应用高效液相色谱法测定缬沙坦氨氯地平片有关物质

罗爱辉

摘要：目的：采用高效液相色谱（HPLC）法测定缬沙坦氨氯地平片的有关物质。方法：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：三乙胺溶液（应用磷酸将PH值调至2.8）-甲醇（A）-乙腈（B），流速1.0ml/min，梯度洗脱，柱温37℃，检测波长为239nm，进样量15μl。结果：其降解产物与主峰在该色谱条件下能够有效分离。结论：应用高效液相色谱法可准确、简便的测定缬沙坦氨氯地平片有关物质。

关键词： 高效液相色谱；缬沙坦氨氯地平片；有关物质

缬沙坦氨氯地平片为复方制剂，结合我国生产的工艺，为控制药品检测质量，参考美国药典对缬沙坦、氨氯地平有关物质的测定方法，对缬沙坦氨氯地平片的有关物质进行测定分析[1]。3个已知杂质为：缬沙坦的已知杂质（S） -N-（1-戊酰基）-N-[4-[2-（1H-四氮唑-5-基） 苯基]苄基]-L-缬氨酸苄酯（杂质C）和（S） -N-（ 1-丁酰基）-N-[4-[2-（ 1H-四氮唑-5-基） 苯基]苄基]-L-缬氨酸（ 杂质B）。氨氯地平的已知杂质3-乙基-5-甲基-2-[（ 2-氨基乙氧基） 甲基]-4-（ 2-氯苯基） -6-甲基吡啶-3，5-二羧酸酯（ 杂质D）[2]。本实验采用高效液相色谱法测定缬沙坦氨氯地平片中的有关物质，取得了不错的效果，该方法可靠、准确、简便，可用于缬沙坦氨氯地平片有关物质的测定。

1 资料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（生产厂家：美国安捷伦；型号：DE54627713）；电子分析天平（生产厂家：上海精科仪器厂；型号：BP61）；缬沙坦杂质C（生产厂家：USP；批号：H1J021）；缬沙坦杂质B（生产厂家：USP；批号：HOK089）；氨氯地平杂质D（生产厂家：USP；批号：FOI143）；苯磺酸氨氯地平（生产厂家：中国药品生物制品检定所；批号：100374-200903）；缬沙坦（生产厂家：中国药品生物制品检定所；批号：100651-200902）；水为双蒸水；乙腈、甲醇为色谱纯；其余试剂为分析纯。

1.2方法

1.2.1 色谱条件

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A：三乙胺10ml加H2O稀释至1000ml，用磷酸调节PH值至2.8；流动相B：甲醇；流动相C：乙腈，梯度洗脱，检测波长为239nm；柱温37℃[3]。见表1

1.2.2 专属性试验

（1）光照试验：取样品适量，阳光下照射10小时，流动相溶解，摇匀，稀释定容，抽滤后测定（2）高温试验：取样品适量，加入适量流动相，100℃水浴4小时后冷却，流动相稀释定容，摇匀，抽滤后得高温破坏样品溶液（3）氧化试验：取样品适量，加10%双氧水10ml，60℃加热30min后冷却，流动相稀释定容，摇匀，抽滤后得氧化破坏样品溶液（4）碱破坏试验：取样品适量，精密称量，加入5ml氢氧化钠溶液（1mol/L），60℃加热25min，加入5ml盐酸溶液（1mol/L）中和，加流动相稀释定容，摇匀，抽滤后得碱破坏样品溶液（5）酸破坏样品：取样品适量，精密称量，加入5ml盐酸溶液（1mol/L），60℃加热20min，加入5ml氢氧化钠溶液（1mol/L）中和，加流动相稀释定容，摇匀，抽滤后得碱破坏样品溶液[4]。另取缬沙坦原料样品适量，氨氯地平原料样品适量，空白辅料样品适量进行实验，方法同上。

1.2.3 定量限、检测限的测定

取缬沙坦对照品、氨氯地平对照品、缬沙坦杂质C对照品、缬沙坦杂质B对照品、氨氯地平杂质D对照品适量，精密称量，加入流动相溶解，稀释定容，精密吸取10μl，分别注入液相色谱仪[5]。

1.2.4 线性关系的考察及校正因子的计算

取缬沙坦杂质C对照品、缬沙坦杂质B对照品、氨氯地平杂质D对照品适量，流动相配液，相应物质的测定条件下测定，线性回归，横坐标：浓度，纵坐标：峰面积A，记录峰面积，绘制标准曲线，计算线性范围及校正因子[6]。

