大叶井口边草中的化学成分研究*

朱艳玲，杨雁，宋流东，赵勤实

（1.中国科学院昆明植物研究所，云南昆明650201；2.昆明医科大学海源学院，云南昆明650106；

3.昆明医科大学，云南昆明650500）

大叶井口边草中的化学成分研究*

朱艳玲1，2，杨雁2，宋流东3，赵勤实1

（1.中国科学院昆明植物研究所，云南昆明650201；2.昆明医科大学海源学院，云南昆明650106；

3.昆明医科大学，云南昆明650500）

目的从大叶井口边草中提取出一些具有抗艾滋病毒活性的化学成分。方法采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相柱层析及高效液相法分离大叶井口边草中的乙酸乙酯萃取物。结果提取分离得倍半萜8个、二萜7个、黄酮4个、三萜3个和生物碱1个，化合物共23个。结论该试验中提取的化合物10是首次从大叶井口边草分离得到的。后期将从该试验中分离提取的二萜和倍半萜做了抗艾滋病毒活性检测，结果显示无抗艾滋病毒活性。

大叶井口边草；成分；黄酮；二萜；三萜

大叶井口边草Pteriscretica L.又名鸡爪凤尾草、大叶凤尾蕨、八字龙等，分布在云南、台湾、四川，具有除湿止痢、止血、清热解毒的功效，用于治疗黄疸性肝炎、尿路感染、肠炎、痢疾、急性胆囊炎等疾病。早在20世纪70年代就有其化学成分研究的报道，主要为茚满酮及对映-贝克杉烷二萜类化合物［1］。为提取具有抗艾滋病毒活性的化学成分，对大叶井口边草的化学成分进行了提取、分离研究，现报道如下。

1　仪器与材料

JASCODIP-370型数字式旋光仪；国产XRC-1型显微熔点仪；Bio-Rad FTS-135型红外光谱仪；UV210A型紫外光谱仪；GAUTO Spec-3000型质谱仪，APIQ star Pulsar型质谱仪；DRX-500型核磁共振仪；HP1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；80～100目硅胶拌样，200～300目硅胶层析（德国默克公司）；40～60μm RP-18材料装反相柱（德国默克公司）；D101型聚苯乙烯大孔树脂和Sephadex LH-20型凝胶（天津化工厂）；10%H2SO4的乙醇溶液显色。大叶井口边草全草样品由（中国科学院昆明植物研究所）成晓教授鉴定，采自云南昆明植物园，采摘日期为2006年5月，采用干制法制标本，标本存放于中国科学院昆明植物研究所西部植物资源持续利用国家重点实验室标本馆，编号为CX20060516。

2　方法与结果

2.1分离与提取方法

采集大叶井口边草全草，晒干后得23 kg，绞碎，80 L丙酮泡24 h，反复浸泡3次，合并丙酮液，然后过滤，蒸干。水溶解浸膏，用乙酸乙脂萃取3次，合并所有乙酸乙酯部分，蒸干乙酸乙酯得浸膏350 g。用80～100目700 g硅胶加入350 g乙酸乙酯浸膏，拌样，然后用200～300目2 000 g硅胶层析，梯度洗脱溶剂用石油醚-丙酮（1∶0-0∶1），薄层色谱（TLC）检测，相同部分合并，分为7个部分（部位Ⅰ-Ⅵ）。

极性较小部分馏分段Ⅱ（58 g），硅胶100 g拌样，硅胶1 000 g层析，洗脱剂为石油醚-丙酮（9∶1），得化合物23（19 g）。相同点部分合并得11 g，经Sephadex LH-20（甲醇）层析，相同馏分合并，得B1～B3三部分。B1部分经丙酮柱Sephadex LH-20层析、石油醚-丙酮（7∶3）硅胶柱层析，半制备得7 mg化合物3和9mg化合物4；B3部分用石油醚-丙酮（7∶3）柱层析，冰水下静置2 d，得到1 g白色结晶化合物20。

