雷公藤涂膜剂的制备及其体外透皮试验

周 密， 徐晓勇， 马凤森，*， 梁 宜

（1.浙江工业大学药学院，浙江　杭州　310014；2.浙江中医药大学附属第三医院，浙江　杭州　310009）

雷公藤涂膜剂的制备及其体外透皮试验

周 密1， 徐晓勇1， 马凤森1，2*， 梁 宜2

（1.浙江工业大学药学院，浙江杭州310014；2.浙江中医药大学附属第三医院，浙江杭州310009）

目的 对雷公藤涂膜剂进行处方工艺筛选及体外透皮性能研究。方法 采用正交试验筛选优化处方，并对涂膜剂的制剂流动性，成膜时间，外观质量进行评价；以去甲泽拉木醛为指标，采用Franz扩散池考察其透皮吸收行为。结果 雷公藤涂膜剂的最佳处方为1.5%雷公藤浸膏粉，5%聚乙烯醇（PVA）-124，4%丙二醇，30%无水乙醇。12 h透皮试验平均累积透过率为73.09%，平均累积透过量为55.19μg/cm2。结论 所制备的雷公藤涂膜剂的成膜时间短且成膜质量好，渗透稳定持久，释放率高。

雷公藤；去甲泽拉木醛；涂膜剂；体外透皮

雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.有祛风活络、破淤止痛等功效，临床常用于风湿性和类风湿性关节炎（RA）的治疗［1］。其中二萜类、三萜类为其主要活性成分［2］。二萜类成分中的雷公藤甲素是雷公藤治疗风湿性和类风湿性关节炎等疾病的主要有效成分，但也是雷公藤引起毒副作用的主要成分［3］。去甲泽拉木醛（demethylzeylasteral，DMZ）在三萜中含有量最高，具有一定的免疫抑制作用和抗炎作用，且毒性显著低于甲素［4］。目前已上市的雷公藤制剂主要有雷公藤多苷片、雷公藤片、雷公藤双层片和雷公藤总萜片等［5］，均为口服给药剂型。雷公藤经皮给药制剂具有安全性高、顺应性好的特点，可以满足临床选择需要，有较好的研究前景。

涂膜剂是药物与成膜材料制成的供外用涂抹，能形成薄膜的局部液体制剂［6］。涂膜剂不仅制备工艺简单，且使用后在用药部位形成药膜可保护创面，具有使用舒适和刺激性小等优点，同时膜的形成减少了皮肤表面水分的蒸发，促进了水合作用和溶解角质作用，使药物透过角质逐渐释放药物，延长药效维持时间［7］，是一种很有发展前途的剂型。

1　仪器与材料

Waters（515-717-486）高效液相色谱仪（美国Waters公司）；RYJ-12B型药物透皮试验仪（上海黄海药检仪器有限公司）；雷公藤浸膏粉（自制，批号为20130502，含DMZ 69.89 mg/g）；聚乙烯醇（PVA）-124（日本可乐丽）；DMZ纯品（南通飞宇生物技术有限公司，批号为FY18540803，纯度为99.35%）；高效液相所用试剂为色谱纯，其他试剂为分析纯。ICR小鼠（浙江省医学科学研究院，SCXK（浙）-20140001）。

2　方法与结果

2.1涂膜剂基质的制备 按处方量称取PVA-124，蒸馏水配成10%浓度，密封，冷水浸润12 h，水浴80℃溶胀2 h后，取出放凉备用［8］。在搅拌下向PVA-124溶液加入处方量丙二醇溶液。缓慢加入处方量乙醇，搅拌使之分散均匀。最后加纯化水至足量［9］，稀NaOH溶液调节pH至9，得黏稠状涂膜剂基质。

2.2涂膜剂基质质量评价指标 以基质的流动性、成膜质量、外观和成膜时间［10-11］作为指标进行评价。涂膜剂制备时搅动顺畅，基质细腻，色泽一致，分散均匀，使用时薄膜完整、有韧性为6分；搅动较顺畅，使用时薄膜连续为4分；搅动困难，基质有微量沉淀，使用时薄膜有破裂为2分。成膜时间：取涂膜剂1 mL均匀涂于皮肤上，每30 s考察1次，观察并记录成膜时间。综合上述评价指标以总分确定最终基质处方（表1）［12］。

