吡格列酮对DSS诱导的炎症性肠病小鼠血清TNFα与hsCRP水平的影响

刘亭亭 陈还珍 马文艳 忽海洋

摘要： 目的观察吡格列酮对炎症性肠病小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNFα）与高敏C反应蛋白（hsCRP）水平的影响，探讨吡格列酮可能成为治疗炎症性肠病的药物及降低远期动脉粥样硬化的发病风险。方法清洁BALB/c小鼠随机分为3组，分别为正常组、模型组、吡格列酮药物干预组。采用3%DSS溶液制备炎症性肠病小鼠模型，在造模第2天开始给予吡格列酮25 mg/kg灌胃，每天一次，直至实验结束。治疗结束后，采用酶联免疫法（ELISA法）检测血清hsCRP、TNFα。结果与正常组相比较，模型组小鼠肠组织出现炎症性表现，且血清hsCRP、TNFα的水平均显著增高（P<0.01）;与模型组相比较，吡格列酮干预组小鼠肠道炎症表现明显减轻，且血清hsCRP、TNFα的水平均显著降低（P<0.01）。结论吡格列酮能下调炎症性肠病小鼠TNFα的表达，减轻肠道炎症性改变，并改善肠道组织形态结构，而发挥治疗，明显降低血清hsCRP的水平，降低远期动脉粥样硬化的风险。

关键词： 炎症性肠病;高敏C反应蛋白;肿瘤坏死因子α;吡格列酮

中图分类号：R574R285.5文献标识码：A

doi：10.3969/j.issn.16721349.2015.01.022

文章编号：16721349（2015）01006103

炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一种病因尚不明确的慢性肠道炎症性疾病，它包括了克罗恩病（Crohns disease，CD）和溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC），该病多为慢性起病，反复发作，在欧美等发达国家发病率较高，近年在我国的发病率也逐渐升高[1，2]。IBD的病因和发病机制尚不明确，目前认为可能是肠道细菌及其代谢产物作用于宿主，使之产生免疫反应，并且免疫反应在IBD的炎症反应中起着重要的作用[3]。近年来随着人们对该病的重视，免疫调节和炎症反应成为治疗IBD的重要途径[4]。目前已证实在IBD的发病过程中，Toll样受体（Toll like receptors，TLRPs）/核转录因子κB（Nuclear factor kappB，NFκB）信号通路的过度激活起着重要的作用[57]。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome proliferatoractiated recetor gamma，PPARγ）在正常的肠上皮中表达较高，且在维持上皮正常功能和局部炎症的调控中起着重要的作用[8]。PPARγ是TLRs的负性调节因子，它与配体结合后抑制了TLRs信号通路的炎症反应[9]。吡格列酮（Pioglitazone，PG）是噻唑烷二酮类化合物，该类化合物是人工合成的PPARγ配体，目前发现该类药物不仅具有降血糖的作用，而且也具有控制炎症性疾病的作用[10]。因此本研究建立BALB/c小鼠模型，观察吡格列酮对小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNFα）与高敏C反应蛋白（hs

CRP）水平的影响，为吡格列酮治疗炎症性肠病提供科学实验资料。

1材料与方法

1.1实验动物健康雄性清洁级BALB/c小鼠45只，体重（20±2）g，由山西医科大学实验动物中心提供，动物生产合格证号为SCXK（晋）2009/0001，动物使用合格证号为SCXK（晋）2009/0004。飼养条件：清洁级，室内温度（20～24）℃，相对湿度55%～70%，自由饮水和摄取食物。适应性饲养3 d，观察小鼠饮食、活动正常后开始实验。

1.2主要试剂葡聚糖硫酸钠DSS分子量40 000（SIGMAALORICH），吡格列酮（日本武田药品工业株式会社），TNFα（南京建成生物工程研究所），hsCRP检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3模型制备BALB/c小鼠自由饮用3%DSS溶液7 d，然后停止饮用3%DSS溶液改用蒸馏水7 d，重复5次，建立小鼠慢性炎症性肠病模型，模型建立成功标志为半稀便、腹泻、大便隐血阳性和肉眼血便中的任何一个症状，造模结束后取其结肠做HE染色，确定模型制备是否成功。

1.4分组与干预BALB/c小鼠随机分成正常组、模型组、吡格列酮干预组，每组15只。吡格列酮组：在造模第2天开始给予吡格列酮25 mg/kg灌胃，每天一次，直至实验结束。正常组和模型组不进行任何治疗。

