HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量

张 琴

（湖南省中医药大学附一医院药剂科，湖南 长沙 410000）

HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量

张 琴

（湖南省中医药大学附一医院药剂科，湖南 长沙 410000）

目的 建立高效液相色谱法（HPLC）快速测定复方丹参滴丸中丹参素的含量。方法色谱柱为Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），柱温为室温；流速为0.9 mL/min；检测波长为281 nm。结果丹参素对照品在0.01～0.10 mg/mL范围内呈良好线性关系，r<0.9997， 含量丹参素平均回收率为99.6%，RSD为0.89%。所测复方丹参滴丸中丹参素的平均含量为8.034 mg/g，符合2010年版药典对其含量的要求。结论HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量方法操作流程简单、快速、准确，可用于该制剂的质量控制中大力推广使用。

HPLC法；复方丹参滴丸；丹参素；含量

复方丹参滴丸是由丹参、三七及冰片等药味组成的复方制剂，具有活血化瘀、理气止痛的功效［1］。现质量标准收载在《中国药典》2005年版一部检测的内容中。复方丹参滴丸存在质量控制方法简单，产品质量不易控制的缺点，从而将影响产品的生产和保证质量［2］。本研究建立高效液相色谱法（HPLC）快速测定复方丹参滴丸中丹参素的含量，结果准确性高，现将操作步骤总结如下。

1　材　料

1.1仪器：Shimadzu 2010高效液相色谱系统（日本岛津公司），Agilent HPll00 LC-DAD色谱系统（安捷伦科技公司），Thermo Finnigan Surveyor LC-TSQ Quanturn Ulna AM液相色谱串联质谱系统（美国菲尼根质谱公司）。连续式移液器（美国热电仪器有限公司）。102-3远红外快速干燥箱（北京兴争仪器设备厂）。

1.2试剂：丹参素钠对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：100018-200908）。复方丹参滴丸（天津天士力制药股份有限公司提供，批号为100904、101002、100919）。三重蒸馏水自制。甲醇、乙腈为美国进口色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

2　方　法

2.1色谱条件：STI2000高效液相色谱仪，Vertex C18色谱柱为Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），UV501紫外检测器。流流动相为甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），柱温为室温；流速为0.9 mL/min，20 μL定量管进样，检测波长为281 nm。理论塔板数按照丹参素色谱峰计＞5000。

2.2溶液的制备

2.1丹参素钠对照品溶液的配制：精密称取10.0 mg丹参素对照品于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，过滤。取续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为对照品溶液备用。

2.2样品溶液的制备：精密称取复方丹参滴丸12粒，研成细粉后精确称量，置25 mL量瓶中。加入甲醇约20 mL，超声处理30 min使溶解，放冷至室温，加甲醇至刻度摇匀即得样品溶液，离心5 min，进样前用

0.45μm滤膜滤过，即得复方丹参滴丸的供溶液试品溶液。

3　方法考察

3.1可行性考察：按处方比例及工艺自制不含丹参的空白样品。吸取复方丹参滴丸及其空白样品适量。按样品测定项下方法分别进行测定，结果见图1（A、B），由图1（B）看出其他药材和辅料不干扰丹参素测定。同时吸取丹参素对照品溶液适量进行测定，结果见图1（C）。

3.2线性关系考察：精密吸取丹参素钠照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL于5个10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀后即得对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，分别精密吸取20 μL进样，按上述色谱条件分别测定其峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，以溶液中丹参素的浓度为横坐标，按上述条件测定峰面积。结果丹参素对照品在0.01～0.10 mg/mL范围内呈良好线性关系，回归方程为Y<0.711C-1.861，r<0.9997（n<5）。见表1。

表1　丹参素的对照品标准曲线

表2　复方丹参滴丸成分含量测定

图1　复方丹参滴丸 HPLC 图谱（A供试品；B空白样品；C丹参素）

3.3精密度试验：精密取用对照品溶液4.0 mL于10.00 mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0 mL，用1%醋酸溶液稀释到刻度。重复进样5次，每次20 μL，分别测定峰面积，RSD丹参素为0.59%。试验结果表明精密度良好。

3.4重现性试验：精密称取丹参滴丸样品5份，按本文方法处理和测定，每份进样3次，每次进样20 μL，以外标法分别测定峰面积。5份复方丹参滴丸中丹参素的平均含量为7.9776 mg/g，RSD为1.24%。

3.5稳定性试验：取样品溶液，分别于1、2、6、10、24、72 h进样，每次20 μL，分别测定峰面积。结果丹参素与内标物的峰面积比的RSD为0.71%。

3.6回收率实验：精密量取复方丹参滴丸供试品溶液4.0 mL，置于5个含0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL对照品溶液的10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，20 μL注入高效液相色谱仪，按样品测定项下操作，计算回收率。测得结果含量丹参素平均回收率为99.6%，RSD为0.89%。试验结果表明，加样回收率良好。