经大MCI脱色后得48 g部分Ⅲ，用甲醇柱Sephadex LH-20层析，合并相同馏分，得A，B，C三部分。A部分分别经丙酮柱Sephadex LH-20层析，石油醚-丙酮（7∶3）硅胶柱层析得3 g化合物12；B部分拌样以石油醚-丙酮（8∶2）硅胶柱层析，放置3 d，得28mg化合物8（白色结晶）；C部分3 g，用石油醚-丙酮（8∶2）硅胶柱层析洗脱，得51mg化合物10（白色粉末）。

第Ⅳ部分有68 g，经MCI脱色得47 g，反复用石油醚-丙酮、氯仿-丙酮等洗脱剂洗脱，用硅胶层析，划分为A，B，C三部分。A部分5 g经丙酮Sephadex LH-20层析，最后纯化得78mg化合物9和2mg化合物16；B部分8 g用石油醚-丙酮（8∶2～6∶4）梯度洗脱，得21mg化合物11（白色粉末）；C部分2.8 g经氯仿-甲醇（1∶1）柱Sephadex LH-20层析，经半制备得8mg化合物14和12mg化合物15。

极性较大部分V有28 g，用反相MCI95%乙醇脱色3次得18 g，200 g硅胶装柱，石油醚-丙酮（7∶3）洗脱，得3 g化合物22。剩余部分经反相MCI层析，硅胶柱层析反复纯化后得1.2 g化合物1，30mg化合物2，10mg化合物5，70mg化合物13，8mg化合物21。

极性较大部分为Ⅵ有23 g，用MCI脱色3次得14 g，用Sephadex LH-20柱层析划断（甲醇），分为A，B，C，D四部分。1.8g A部分拌样，装柱，用氯仿-甲醇（13∶1）洗脱，得13mg化合物19和16mg化合物5；B部分700mg，用反相柱MCI以30%甲醇分离，得14mg结晶7；C部分3.6 g，SephadexLH-20层析（丙酮）并半制备后得9 mg化合物17和7mg化合物18；D部分480mg，硅胶柱层析得28mg化合物7。

2.2结果鉴定

试验得到倍半萜8个、二萜7个、黄酮4个、三萜3个和生物碱1个，化合物共23个。波谱分析后，鉴定结构为：4′，5，7-三羟基黄酮（1）［2］；4′，5，7-三羟基-3′-甲氧基黄酮（2）［3］；（S）-蕨素B（3）［4］；（R）-蕨素B（4）［4］；α-乙酰氨基-苯丙基-α-苄胺-丙酸丙酯（5）［5］；（2R，3S）-蕨素C（6）［6］；4′，5，7-三羟基-3′-甲氧基黄酮（7）［7］；2，6，15-三元醇16-双键-贝壳杉烯（8）［8］；（24R）-Cycloart-25-ene-3β，24-diol（9）［9］；2，6-二醇-15-贝壳杉烷（10）［10］；2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-2，16-贝壳杉烷二醇（11）［10］；3′，4′，5，7-四羟基黄酮-7-O-L-鼠李吡喃苷（12）［11］；（ent-2，6，16）-贝壳杉烷三醇（13）［12］；（2R，3S）-蕨素C（14）［13］；（2R，3R）-蕨素C（15）［13］；（2S，3S）-蕨素C（16）［］；R-蕨素R（17）［13］；S-蕨素R（18）［13］；2，6，16-贝壳杉烷三醇（19）［14］；2，15-二醇16-双键-贝壳杉烯（20）［14］；Creticoside（21）；β-谷甾醇（22）；齐墩果酸（23）。化学结构见图1。

图1　各化合物结构图

3　讨论

本试验中对大叶井口边草的成分进行了提取和分离，得倍半萜8个、二萜7个、黄酮4个、三萜3个和生物碱1个，化合物共23个，其中化合物10为首次在该植物中分离得到。本试验的目的是为了从蕨类植物中研究开发出一些有效的抗病毒成分，后期同实验室的研究人员对大叶井口边草中提取的倍半萜和二萜进行了抗艾滋病毒活性检测，但均无相关活性。究其原因，初步推断大叶井口边草中的主要抗菌活性应是其中的生物碱，但生物碱特别容易变化。在试验中很多时候看到生物碱快分离纯了，可一经提取放置，马上就出现多点，无法提纯。今后再做蕨类植物大叶井口边草提取分离工作时，一定注意改进试验条件，尽量稳定其生物碱并加以提纯，才会有更多的突破和发现。

［1］牧丹，苏日那，格根塔娜，等.栀子的化学成分与药理作用研究［J］.中国疗养医学，2015，24（1）：34-36.