1.5指标检测结肠组织病理学观察HE染色，光学显微镜下观察各组小鼠结肠组织病理学变化。 血清TNFα、hsCRP的检测。

1.6统计学处理计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析法进行分析，多组间比较采用单因素方差分析（oneway ANOVA）数据处理，统计分析使用SPSS 13.0 统计软件包。

2结果

2.1各组大鼠结肠组织病理学变化在光镜下观察，正常组小鼠的结肠组织结构完整，肠黏膜无充血、水肿，无炎细胞浸润;模型组肠道炎症明显，肠黏膜充血、水肿伴大量炎细胞浸润;吡格列酮药物干预组肠道炎症较模型组明显改善，肠黏膜无明显充血、水肿，有炎细胞浸润。

2.2血清TNFα和hsCRP在各组的水平（见表1）3组间血清TNFα和hsCRP差异有统计学意义（P<0.05），模型组与正常组比较血清TNFα和hsCRP有统计学意义（P<0.001），说明炎症性肠病中血清TNFα和hsCRP的浓度升高;吡格列酮组与模型组和正常组比较，TNFα和hsCRP的差异有统计学意义，说明吡格列酮对炎症性肠病有抗炎的作用。

3讨论

炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病，目前对炎症性肠病的发病机制仍不明确，可能与环境、遗传易感性、自生免疫反应、病原体感染有关。大量研究表明，NFκB信号通路的过度激活在炎症性肠病的发生发展中起着重要的作用。

3.1小鼠炎症性肠病与血清TNFαTNFα因子是重要的促炎症因子，在IBD形成的过程中起着重要的作用，它是以旁分泌和自分泌的方式在肠黏膜局部发挥作用的，它可以促进IL1、IL8等炎症因子的释放，增强了局部炎症反应，扩大炎症连锁反应造成对肠黏膜的损伤。Marrero 等[11]研究发现， DSS 诱发的结肠炎发生和严重程度与NFκB 活化有关，NFκB激活后，可以启动IFNγ、IL6、IL8、TNFα基因的早期转录[12]，促进血清中TNFα水平增加。本实验结果显示，炎症性肠病模型组的血清TNFα水平明显高于对照组，且具有统计学意义（P<0.001），说明TNFα在炎症性肠病的发生、发展中起着重要的作用。

3.2小鼠炎症性肠病与hsCRPhsCRP是一种重要的急性期蛋白，它在正常人血清中含量甚少，但在炎性疾病的情况下，会迅速升高，在病变缓解后，恢复正常范围。hsCRP是预测心脑血管疾病的标志物，是致动脉粥样硬化的一个危险因子，是预测冠状动脉粥样硬化性心脏病的独立危险因子。而在炎症性肠病患者中，血清hsCRP水平较对照组明显升高（P<0.001），增加了动脉粥样硬化的风险，这为预防动脉粥样硬化提供了科学依据。

3.3小鼠炎症性肠病与吡格列酮PPARγ分为天然配体和人工合成配体，噻唑烷二酮类药物属于人工合成配体，它包括吡格列酮、曲格列酮、罗格列酮等，PPARγ的功能复杂多样，它除了具有降血糖的作用，还具有抗动脉粥样硬化、降血压、降血脂等作用。PPARγ经配体激活后，具有抑制炎症反应的作用，对机体的炎症反应进行负性调节[13，14]。本实验结果分析，吡格列酮组HE染色病理图片炎症反应明显轻于模型组，且相关血清炎症因子也明显减少（P<0.001）。这为治疗炎症性腸病提供了新的科学理论依据，也是治疗炎症性肠病的潜在靶点。

在炎症性肠病中血清hsCRP、TNFα水平明显升高，而给予吡格列酮干预后，血清hsCRP、TNFα水平明显降低，肠道HE染色病理图片提示吡格列酮组炎症明显减轻，提示PPARγ配体吡格列酮可能成为炎症性肠病治疗的潜在靶点。血清hsCRP水平在炎症性肠病中明显升高，提示动脉粥样硬化的发生率明显升高，PPARγ配体吡格列酮可降低血清hsCRP水平，从而降低了动脉粥样硬化发生的风险。

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（收稿日期：20140409）

（本文编辑王雅洁）