4）：591-603.

［5］Kumar A，Haery C，Parrillo JE.Mmyocardial dysfunction in septic shock［J］.Crit Care Clin，2000，16（3）：251-287.

［6］杨毅，邱海波，刘松桥，等.羟乙基淀粉和林格液对感染性休克犬内脏器官灌注的影响［J］.中国危重病急救医学，2005，17（12）：743-746.

［7］Cain BS，Meldrum DR，Harken AH，et al.The Physiologic basis for anticytokine clinical trials in the treatment of sepsis［J］. Am Coll Surg，1998；186（3）：337-350.

［8］Novotny AR，Reim D，Assfalg V，et al.Mixed antagonist response and sepsis severity-dependent dysbalance of pro-and anti-inflammatory response at the onset of postoperative sepsis［J］.Immunobiology，2012，217（6）：616-621.

［9］Inoue K，Hirota M，Kimura Y，et a1.Further evidence for endothelin as an important mediator of pancreatic and intestinal ischemia in severe acute pancreatitis［J］.J Pancreas，2003，26（3）：218-223.

［10］高伟，张蓓蓓，张家留，等.不同舌色严重脓毒症患者舌下微循环差异的临床研究［J］.江苏中医药，2013，45（9）：31-32.

［11］肖艳，朱珲莹，郭力恒.运用《内经》理论试论益气扶正在脓毒症中的作用［J］.中国中西医结合急救杂志，2012，19（3）：175-176.

［12］陈明祺，鲁俊，蒋华，等.中医“阳气”理论与温阳思想在脓毒症治疗中的意义［J］.中国中医急症，2013，22（2）：216-217.

Effects of the Treatment Based on Tongue Syndrome Differentiation to Septic Shock in Rabbit Mesenteric Microcirculation

FAN Kailiang，XIN Xuefei，TIAN Zhengyun，et al.The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong，Jinan 250001，China

Objective：To study on the effect of diagnosis and treatment of tongue fur for septic shock on the microcirculation of New Zealand white rabbits.Methods：Septic shock model was made by injecting lipopolysaccharide（LPS）to the ear vein of New Zealand rabbits through rabbit.80 New Zealand white rabbits were randomly divided into the normal control group and the model group，10 rats in the normal control group，70 rats in the model group.According to the tongue differentiation，rabbits with the same syndrome were randomly divided into the treatment group and the experimental control group.1h after the model was made，rabbits in the treatment group were given herbs gavage treatment，the normal control group and experimental control group gavaged by distilled water.The following items were monitored-the change of mean arterial pressure，heart rate，serum lactic acid（Lac），tumor necrosis factor（TNF-α），ET-1 level at 0 h，3 h，6 h.The opening number of mesenteric artery vein diameter，velocity，flow pattern，junction of capillary network of New Zealand white rabbits with septic shock were observed at 3 h，6 h with BI-2000 image analysis system，and the changes in each index were observed after rabbits were treated with traditional Chinese medicine dialectical therapy.Results：The use of traditional Chinese medicine dialectical treatment based on rabbit tongue can significantly improve the mean arterial pressure，heart rate，serum lactate，serum TNF-α，serum ET-1 levels and the mesenteric microcirculation of arteriovenous diameter，velocity，flow pattern，junction of capillary network opening number in treatment group with septic shock in New Zealand white rabbits，which were significantly different among these groups（P＜0.05）.Conclusion：Treatment based on tongue fur dialectical therapy can improve the microcirculation of patients with septic shock.

Septic shock；Microcirculation；Tongue nature；Discriminate；TNF-α；ET-1

R285.5

A

1004-745X（2015）09-1522-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.09.006

2015-04-15）

山东省中医药科技发展计划项目（2011-095；2013-080）；山东省科技发展计划项目（2012YD19011）；山东省医药科技发展计划项目（2013WS0250）

（电子邮箱：konglizy2@163.com）