表1　涂膜剂基质质量评分标准Tab.1 Criteria for matrix of pellicle

2.3正交试验优化基质处方及其结果 经过预实验，处方中PVA-124体积分数（A），丙二醇体积分数（B）和乙醇体积分数（C）三个因素对实验结果影响较大，本实验选择L9（34）正交表优化涂膜剂基质处方，观察试验样品并取等量涂布于受试者的手背皮肤，采用“2.2”项下涂膜剂质量评价标准评价其质量，实验结果见表2［12］，方差分析见表3。

表2　L9（34）正交试验结果（n=3）Tab.2 Results of L9（34）orthogonal test（n=3）

表3　方差分析Tab.3 Variance analysis

根据实验数据统计分析，以综合评分为指标，实验结果显示因素影响的大小为A＞B＞C，其中因素A、B具有显著影响（P＜0.05）；最佳工艺组合为A2B1C1。由于在正交水平范围内乙醇体积分数对涂膜剂制备没有显著影响，且发现乙醇的体积分数与载药量成正相关，为了增大涂膜剂的载药量，并保证涂膜剂的质量，本实验选用A2B1C2组合。

2.4雷公藤涂膜剂的制备 称取适量的雷公藤浸膏粉溶于处方量的无水乙醇中。按“2.1”项制备方法，在正交试验优选的基质处方基础上制备雷公藤涂膜剂。

2.5涂膜剂中去甲泽拉木醛的测定 称取雷公藤涂膜剂0.5 g，置于锥形瓶中，使充分涂展，加入3 mL甲醇，震荡并超声处理5 min。多次提取至甲醇溶液无色澄清，涂膜剂残留固体呈白色。提取液合并，定容至25 mL，过滤，按“3.1.2”项下色谱条件测定去甲泽拉木醛的量。

2.6雷公藤涂膜剂的载药量研究 制备含雷公藤浸膏粉（10、15、20、25 mg/mL）的涂膜剂，按“2.2”项下评分标准，优选雷公藤涂膜剂的载药量。

实验结果显示含雷公藤浸膏粉15 mg/mL的雷公藤涂膜剂呈褐色稠状溶液，体系分散均匀。平行制备3组进行评价，观察其外观、流动性，结果显示其成膜时间1 min以内，成膜完整连续，涂布容易，均匀无沉淀。总分22分，满足质量要求。

按“2.5”项下测定雷公藤涂膜剂中去甲泽拉木醛的的最大载药量为（1.152±0.007）mg/g。

优化后的处方工艺为称取2.5 g PVA-124，蒸馏水配成10%浓度，密封，冷水浸润12 h，水浴80℃溶胀2 h后，取出放凉备用。在搅拌下向PVA-124溶液加入2mL丙二醇溶液。缓慢加入15mL无水乙醇溶液（含0.75 g雷公藤浸膏粉），搅拌使之分散均匀。最后加纯化水至足量，稀NaOH溶液调节pH至9，得稠状雷公藤涂膜剂溶液。

3　雷公藤涂膜剂的透皮实验研究

3.1去甲泽拉木醛在接受液中的分析方法学研究结合参考文献［13］与课题组预实验的结果建立HPLC法测定去甲泽拉木醛在接受液中的含量分析方法学。

3.1.1溶液的制备

3.1.1.1对照品溶液的制备 精密称取去甲泽拉木醛对照品1.77 mg，加甲醇制成含去甲泽拉木醛28.32μg/mL的溶液，即得。

3.1.1.2供试品溶液的制备 取透皮接受液5 mL，过0.45μm滤膜，即得。

3.1.2接受液中去甲泽拉木醛的色谱条件 Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（55∶45）；检测波长245 nm；柱温室温；体积流量1.000 mL/min。

3.1.3专属性 取去甲泽拉木醛对照品，空白接收液及含药接受液进高效液相色谱，结果显示去甲泽拉木醛的分离度大于1.5，理论塔板数大于10 000。对照品、空白接受液和含药接受液色谱图见图1。

图1　去甲泽拉木醛对照品（A）、空白接受液（B）和含雷公藤接受液（C）的HPLC图Fig.1 HPLC fingerprints of standard reference of DMZ（A），blank solution（B），and test solution w ith TWH（C）

3.1.4线性关系 精密称取去甲泽拉木醛对照品，用接受液（PEG-400-无水乙醇-生理盐水为1∶4∶5）［14］溶解并摇匀，得到28.32μg/mL的对照品接受液溶液。分别将不同体积的去甲泽拉木醛对照品接受液溶液进样，在上述色谱条件下进行测定。以进入液相色谱仪的对照品质量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得回归方程为Y=1.22×106X-26 636，r=0.999 9。线性范围为0.028 4～2.84μg。