1.2.5 溶液精密度、稳定性试验

取自身对照溶液、供试品溶液、缬沙坦杂质C对照品溶液、缬沙坦杂质B对照品溶液及氨氯地平杂质D对照品溶液，对有关物质溶液精密度、稳定性进行测定[7]。

1.2.6 样品测定 取三批供试样品：精密称量80mg、5mg，流动相稀释溶解定容至50ml，摇匀，抽滤后作为供试品溶液；吸取1ml供试品溶液，流动相稀释溶解定容至100ml，摇匀，抽滤后作为自身对照溶液；杂质对照品溶液，对三批溶液进行高效液相色谱仪分析，记录色谱图，计算总杂质、最大单个杂质及单个杂质[8]。

2 结果

2.1 专属性试验

结果显示，各破坏试验下，两个主要成分的原料、制剂的降解物峰均可良好的分离于缬沙坦、氨氯地平的主峰，且未知杂质与已知杂质的分离度也符合要求。

2.2 定量限、检测限的测定

分别记录各仪器色谱图，使用定量限：S/N约为10时的进样量，使用检测限：S/N约为3时的进样量。见表2

2.3 溶液精密度、稳定性试验

结果显示，溶液在8小时内稳定，RSD=1.37%（n=6）；自身对照溶液、供试品溶液、缬沙坦杂质C对照品溶液、缬沙坦杂质C对照品溶液及氨氯地平杂质D对照品溶液进样精密度良好，RSD分别为0.68%，1.46%，0.89%，0.78%，0.58%（n=6）。

2.4 样品测定

对三批样品的测定，结果如表3所示。

3 讨论

缬沙坦氨氯地平片，生产厂家为瑞士诺华公司，其商品名为倍博特，规格为缬沙80mg、氨氯地平5mg，在美国于2007年批准上市，在中国于2009年批准进口并上市，主要用于抗高血压病症[9]。缬沙坦为血管紧张素ⅡAT1受体拮抗剂、氨氯地平为钙离子拮抗剂，二者合用作为抗高血压药物，具有较好的治疗效果。缬沙坦氨氯地平片合用疗效比单独使用疗效显著，且耐药性、安全性也同样优于单独使用，拟开发的产品规格、剂型与市售品相同，具有很好的市场前景。所以，建立对于缬沙坦氨氯地平片有关物质的检测方法来对缬沙坦氨氯地平片质量进行控制是十分重要[10]。

本文采用高效液相色谱法检测缬沙坦氨氯地平片有关物质，可准确的检测出缬沙坦氨氯地平片有关物质，对产品的质量加以监督。该测定方法操作简便、准确性高、专属性强，值得推广应用。

参考文献：

[1] 刘晓云，宋建国.抗高血压单片复方制劑缬沙坦/氨氯地平临床药理学研究进展[J].中国执业药师，2011，8（12）：31-36.

[2]戴彤，张抒扬.缬沙坦/氨氯地平单片复方制剂在高血压治疗中的应用[J].中华高血压杂志，2011，19（9）：813-815.

[3] 胡大一.缬沙坦氨氯地平单片复方制剂对单药治疗血压控制不良的中国高血压患者疗效及安全性研究Ⅱ：原理和设计[J].中华高血压杂志，2010，18（12）：1116-1119.

[4] 魏春燕.沈利.王延松.等.HPLC法测定复方氨氯地平缬沙坦片有关物质[J].中国药师，2011，14（8）：1142-1144.

[5] 陈宁，柴志勇，杨守忠，等. 缬沙坦联合氨氯地平对高血压病血栓前状态的影响[J]. 中国医学工程，2011，19（10） ： 9-11.

[6]李勇.联合降压药物固定剂量复方制剂的药物选择-血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂+钙通道阻滞剂的临床意义[J].中国新药杂志，2010，19（18） ： 1671-1675.

[7] 吴泽兵，张颖，余其贵，等.缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪对老年高血压患者血压变异性的影响[J].中华心血管病杂志，2012，40（1）：8-13.

[8] 吴善霞.刘延凤.HPLC法同时测定缬沙坦氢氯噻嗪片中两组分的含量[J].药学研究，2012，32（3）：153-155.

[9] 吴迪，郭伟英.hplc色谱法同时测定缬沙坦氢氯噻嗪胶囊中缬沙坦和氢氯噻嗪的含量[J].中国药房，2012，23（9）：846-847.

[10] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2010 年版.二部.北京： 中国医药科技出版社，2010：1136-1137.