AFP mRNA检验对胃癌患者术后肿瘤复发转移及预后的预测价值

任 峰

（肥城矿业中心医院，山东 肥城 271608）

AFP mRNA检验对胃癌患者术后肿瘤复发转移及预后的预测价值

任 峰

（肥城矿业中心医院，山东 肥城 271608）

目的 探讨胃癌患者术前外周血甲胎蛋白信使核糖核酸（AFP mRNA）检验对术后复发转移及预后的预测价值。方法 选取2009年1月至2012年6月我院收治的胃癌手术患者100例，所有患者术前1 d取外周静脉血采用反转录·聚合酶链反应（RT-PCR）检测AFP mRNA，按照检测结果分为AFP mRNA阴性组（n=58）和AFP mRNA阳性组（n=42）。 术后随访3年，观察并对比两组的术后1、2、3年复发转移率。采用Kaplan-Meier法计算两的总体生存率（OS）和无病生存率（DFS），两组间比较Log-rank法。采用COX回归模型分析AFP mRNA阳性是否为胃癌手术患者预后的独立影响因素。结果 AFP mRNA阳性组术后1、2、3年肿瘤复发率分别为57.1%（24/42）、76.2%（32/42）、100.0%（42/42）；AFP mRNA阴性组分别为20.7%（12/58）、41.4%（24/58）、69.0%（40/58），AFP mRNA阳性组术后3年有14.3%（6/42）发生肺转移，AFP mRNA阴性组术后3年无远处转移，AFP mRNA阳性组术后1、2、3年复发率和转移率均明显高于AFP mRNA阴性组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；AFP mRNA阳性组术后1、2、3年OS分别为（90.1%、31.6%、10.2%）；1、2、3年DFS分别为（72.3%、22.1%、5.4%）；AFP mRNA阴性组分别为（100.0%、72.4%、25.0%）和（88.5%、52.5%、13.5%）；AFP mRNA阴性组术后1、2、3年OS和DFS均明显高于AFP mRNA阳性组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。COX回归分析结果显示：AFP mRNA阳性是胃癌手术患者预后的独立影响因素（OR=3.294，95% CI 1.895～6.423，P=0.001）。结论 术前外周血AFP mRNA阳性的胃癌患者术后更易发生复发转移，预后相对较差。

胃癌；AFP mRNA；复发转移；预后

肿瘤术后复发转移是影响恶性肿瘤患者预后的重要因素，也是肿瘤治疗上的一大难题［1］。如何降低恶性肿瘤术后复发转移率，是当前肿瘤学研究的一个重要课题［2］。大量研究证实，肿瘤患者血液循环中的癌细胞是肿瘤复发转移的主要原因［3］。AFP mRNA是检测外周血中胃癌细胞最常用的分子标志物［4］。本研究采用巢式RT-PCR检测胃癌手术患者术前外周血中AFP mRNA，探讨AFP mRNA阳性与胃癌患者术后肿瘤复发转移及预后的关系，希望能为降低胃癌患者术后复发转移率，改善患者的预后提供一定的帮助。

1　资料与方法

1.1研究对象：选取2009年1月至2012年6月我院收治的胃癌手术患者100例。纳入标准：①术前经B超、CT或MRI诊断为胃癌，经术后病理证实为胃癌；②所有患者均为根治性切除，行常规切除肿瘤，手术切缘距离肿瘤边缘＞1 cm［5］。100例患者中男88例，女12例，年龄48～67岁，平均59.3岁；血清AFP：244～1893 μg/L；肿瘤直径2～12 cm。按照术前AFP mRNA检测结果分为AFP mRNA阴性组（n=58）和AFP mRNA阳性组（n=42），两组的一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