3.1.5回收率试验 精密吸取6份等量透皮实验透过液（含去甲泽拉木醛0.86μg），每份加入含去甲泽拉木醛1.09μg的对照品溶液，混合均匀。HPLC法分别进样，测定并计算，去甲泽拉木醛在上述接受液中的平均回收率为99.8%，RSD为1.6%。

3.2雷公藤涂膜剂体外透皮性能研究

3.2.1离体鼠皮制备 取6只健康雄性小鼠（20± 2）g，用7%硫化钠溶液（含5%甘油）活体脱去其背部毛发后用生理盐水洗净皮肤，擦干后饲养12 h。处死后剥离背部皮肤，剔除皮下脂肪和黏连物，用生理盐水洗净，使用前检查皮肤有无破损［15］。

3.2.2体外透皮试验 体外透皮试验采用改良的Franz扩散池，上室为扩散室，下室为接收室，接收室的容积为7 mL，有效扩散面积为2.3 cm2，（37.0±1.0）℃恒温水浴加热，并以600 r/min磁力恒速搅拌。试验时，在接收室内加满接受液，将鼠皮固定在两室之间，角质层朝上，使真皮层与接受液充分接触，排除气泡，由于涂膜剂使用的成薄膜的特殊性，所以雷公藤涂膜剂的加样量为0.15 mL（含去甲泽拉木醛173μg）均匀涂布于皮肤上。分别于时间点2、4、6、8、10、12、24 h取5 mL接受液，并同时补加同样体积的同温新鲜接受液。接受液30 s内用0.45μm滤膜过滤，用HPLC测定去甲泽拉木醛的含量并计算累积渗透量Qn与累积透过率P。

累积渗透量Qn的计算公式为：

累积透过率P=［累积渗透量Qn/（雷公藤涂膜剂中去甲泽拉木醛质量浓度×加样量））］100%

Qn为第n个取样点的累积渗透量（μg），Cn、Ci为第n个和第i（i≤n-1）个取样点的去甲泽拉木醛质量浓度（μg/mL），V0为接受液的体积（mL），V为取样的体积（mL）。V0=7 mL，V=5 mL。结果见表4和图2。

透皮实验表明在10 h内涂膜剂呈零级释放，释放曲线为Qn=13.42t-18.84，r=0.995 5。滞后时间为1.4 h，渗透速率为4.86μg/h·cm2，累积透过率达64.32%。10 h之后去甲泽拉木醛的渗透速率逐渐下降，在24 h内去甲泽拉木醛释放曲线符合Higuchi方程（Qn=43.70t1/2-42.60，r= 0.910 6），累积透过率达86.49%。

表4　透皮试验结果（±s，n=3）Tab.4 Results of in vitro transdermal experiment（±s，n=3）

表4　透皮试验结果（±s，n=3）Tab.4 Results of in vitro transdermal experiment（±s，n=3）

t/h Qn平均/μg平均累积透过率/% 2 5.79±1.24 3.33 4 34.78±8.40 20.02 6 64.92±10.70 37.38 8 90.85±11.08 52.31 10 111.89±11.17 64.43 12 126.93±9.78 73.08 24 154.21±9.20 86.49

图2　雷公藤涂膜剂透皮累积渗透曲线（n=3）Fig.2 Transdermal cumulative distribution of Trigetrygium Wilfordii Hook.f extract pellicle（n=3）

4　讨论

本实验制备的涂膜剂以雷公藤浸膏粉为主药，去甲泽拉木醛为指标物质，通过正交试验对雷公藤涂膜剂的基质进行筛选，并建立涂膜剂质量评价标准，得到最优处方工艺，制得质量较好的涂膜剂，同时对雷公藤涂膜剂进行了初步的透皮实验研究。

PVA-124作为涂膜剂常用的成膜材料，具有极强的亲水性与较好的生物相容性，能形成柔韧连续的薄膜；丙二醇作为增塑剂可使膜的柔成膜性能和抗拉强度增加，同时具有透皮促渗作用；乙醇为涂膜剂的重要成分，作用之一是溶解浸膏粉使之均匀分散在涂膜剂中，乙醇的量决定了涂膜剂的载药量，但过量的乙醇会使PVA-124析出，另一方面作用是涂膜剂涂布于皮肤之后，乙醇的挥发使膜迅速生成。在试验过程中必须注意的是将含雷公藤浸膏粉的乙醇溶液加入基质时，需不断搅拌至混合均匀，防止PVA析出［12］。

