北五味子乙醇提取物对肠道杆菌抑菌活性的测定

曹桂范 杜 喆 杜惠莲 陶 凯

（沈阳医学院，辽宁 沈阳 110034）

北五味子乙醇提取物对肠道杆菌抑菌活性的测定

曹桂范 杜 喆 杜惠莲 陶 凯

（沈阳医学院，辽宁 沈阳 110034）

目的 探讨北五味子乙醇提取物对肠道杆菌的抑菌活性，以期为防治肠道杆菌的感染提供试验依据。方法 测定北五味子乙醇提取物对供试菌的抑菌圈直径和最低抑菌浓度。结果 北五味子乙醇提取物对供试菌的抑菌圈分别为，大肠埃希菌：19.17 mm；乙型副伤寒沙门菌：18.06 mm；宋内志贺菌：22.84 mm；变形杆菌：18.78 mm。北五味子乙醇提取物对供试菌的最低抑菌浓度分别为，大肠埃希菌：25 mg/mL，乙型副伤寒沙门菌、宋内志贺菌、变形杆菌：均为12.5 mg/mL。结论 北五味子乙醇提取物对肠道杆菌均有一定的抑菌作用。其中对宋内志贺菌的抑菌作用显著，对大肠埃希菌的抑菌作用相对较弱。

北五味子；乙醇提取物；肠道杆菌；抑菌活性

1　材料与方法

1.1 材料、仪器

1.1.1 材料：北五味子果实由大梨树特色种植区生产，经鉴定为北五味子，阴干后密封置于4 ℃保存备用。

1.1.2 菌种：大肠埃希菌（Escherichia coli）、乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）、宋内志贺菌（Shigella sonnei ）、变形杆菌（Proteus vulgaris）。以上菌种，由沈阳医学院微生物教研室提供。

1.1.3 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，121 ℃灭菌30 min。

1.1.4 主要仪器：BS-224S电子天平，德国赛多利斯公司；HH-11·500

电热恒温培养箱，厦门医疗电子仪器厂；YXQ602型电热式高压灭菌器，山东新华医疗器械厂； SW-CJ-IF型无菌超净工作台，苏州净化设备有限公司。

1.1.5 主要试剂：乙醇（分析纯）、氯化钠（分析纯），均为国药集团化学试剂有限公司；牛肉浸膏、蛋白胨和琼脂粉，均为广东环凯微生物科技公司。

1.2 方法

1.2.1 北五味子乙醇提取物的制备：将自然干燥的北五味子果实粉碎后过60目筛，称取粉末10 g，用70%乙醇和蒸馏水进行80 ℃水浴，料液比为1∶15（mL/g），浸提4 h［4-5］。将浸出液浓缩定容到10 mL，得1 mL相当于1 g北五味子乙醇提取物的试样，提取物经滤膜除菌，4 ℃贮存备用。以不加北五味子的提取剂于相同条件下提取和处理，即阴性对照。

1.2.2 菌悬液的制备：将各种试验菌活化，在无菌条件下，分别挑取每种菌的菌苔，用无菌生理盐水稀释，制成浓度为108CFU/mL的菌悬液，备用。

1.2.3 抑菌活性测定：采用平板打孔药敏法［6］，将已灭菌的培养基冷却至50 ℃，接入108 CFU/mL的供试菌菌悬液，接种量1%。摇匀后倒入平板中，培养基厚度为5～6 mm。置于37 ℃恒温培养箱中，30 min后取出，干燥琼脂表面，备用。用无菌打孔器在培养基上均匀打出四个直径为6 mm的圆孔，将倍比稀释的北五味子乙醇提取液用移液枪注入各孔，每孔为0.1 mL。在37 ℃下培养24 h后，测定抑菌圈直径，比较抑菌效果，重复3次。同时作阴性对照及空白对照。

1.2.4 最低抑菌浓度（MIC）测定：倍比稀释的北五味子提取物，分别与灭菌后降至50 ℃的培养基充分混匀后倒平板［7-8］。提取物最终浓度分别为50～0.39 mg/mL 8个梯度。待培养基冷却后，用移液枪吸取浓度为108CFU/mL的供试菌液 50 μL于平板上均匀涂布，每个样液浓度3个重复，并做阴性对照及空白对照。上述培养基在37 ℃温度下培养24 h，观察菌落的生长情况，无菌落生长的培养基的最低提取物浓度，即为最低抑菌浓度（MIC）。

2　结果与分析

2.1 北五味子丙酮提取物抑菌活性试验结果，见表1。

表1 北五味子丙酮提取物对供试菌的抑菌圈直径（mm）

2.2 最低抑菌浓度（MIC）测定：从表2可知北五味子乙醇提取物对大肠埃希菌的最低抑菌浓度（MIC）为25 mg/mL，对乙型副伤寒沙门菌、宋内志贺菌、变形杆菌的最低抑菌浓度（MIC）均为12.5 mg/mL。

3　讨　论

在临床上，肠道杆菌主要引起肠道感染，特别是致病性大肠埃希菌、志贺菌、伤寒沙门菌引起的感染往往发病急，传染性强。针对肠道杆菌感染的治疗，主要是使用抗生素，可是抗生素治疗往往会改变肠道的微生态环境，导致作为人体肠道正常菌群的大肠埃希菌被大量杀死，从而发生菌群失调症。北五味子乙醇提取物对肠道杆菌的杀菌作用虽然不及抗生素，但其对大肠埃希菌的最低抑菌浓度相对较高，不会破坏肠道的菌群平衡，从而避免菌群失调症的发生。应用北五味子提取物对肠道杆菌的感染（特别是志贺菌的感染）进行治疗，是一种对抗生素治疗起辅助作用的有效治疗手段。

表2 北五味子乙醇提取物的最低抑菌浓度（MIC）

在日常生活中，预防肠道杆菌的感染也十分重要。北五味子提取物中的有效抑菌成分经过进一步分离纯化后，可以应用于食品防腐领域，发挥其对肠道杆菌的抑菌作用，从而预防肠道杆菌感染的临床疾病。

北五味子提取物的分离纯化的工艺流程还需进一步完善，北五味子中具体的抑菌成分及其最佳的抑菌浓度还有待进一步研究。期待北五味子在防治肠道杆菌感染的方面发挥其重要临床价值。

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R282.710.5

B

1671-8194（2015）15-0059-02北五味子是产自东北三省的名贵中药材，具有益气、敛肺、生津、止渴、敛汗、壮阳、补肾等功能［1-2］。在高温、潮湿的条件下，中药材的保存一直受到霉烂变质等难题的困扰，而北五味子在这样的条件下，存放数年却不出现霉变形象，由此推断北五味子还具有一定的抑菌作用［3］。然而，关于北五味子提取物的抑菌、杀菌活性的报道还相对较少，本试验研究了北五味子乙醇提取物对肠道杆菌的抑菌活性，旨在进一步开发利用北五味子，增加其临床应用价值。