不同消毒方式对接种鸡冠花种子影响的研究

郭丽徐荣

1.河南农业职业学院；2.河南省宏力高科技农业发展有限公司

不同消毒方式对接种鸡冠花种子影响的研究

郭丽1徐荣2

1.河南农业职业学院；2.河南省宏力高科技农业发展有限公司

本研究以鸡冠花种子为试材，用75%的乙醇和0.1%升汞（加数滴吐温-20）不同时间组合进行消毒处理。结果表明：在所进行的消毒处理中，以酒精消毒30秒外加HgCl2（加数滴吐温-20）消毒10分钟的处理组合最佳。

鸡冠花种子消毒方式

鸡冠花（Celosia cristata L.）又名头状鸡冠、红鸡冠、鸡公花，属于苋科（Amaranthaceae）青葙属（Celosia），一年生草本植物。茎直立粗壮，叶互生，叶片卵形、卵状披针形或披针形，宽2～6厘米。花序顶生，成扁平肉质鸡冠状、卷冠状或羽毛状的穗状花序，一个大花序下面有数个较小的分枝，圆锥状矩圆形，表面羽毛状，双性花生于花序基部；花被片红色、紫色、黄色、橙色或红色黄色相间［1］。

鸡冠花原产东亚及南亚亚热带和热带地区，世界各地均有栽培。喜高温干燥气候，怕干旱，不耐涝；不耐寒、畏霜冻。适于作一年生花卉露地栽培，矮生种也可盆栽，鸡冠花绿化装饰效果强，还可做切花和干花的材料［2］，学者们多对鸡冠花的药用、食用价值进行研究，［3，4，5，6］被推测是一种很有开发利用前景的天然食药兼备的“功能性色素”资源［7］。其含有丰富的营养素及色素，食用安全，有广阔的开发利用价值和规模化生产的前景。

采用传统的播种繁殖，繁殖系数低。又因异花授粉，天然杂交容易造成品种特征混杂和品种退化，逐渐失去原有价值。留种植株需要注意隔离［8］。应用组织培养技术则可保持原品种的特性，减少制种的麻烦，还可极大提高繁殖系数，节约成本。但是组织培养技术必须是在无菌环境下完成的，因此，外植体消毒是重要的，关系着组培成功与否的首要环节［9］。并为组培快繁体系的构建、工厂化育苗和品种保持提供理论依据和参考价值。

一、试验材料与方法

1.试验材料

以鸡冠花种子（本实验室提供）为试材。

2.试验方法

（1）培养条件。培养室温度为25±2℃，光照12～14小时，光照强度1500～2000 Lx。

（2）种子的无菌萌发。将种子（用纱布包起）用加中性洗涤剂的自来水浸泡10分钟，再用自来水冲洗30分钟，滤干水分，然后置于超净工作台上，用75%的乙醇和0.1%升汞（加数滴吐温-20）不同时间组合进行消毒处理（见表），之后用无菌水浸洗4～6次，接种于MS培养基上。接种后及时观察统计，比较各种消毒方式的效果及苗的生长状况。

二、结果与分析

外植体的灭菌效果直接影响着试验的进程。为获得无菌种子苗，试验采用了75%乙醇（s）+0.1%升汞（min）两种消毒剂的5种不同时间（6、8、10、12、14min）处理，比较其对种子的灭菌效果。其结果如表所示。从表可以看出，消毒时间的长短影响着消毒效果。当升汞处理时间为6～8分钟时，消毒不彻底，存在污染现象；当≥10分钟时，污染率为零。随着乙醇和升汞处理时间的延长，污染率虽为零，对材料的伤害力却逐渐增大，致使发芽时间延长2～3天，甚至一周不等，且萌发率有所降低。

结果表明，在所进行的消毒处理中，以酒精消毒30秒外加HgCl2（加数滴吐温-20）消毒10分钟的处理组合最佳，即洗涤剂浸泡10分钟，自来水冲洗30分钟，75%乙醇漂洗30 s，0.1%的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗4～6次，无菌率达100%，芽萌发率达100%，出芽所需时间短。而且从后期观察中发现无菌苗整齐度高，生长一致。种子从消毒之后，大约经过一周左右之后，开始萌发，12天左右逐渐长出真叶，当20天后长出3～4片真叶时，即开始进行下步试验。

三、结论与讨论

在植物组织培养过程中，造成污染的原因很多，其中外植体带菌是培养过程中污染的主要原因。对以茎尖做外植体的尤其如此，这是因为枝条长期暴露于自然环境中，植物体表面携带了大量的细菌和真菌，有些菌类甚至浸入植物组织的内部。建立无菌外植体，获得无菌培养材料是组织培养成功的第一步，而外植体的消毒则是其关键。

外植体消毒不彻底，就得不到无菌材料，组织培养就无法进行；但消毒时间过长时，材料则因较强的毒害作用，同样影响试验进程。所以对材料进行处理时，要根据具体情况来分析区别对待。从材料本身来讲，例如对于种子、地下块茎等消毒可适当延长，而对花药、茎尖、胚珠等的消毒可适当缩短。从选材季节来说，一般来讲，冬春季取材，整个环境温度偏低，植物体表菌体含量较少，消毒时间应减短，以利于消毒后材料的恢复生长；夏秋季节，环境温度较高，植物体表菌体含量较多，消毒时间应适当延长等［10］。

在本试验中，采用的鸡冠花种子较硬且光滑，易消毒，得出用75%乙醇漂洗30秒，0.1%的升汞消毒10分钟可达到100%的灭菌效果，但过短或过长的时间都降低了诱导率，浪费种子。所以组织培养中，要根据材料本身特性等制定合理的外植体消毒处理方案，找出适合的消毒方法，促进试验的顺利开展。

不同消毒处理方式对鸡冠花种子的影响

［1］中国植物志［M］.第二十五卷，第二分册.科学出版社. 1979，200～201

［2］张树宝.花卉生产技术［M］.重庆：重庆大学出版社. 2008

［3］陈静，姜秀梅，李坦等.鸡冠花止血作用机制研究［J］.北华大学学报.2001，2（1）：39～40

［4］李万里，田玉慧，沈关心.鸡冠花黄酮类对成骨细胞矿化和IGF-1的作用［J］.中国公共卫生.2003，19（11）：1392-1393

［5］Ashraf G.，and Kapoor H.C..Modifications in the purification protocol of celosia critata antiviral proteins lead to protein that can be N-terminally sequenced［J］.protein and peptide.2004，11（6）:555～561

［6］彭子模，高雁，彭宇.新疆鸡冠花食用色素粗成分与有害微量元素含量的测定［J］.新疆师范大学学报（自然科学版）.2003，22（4）：31-32

［7］李进，彭宇，彭子模等．鸡冠花食用色素安全性的研究［J］.生物技术.2004，14（3）：43-45

［8］王秀峰，李宪利.园艺学各论（北方本）［M］.北京：中国农业出版社，2003，458～459

［9］曹春英.花卉栽培.北京：中国农业出版社［M］.2010

［10］刘青林，马祎，郑玉梅.花卉组织培养［M］.北京:中国农业出版社.2003