表1　两组的一般资料比较

表2　两组生存情况比较

1.2方法

1.2.1AFP mRNA检测方法：所有患者均于术前1 d抽取晨起肘静脉血5 mL，采用巢式RT-PCR检测外周血中AFP mRNA表达情况。主要步骤如下［6］：①制备有核细胞：采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法；②提取总RNA：采用异硫氰酸胍法；③cDNA合成：取2 μg RNA，采用反转录试剂盒（美国Promega公司生产）合成cDNA，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行；④巢式PCR：循环条件：94 ℃变性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共进行30个循环。首轮PCR扩增为传统PCR扩增，正义引物序列：5-ACACAAAAAGCCCACTCCAG-3；反义引物序列5-CTGAGCAATCATAACCGACAT-3，扩增产物 457 bp；第二轮扩增为定量 PCR 扩增。正义引物序列: 5-GCTAGCAACGCTGAAG ATGA-3； 反义引物序列: 5-TACACAAGAATTGAGAGCGAC-3；扩增产物 81 bp。AFP mRNA阳性是指 cDNA 模板在第二轮扩增时形成典型的扩增曲线；AFP mRNA阴性是指 cDNA 模板经第二轮扩增未形成典型的扩增曲线，拷贝数为零。

1.2.2随访及观察指标：采用门诊及电话回访的方式进行随访，随访截止日期2015年6月，至少随访3年，记录两组患者术后1、2、3年内的复发、转移及生存情况。总生存时间（OS）是指术后第1天至随访截止时间或死亡时间；无病生存时间（DFS）是指术后第1天至肿瘤复发转移的时间。

1.2.3统计方法：采用SPSS14.0版统计学软件进行处理，计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验，计量资料以均数加减标准差，组间比较采用t检验。采用Kaplan-Meier法计算生存率，组间比较Logrank法，采用COX回归模型分析AFP mRNA阳性是否为胃癌手术患者预后的独立影响因素，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2　结 果

2.1两组术后复发转移率比较：AFP mRNA阳性组术后1、2、3年肿瘤复发率分别为57.1%（24/42）、76.2%（32/42）、100.0%（42/42）；AFP mRNA阴性组分别为20.7%（12/58）、41.4%（24/58）、69.0%（40/58），AFP mRNA阳性组术后3年有14.3%（6/42）发生肺转移，AFP mRNA阴性组术后3年无远处转移，AFP mRNA阳性组术后1、2、3年复发率和转移率均明显高于AFP mRNA阴性组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2两组生存情况比较：AFP mRNA阴性组术后1、2、3年OS和DFS均明显高于AFP mRNA阳性组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。COX回归分析结果显示：AFP mRNA阳性是胃癌手术患者预后的独立影响因素（OR=3.294，95%CI 1.895～6.423，P=0.001）。

3　讨 论

胃癌是常见的恶性肿瘤，其发病隐匿，预后差。目前，手术切除仍是根治胃癌的主要方法，但其手术后复发转移率高［7］。因此，寻找能反应血液循环中胃癌细胞的分子标志物，对预测胃癌患者术后复发风险，及时采取适当措施进行预防，具有重要的临床意义，也是目前胃癌研究的重点课题。胃癌术后复发转移的主要机制有以下几种：①播散入血液循环中的胃癌细胞重新定植于肝脏或其他组织器官［8］；②胃癌多中心性发生［9］；③胃癌细胞通过肝内门静脉转移至肿瘤外肝组织，在术前已经侵及切除范围以外的组织［10］。研究发现胃癌复发转移的发生取决于胃癌细胞对转移组织的选择性及机体的反应性［11］。胃癌细胞自原发部位脱落经门静脉系统进入血液循环，首先一部分胃癌细胞被机体免疫细胞攻击或为机械力所破坏，剩余的胃癌细胞被小血管捕获后移出血管，形成复发转移灶［12］。

本研究采用RT-PCR法测定AFP mRNA作为胃癌患者血液循环中的肿瘤细胞标志物，其理论基础为：①甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）是肝癌细胞表达的高特异性蛋白质，70%～80%的胃癌患者在发病期间都有AFP基因高表达的特征，AFP基因在胎儿发育过程开放并表达，但在出生2年后基本处于关闭状态，肝癌发生时AFP的基因重新被激活而大量表达，在临床上被认为是胃癌的经典肿瘤标志物，因而被当作诊断肝癌的金标准［13］，胃与肝脏同属于消化系统，多位学者均经过研究发现AFP对胃癌的诊断价值较大；②AFP mRNA在细胞质内是翻译合成AFP的物质基础，在正常胃细胞内表达微弱，在癌细胞中表达强烈；另外，外周血中有大量的RNA酶，游离于外周血中的AFP mRNA易被降解；因此如果在外周血中检测到AFP mRNA就说明外周血中存在尚具有活性的胃癌细胞［14］；③RT-PCR技术是非常敏感，能在100万～1000万个正常的细胞中发现一个肿瘤细胞，使早期发现胃癌患者血液循环中的肿瘤细胞成为可能［15］。

