健心颗粒的质量标准研究

林隽丹

（福建省立医院药剂科，福建　福州　350001）

・基础研究・

健心颗粒的质量标准研究

林隽丹

（福建省立医院药剂科，福建福州350001）

目的 建立健心颗粒颗粒质量标准，有效控制健心颗粒的质量。方法 用薄层色谱法对该处方中的丹参药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA的含量。结果 薄层色谱鉴别斑点清晰；HPLC法测定灵敏度高，进样量在13.93～198.38 μg，范围内与峰面积值呈良好的线性关系（r2=0.9997），阴性对照无干扰。结论 该法操作简便，测定结果准确，专属性强，可作为该制剂的质量控制方法。

健心颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；阿魏酸

慢性心力衰竭在中医诊断学中称“心悸”、“水肿”、“喘证”等，常见的标实多为血瘀、痰浊、水饮［1］。本次试验的健心颗粒为自制，主要由丹参、桂枝、猪苓、蒲黄、黄芪、红参、白术、葶苈子几种中药构成。为控制该药品的质量，本研究对该方剂中的君药丹参进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相法测定丹参中丹参酮ⅡA的含量，同时进行方法学考察，结果显示：此方法准确度高，可靠性高，可用于健心颗粒的质量控制。

1　仪器与试药

1.1 仪器

KQ3200DE型医用数控超声仪（昆山市超声仪有限公司）；RE-51BA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 试药

丹参对照药材（批号110766-200628）、丹参酮ⅡA标准品（批号130937-200632）均购自中国药品生物制品检定所，健心颗粒（自制），缺丹参阴性样品。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2　薄层色谱鉴别

2.1 供试品溶液的制备

取本品约6 g，仔细研磨，加乙酸9 mL，时时振摇，静置1 h，滤过，旋干滤液，残渣加醋酸乙酯2 mL使之溶解，作为供试品溶液。

2.2 对照药材溶液制备

取丹参对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。

2.3 阴性供试品溶液制备

按处方项取各味药材（除丹参外），取阴性药品颗粒10 g按2.1项目下方法制备即可。

2.4 测定方法

依据TLC（药典2010年版一部附录VI B）进行操作，吸取上述溶液各10 μL，分别点于相同硅胶G薄层板上，将石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8:2）作为展开剂，展开，取出，吹干。在供试品的色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。阴性样品色谱在与对照品色谱相应的位置上，不显斑点。见图1。

图　1

3　丹参酮ⅡA含量测定

3.1 样品溶液制备

3.1.1健心颗粒的制备

单取红参粉碎成细粉，备用。取丹参，加70%乙醇提取2次，1 h/次，过滤，合并滤液；取黄芪、猪苓、白术、桂枝、蒲黄、葶房子和丹参药渣混合，加适量水煎煮2次，1 h/次，过滤，合并滤液。合并醇提滤液和水提滤液，浓缩，将得到浸膏按处方比例加入红参细粉和适量糊精与混合，制粒，即为本品［2］。

3.1.2阴性颗粒的制备

按3.1.1项目下方法制备，不加入丹参药材，即可。

3.1.3对照品溶液的制备

精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加色谱甲醇制成每1 mL含丹参酮ⅡA20.3 μg的溶液，即得。

3.1.4供试品品溶液的制备

取本品颗粒15 g，精密称定置具圆底烧瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，密闭，称定重量，回流加热20 min，放冷。称重，加适当的70%甲醇至与原重相同，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得［3］。

3.2 实验方法与结果

3.2.1色谱条件

色谱柱为C18柱（上海月旭科技股份有限公司，250 mm×4.5 mm，5 μm）；以甲醇-乙腈-甲酸-水（20:10:1:69）流动相；测试得到的λm为287 nm；柱温35℃；流速为1 mL/min，进样量为15 μL，理论板数按丹参酮ⅡA计算应不低于2000。

3.2.2线性关系的考察

在上述色谱条件下分别进样2、4、6、10、20、30 μL对照品溶液，记录色谱图，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=2.2759X-0.2442。r2=0.9997，线性范围13.93～198.38 μg范围内，呈现良好的线性关系。见图2。

图　2

3.2.3精密度实验

精密量取对照品溶液进样6次，10 μl/次，注入液相色谱仪，峰面积的RSD=0.87%。见表1。

表 1

3.2.4稳定性实验

取健心颗粒供试品溶液分别在0、2、4、6、8、12、24、48 h进样7次，15 μl/次，记录丹参酮ⅡA的峰面积，RSD=1.02%，说明样品在48 h内的供试品溶液较为稳定。

3.2.5重复性试验

称取本品颗粒6份按照3.1.1项下操作制备6份样品溶液进行测定，平均峰面积为21.30496，RSD=0.88%。

3.2.6供试品含量测定

分别精密吸取供试品与对照品溶液各10 μL，进样，测定，峰面积代入回归方程求得含量为7.236 μg/g。

4　讨 论

4.1 指标成分选择

丹参所含有的有机酸具有抗心肌缺血作用。有学者研究发现丹参具有增加心脏供血、改善、保护心肌细胞的作用［4-5］。丹参酮ⅡA具有多重药理活性，能对抗急性心肌缺氧损伤、抗心律失常、改善血管平滑肌功能，对缺血/再灌注引起的组织损伤具有保护作用，丹参酮ⅡA通过对肿瘤细胞的杀伤、诱导分化和凋亡、抑制侵袭和转移的机制发挥抗肿瘤作用，所以选择丹参酮ⅡA作为指标成分进行含量测定。

4.2 实验方法考察

通过TLC检视对该复方制剂进行定性鉴别，结果各薄层斑点无阴性对照干扰，斑点清晰。因为丹参在该复方中为君药，故以丹参酮ⅡA含量含丹参的健心颗粒制剂质量控制指标，丹参酮ⅡA进样量在13.93～198.38 μg范围内具有良好的线性关系，r2=0.9997。在287 nm波长处丹参酮ⅡA有最大吸收，且干扰峰较少。选择甲醇-乙腈-甲酸-水（20:10:1:69）流动相，柱温35℃，理论塔板数2000，分离度较好。

［1］ 周 瑜，方 锐，王国佐，等.活血化瘀方药对血瘀证模型的作用机制的研究进展［J］.中医药导报，2015，21（12）:87-91.

［2］ 程 沛，韩东岐，胡伟慧，等.高效液相色谱法同时测定丹参中10种水溶性和4种脂溶性成分的含量［J］.药物分析杂志，2015，35（6）:991-996.

［3］ 佟志军，杨 磊，王安波，等.用薄层方法系统鉴别复方虎眼万年青胶囊中丹参药材［J］.内蒙古中医药，2015，2（4）:114-119.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京:中国医药科技出版社，2010.

［5］ 孙毅坤，邸 峰，周富荣.复方丹参片质量标准的研究及其质量考察［J］.中国药事，2000，14（6）:383-385.

本文编辑：吴玲丽

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ISSN.2095-6681.2015.21.193.02