为了科学客观地评价涂膜剂的质量，需要建立更为完善与客观的评价标准。涂膜剂的质量评价指标均采用直观评价，以涂膜剂外观、流动性、成膜时间与成膜质量为指标。涂膜剂外观用于考察涂膜剂的均匀程度，流动性为涂膜剂使用时的涂布性能，成膜时间评价涂布后成膜的时间，反映了患者使用的顺应性，成膜质量为药膜涂布于皮肤后观察成膜完整性、均匀度、有无气泡及膜的柔韧性等。

透皮实验研究时，发现去甲泽拉木醛在碱性环境下有更好的渗透性能。通过对涂膜剂进行初步透皮性能研究，结果显示10 h内药物呈零级释放。24 h的渗透曲线符合Higuchi方程，表明去甲泽拉木醛从涂膜剂中释放到被皮肤吸收的渗透曲线趋近于稳态。雷公藤涂膜剂的24 h的透过率达86.49%，综上所述，雷公藤涂膜剂的渗透稳定持久、释放率高，值得作为一种有临床应用价值的新剂型而继续深入研究。

［1］ 王爱华，李义凯.雷公藤治疗类风湿性关节炎及不良反应概述［J］.实用中医药杂志，1995，11（6）：37-38.

［2］ 任 荣，李正翔，李 彬，等.雷公藤有效成分及其制剂的研究进展［J］.中国医院药学杂志，2005，25（11）：1068-1069.

［3］ 刘明星，董 静，杨亚江，等.雷公藤甲素的研究进展［J］.中国中药杂志，2005，30（3）：170-174.

［4］ Ríos，José-Luis.Effects of triterpenes on the immune system［J］.JEthnopharmacol，2010，128（1）：1-14.

［5］ 马庆峰，曾 涛.关注雷公藤制剂的用药安全［J］.风湿病与关节炎，2012，1（4）：45-45.

［6］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［7］ 金 铃，王锦玉，仝 燕，等.涂膜剂研究概述［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（8）：277-280.

［8］ 朱 晶，艾立诚，陈 静.聚乙烯醇的溶解方法［J］.北方药学，2011，8（3）：7-8.

［9］ 杨建坤，杨章群，曹德英.阿西美辛涂膜剂体外透皮吸收的影响因素考察［J］.中国医院药学杂志，2005，25（10）：937-939.

［10］ 谢 玲，钟晓红，刘东波，等.紫珠止血涂膜剂成膜材料及附加剂的优选［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（5）：27-29.

［11］ Zurdo I，Franke P，Schaefer F，etal.Developmentand characterization of film forming polymeric solutions for skin drug delivery［J］.Eur JPharm Biopharm，2007，65（1）：111-121.

［12］ 钱丽萍，阙慧卿，林 绥，等.正交试验优选雷公藤涂膜剂的基质组成［J］.药物评价研究，2011，34（6）：442-444.

［13］ 邵莉，谢培山.雷公藤色谱指纹图谱方法学研究及质量评价［J］.中药新药与临床药理，2013，24（3）：289-293.

［14］ Shen L N，Zhang Y T，Wang Q，et al.Enhanced inυitro and inυiυo skin deposition of apigenin delivered using ethosomes［J］.Eur JPharmacol，2014，460（1）：280-288.

［15］ Das B，Nayak K，Nanda U.Topical gels of lidocaine HCl using cashew gum and Carbopol 940：Preparation and inυitro skin permeation［J］.Int JBiol Macromol，2013，62：514-517.

Preparation and in vitro transdermal behavior of Tripterygium Wilfordii Hook.f extract pellicle

ZHOU Mi1， XU Xiao-yong1， MA Feng-sen1，2*， LIANG Yi2
（1.School of Pharmacy，Zhejiang Uniυersity of Technology，Hangzhou 310014，China；2.The Third Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical Uniυersity，Hangzhou 310009，China）

Tripterygium Wifordii Hook.f（TWH）；demethylzeylasteral；pellicle；inυitro skin permeation

R944

A

1001-1528（2015）03-0526-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.014

2014-05-12

浙江省重大科技专项重点社会发展项目（2010C13014），浙江省“重中之重”学科（针灸推拿学）开放基金项目（ZTK2010A13）

周 密（1991—），女，从事药物制剂新技术研究。Tel：15068856908，E-mail：zhoumi0930@126.com

马凤森（1962—），男，教授，从事药物新剂型研究。Tel：（0571）88871500，E-mail：merrigen@126.com