本研究随访，观察术前外周血中AFP mRNA阳性患者与AFP mRNA阴性患者的复发转移及生存情况，结果显示：术前外周血中AFP mRNA阳性患者术后1、2、3年的复发转移率明显高于AFP mRNA阴性患者，术前外周血中AFP mRNA阴性患者术后1、2、3年的总体生存率和无病生存率均明显高于AFP mRNA阳性患者；AFP mRNA阳性是影响胃癌手术患者的独立影响因素，说明术前外周血中AFP mRNA阳性患者术后容易发生复发转移，从而影响了患者生存期，提示我们在对于术前外周血检测AFP mRNA阳性的患者，术前应积极进行抗肿瘤治疗，监测外周血AFP mRNA的表达，术后继续给予抗肿瘤治疗以降低术后复发转移率，改善患者预后。Adachi等［16］报道外周血AFP mRNA阳性的胃癌患者经过治疗后，其血液AFP mRNA转为阴性。

综上所述，外周血AFP mRNA阳性是胃癌细胞存在于血液循环中的直接证据，也是胃癌患者术后发生复发转移的根源。术前检测外周血AFP mRNA表达，对预测术后复发转移及预后具有重要的临床意义。何如有效的将外周血中的AFP mRNA阳性转为阴性即消除血液循环中胃癌细胞是目前胃癌研究的重要课题。

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The Relationship of the AFP mRNA Positive with the Tumor Recurrence and Metastasis and Prognosis in Patients with Stomach Cancer Postoperatively

REN Feng
（Feicheng Mining Center Hospital， Feicheng 271608， China）

Objective To study the relationship of the AFP mRNA positive with the tumor recurrence and metastasis and prognosis in patients with stomach cancer postoperatively. Method Selected 100 patients with hepatocellular carcinoma who received surgery from January 2009 to June 2012， test the AFP mRNA of the peripheral venous blood by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） 1d before the surgery， divided into AFP mRNA negative groups （n = 59） and AFP mRNA positive group （n = 42）， according to the test results. Postoperative follow-up of 3 years， observed and compared the recurrence and transfer rate of postoperative 1， 2， 3 years of the two groups. Using the Kaplan-Meier method to calculate the overall survival （OS）rate and disease-free survival （DFS） rate， tested by the Log - rank method. Using the COX regression model to analysis the AFP mRNA positive whether the independent influence factors of the prognosis of patient received surgery. Results The tumor recurrence rate of the AFP mRNA positive group 1， 2，3 years after the surgery respectively was 57.1% （24/42）， 76.2% （32/42）， 100.0% （42/42）； AFP mRNA negative group respectively was 20.7% （12/58），41.4% （24/58）， 69.0% （40/58）， 3 patients 14.3% （6/42） happened a pulmonary metastasis years in AFP mRNA positive group in 3 years， there was no distant metastasis in AFP mRNA negative groups in 3 years， the metastasis and recurrence rate of the AFP mRNA positive group 1， 2， 3 years after surgery were significantly higher than that of AFP mRNA negative groups， had statistically significant difference （P＜0.05）； 1， 2， 3 years OS rate of the AFP mRNA positive groups respectively was （90.1%， 31.6%， 10.2%）；1， 2， 3 years DFS rate respectively was （72.3%， 22.1%， 5.4%）； AFP mRNA negative group respectively was（100.0%， 72.4%， 25.0%）， and （88.5%， 52.5%， 13.5%）； the 1， 2， 3 years DFS and OS of the AFP mRNA negative groups were significantly higher than that of AFP mRNA positive， had statistically significant difference （P＜0.05）. The results of the COX regression analysis showed that the AFP mRNA positive was independent influence factors of the prognosis of patient received surgery （OR = 3.294， 95% CI 3.294 to 6.423， P= 0.001）. Conclusion Stomach cancer patients with AFP mRNA positive of peripheral blood preoperative more easyer to recurrence and metastasis， had a relatively poor prognosis.

Stomach cancer； AFP mRNA； Recurrence； Metastasis； The prognosis

R735.2

B

1671-8194（2015）24-0015-03