［2］王伟，郭庆梅，周凤琴.白茅根的药效考证与现代研究比较［J］.中国海洋药物，2014，33（5）：92-96.

［3］马慧婷，赵铭钦，王唯唯，等.浓香型主产烟区烟叶化学成分特征分析［J］.江西农业大学学报，2014，36（4）：723-729.

［4］刘彦彦.蟾酥药理作用研究进展［J］.河南农业，2014（18）：59-60.

［5］余弯弯，双鹏程，张凌.鸡血藤化学成分及药理作用研究概况［J］.江西中医学院学报，2014，26（4）：89-92.

［6］李志红.中药三七的化学成分和药理作用［J］.内蒙古中医药，2014，33（26）：37.

［7］雷霄飞，杨学.神农香菊化学成分及药理作用研究进展［J］.现代农业科技，2014（19）：312-313.

［8］段鹤君，付朝晖，陈兰桂.黑种草籽挥发油化学成分分析［J］.中国药业，2010，19（12）：21-22.

［9］Gong F，Liang YZ，Cui H，et al.Determination of volatile components in peptie power by gas-m8s chromatography spectrometry and chemometric D lufion［J］.Jchromatography A，2001，909：237-247.

［10］Gong F，Liang YZ，Chou FT.Combination of GC-MSwith local resolution for determining volatile components in si-wu dococafion［J］.JSep Sci，2003，26：112-122.

［11］Bahman N，FarazM.Chemical composition of the fixed and volatile oils of Nigeila Safiva L from Iran［J］.JBiosc，2003，58（9/10）：629.

［12］Estefanla I，Franeisca S，AngelsNG，etal.Influence of the holding temperature of the firstheating step in a two heating step carbonization processon the properties of charsand activated carbons from almond shells［J］.Journalof Analyticaland Applied Pyrolysis，2001，58-59：967-981.

［13］Marcilla A，Conesa JA，Asensio M，et al.Thermal treatment and foaming of chart obtained from almond shells：kinetic study［J］.Fuel，2000，79（7）：829-836.

［14］田圣梅，李宁.蕨的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2011，46（16）：1 238-1 241.

Study on Chem ical Com ponents of Pteris Cretica

Zhu Yanling1，2，Yang Yan2，Song Liudong3，Zhao Qinshi1
（1.Kunming Research Institute of Plant，Chinese Academy of Sciences，Kunming，Yunnan，China 650201；2.Haiyuan College of Kunming Medical Uni
versity，Kunming，Yunnan，China 650106；3.Kunming Medical University，Kunming，Yunnan，China 650500）

Objective To extract some anti-HIV virus chemical components from Pteris cretica.M ethods The silica gel column chromatography，gel column chromatography，reversed-phase column chromatography and high performance liquid chromatography were adopted to separate the ethyl acetate extractants of Pteris cretic.Results 23 chemical compounds including 8 sesquiterpenes，7 diterpenes，4 flavonoids，3 triterpenes and 1 alkaloid were obtained by the extraction and separation.Conclusion The extracted chemical compounds 10 separated from Pteris cretica are for the first time.Then the diterpenes and sesquiterpenes separated and extracted by the experiment are performed the anti-HIV activity test.But the results show no anti-HIV activity.

Pteris cretica；component；flavone；diterpene；riterpene

R284.1；R282.71

A

1006-4931（2015）16-0033-03

朱艳玲（1982-），女，云南宣威人，硕士研究生，助教，研究方向为天然药物化学，（电子信箱）lingzi829@yeah.net；宋流东（1966-），男，湖南新田人，硕士研究生，教授，研究方向为天然药物化学，本文通讯作者，（电子信箱）sldong66@163.com。

2015-02-05；

2015-04-22）

*云南省政府联合基金项目，项目编号：U0932602。