3.7样品含量测定：取三个不同批号的复方丹参滴丸样品，每批3份，按样品溶液制备方法制备供试品溶液，进样前用0.45 μm滤膜滤过，弃去初滤液，分别进样，进样量为20 μL，分别测定峰面积。结果见表2。

4　讨　论

复方丹参滴丸处方为丹参、三七、冰片。临床上广泛用于冠心病、心绞痛的预防、治疗、急救。具有剂量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速等特点。其中丹参为君药，其有效有丹参酮ⅡA、丹酚酸B、丹酚酸B镁盐、丹参素、丹参总酮、隐丹参酮、原儿茶醛等，丹参素可抑制血小板合成、提高心肌耐缺氧能力，保护心肌，增加冠脉流量［3-4］。是复方丹参滴丸治疗冠心病、心肌缺血的主要机制。复方丹参滴丸现在已经成为国内心血管市场上的最主要药物和品牌。中药复方丹参滴丸由多味中药、多种成分组成，很难作到每味药都进行含量测定［5-6］。临床测定复方丹参滴丸中丹参素含量方法较多。本研究所采用HPLC法快速测定复方丹参滴丸中丹参素的含量。高效液相色谱用甲醇-水-冰醋酸为（20∶80∶0.5）流动相，出峰时间以及峰型较佳，保留时间适宜［7］。在测定复方丹参滴丸中丹参素的含量时，其他药物成分均无干扰［8-9］。高效液相色谱法中流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压［10］。其特点为分离效能高。特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。而且分析速度快、载液流速快。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点［11］。本研究建立HPLC快速测定复方丹参滴丸中丹参素的含量。结果显示丹参素对照品在0.01～0.10 mg/mL范围内呈良好线性关系，r<0.997，含量丹参素平均回收率为100.15%，RSD为4.19%。所测复方丹参滴丸中丹参素的平均含量为8.034 mg/g，符合2010 版药典对其含量的要求。提示HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量方法操作流程简单、快速、准确，可用于该制剂的质量控制中大力推广使用。

由于丹参素钠稳定性欠佳，因此对照品溶液需避光，低温保存，最好临用现配，以保证准确性。

［1］国家药典委员会.中国药典（2010年版一部）［M］.北京:化学工业出版社，2011.

［2］游勇基，陈铭辉.高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B等3种有效成分［J］.中国药学杂志，2011，38（12）:950-952.

［3］杨广德，贺浪冲，李永茂.丹参有效部位指纹图谱定性和有效成分定量分析方法研究［J］.药物分析杂志，2011，23（6）:409-413.

［4］Chu Y，Zhang L，Wang XY，et al.The effect of Compound Danshen Dripping Pills，a Chinese herb medicine，on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin in rats［J］.J Ethnopharmacol，2011，137（3）:1457-1461.

［5］Ng CS，Wang SP.Systematic review and meta -analysis of randomized controlled trials comparing Chinese patent medicines Compound Danshen Dripping Pills and Di'ao Xinxuekang in treating angina pectoris［J］.Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao，2012，10（1）:25-34.

［6］袁琦，赵辉.HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量［J］.河南大学学报:医学版，2008，27（2）:31-32.

［7］靳荣.复方丹参滴丸临床新用近况［J］.实用中医药杂志，2012，28（7）: 610-611.

［8］丁兰，易爱纯，石峥嵘.高效液相色谱法同时测定复方丹参滴丸中丹参素和原儿茶醛［J］.中国实用医药，2008，3（18）:70-71.

［9］吕东，刘亚蓉.复方丹参胶囊质量控制标准研究［J］.西北药学杂志，2010，15（6）:254.

［10］洪馨，王宁生.高效液相色谱法测定复方丹参滴丸中丹参素和丹参酮ⅡA的含量［J］.中药新药与临床药理，2011，13（4）:247-249.

［11］张翠莲，张伟琪，杨秀斌，等.复方丹参注射液的质量考察［J］.中国药学杂志，2011，38（1）:56-58.

Determination of Danshensu in Compound Danshen dripping pill by HPLC

ZHANG Qin
（Department of Pharmacy， the First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410000， China）

Objective To establish a HPLC method for content determination （HPLC） of Danshensu in Compound Danshen dropping pill. Methods The chromatographic column was Hypersil C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）； the mobile phase of methanol-water-acetic acid （20∶80∶0.5）， the column temperature was room temperature； the flow rate was 0.9 mL/min； the detection wavelength was 281 nm. Results Danshensu control sample showed good linear relationship in the range of 0.01-0.10 mg/mL r<0.997， Danshensu content， the average recovery was 99.6%， RSD 0.89%. The average content of pigment compound danshendropping pill for 8.034mg/g， consistent with the 2010 edition of Pharmacopoeia requirements for its content. Conclusion The HPLC method for the determination of content of Danshensu in Compound Danshen Dropping Pill operation is simple， fast， accurate， and can be used for the quality control of the preparation in vigorously promoting the use of.

HPLC； Compound Danshen dripping pills； Danshensu； Content

R282.710.3

B

1671-8194（2015）19-0062-02