妇科阴道分泌物不同涂片检验方法比较分析

潘秀芳，黎 滨，卓 芬

（海南省农垦三亚医院 干细胞实验室，海南 三亚572000）

临床上一般采用生理盐水法对阴道分泌物进行涂片检验，但这种方法检出率低，因此，有学者主张用检出率较高且同样具有便捷、简单的革兰染色法代替生理盐水法进行涂片染色。本文针对革兰染色法和生理盐水法用于阴道分泌物涂片检验的效果进行了观察和分析。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2012年6月至2013年12月我院妇科门诊患者的阴道分泌物1000例作为研究资料，患者的年龄为19－61岁，平均年龄为（35.2±13.6）岁。

1.2 检测方法

将采集的阴道分泌物标本分为两份后直接涂在玻片上，其中，一份滴入2滴浓度为0.9%生理盐水，与分泌物混合均匀后在高倍镜下检查，另外一份待干后进行革兰染色，染液主要成份为结晶紫、碘液、脱色液、沙黄。在显微镜下先用低倍镜观察是否存在滴虫，然后用油镜观察滴虫的鞭毛及胞体特征，同时对分泌物中的霉菌、肾型相对双球菌、纤毛菌、加德纳球杆菌等致病菌进行检查。镜检由两位专业临床检验医师分别进行，结果不一致时，请另一位高年资检验医师最终确定结果。

1.3 数据处理方法

本组所有数据均应用SPSS 18.0统计软件包建立数据库并进行统计学分析，两种方法对病原微生物检出率的比较应用卡方检验进行处理，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种涂片检验方法对各类病原微生物检出率的比较

应用革兰染色法进行涂片检验，共有392例标本检出病原微生物，总检出率为39.2%，其中混合感染标本为294例，检出率为29.4%；应用生理盐水法进行涂片检验，共有138例标本检出病原微生物，总检出率为13.8%，共中混合感染标本为106例，检出率为10.6%。应用革兰染色法进行涂片检验的总检出率、混合感染检出率及各类主要病原体的检出率均高于应用生理盐水法，两者之间的差异有统计学意义（χ2＝14.904－294.894，P＜0.05），见表1。

表1 两种涂片检验方法对各类病原微生物检出率的比较（n，%）

2.2 两种涂片检验方法对不同清洁度阴道分泌物中病原微生物检出率的比较

在清洁度为Ⅰ－Ⅱ度的阴道分泌物中，应用革兰染色法和生理盐水法进行涂片检验的检出率分别为21.5%（100/466）和10.7%（50/466），在清洁度为Ⅲ－Ⅳ度的阴道分泌物中，应用革兰染色法和生理盐水法进行涂片检验的检出率分别为54.7%（292/534）和16.5%（88/534），两种涂片检验方法的检出率的差异均有统计学意义（χ2＝19.864、180.079，P＜0.05），见表2。在应用革兰染色法进行涂片检验检出病原微生物的阴道分泌物标本中，清洁度为Ⅲ－Ⅳ度的标本占74.5%（292/392），清洁度为Ⅰ－Ⅱ度的标本占25.5%（100/392），在应用生理盐水法进行涂片检验检出病原微生物的阴道分泌物标本中，清洁度为Ⅲ－Ⅳ度的标本占63.8%（88/138），清洁度为Ⅰ－Ⅱ度的标本占36.2%（50/138），两者构成比的差异有统计学意义（χ2＝5.782，P＜0.05），见表2。

表2 两种涂片检验方法对不同清洁度阴道分泌物中病原微生物检出率的比较

3 讨论

细菌、霉菌、滴虫等所致阴道炎的阴道分泌物性状和临床表现基本相同，因此，在进行病原体诊断时必须要进行阴道分泌物的涂片检查，这样可直接反映宫颈及阴道的感染程度及病原微生物的种类，从而达到减少抗生素滥用、正确指导用药、提高临床诊断效率的目的［1］。生理盐水法是临床上常规的阴道分泌物涂片方法，具有操作简单的优点，而在实际应用过程中，阴道分泌物标本中经常会出现阴道上皮细胞核及细胞膜卷曲、有形成分重叠掩盖、涂片背景不洁等现象，这使得生理盐水法对念珠菌的检出率偏低，在纤毛菌、淋球菌、加特纳球杆菌和其它条件致病菌的检验中具有更大的局限性［2］。而且虽然生理盐水法可观察到阴道分泌物中是否存在滴虫和霉菌，但滴虫一般只在25－42℃的环境下活动，而霉菌则一般依附于上皮细胞之上，因此，送检温度、送检时间、标本成份等因素均可影响生理盐水法对霉菌和滴虫的检出率［3］。革兰染色法则可在一份标本中同时进行多项目检查，在一张涂片中可同时作滴虫、霉菌、白细胞，阴道清洁度等多项检查，特别是对淋球菌，加德纳菌和其他条件致病菌的检测效率要高于生理盐水法［4］，而且同样具有成本低、操作简易、时间快速的特点。革兰染色法对于滴虫的检查不受环境温度的限制，而霉菌经革兰氏染色后的形态也十分清楚，不仅避免了标本污染而且对于有价值的标本还可以进行保存和学术交流，这也克服了生理盐水法无法保存标本、需要重复取样的劣势［5］，因此，在妇科阴道分泌物的涂片检验中，革兰染色法的显著作用已被广大临床工作者所认可和重视。值得指出的是，生理盐水法同样具有操作简便、检出结果迅速的优点，因而在临床上还具有一定的应用价值，近年来，检验医师开始尝试应用多功能染色液快速染色等新型方法来提高检验效率，而且也有研究证实了应用这种快速染色方法检查阴道分泌物的常规检测准确率高且检测项目多，有望取代生理盐水法［6］，但其可靠性仍然有待于进一步的研究予以证实。此外，10%KOH法对于检验假丝酵母菌病等阴道真菌感染也有较高的应用价值，一般来说，其检验效率要高于革兰染色和生理盐水法，但是也有的研究证实，真菌培养法、革兰染色法、10%KOH法在检验阴道真菌感染学方面的差异较小［7］，这一结果也需要大量的临床研究予以讨论和证实。总之，临床检验医师应根据检验需求合理选用检验方法，以求达到提高检验效率、及时辨明致病病原体的目的。

本研究结果显示，应用革兰染色法进行涂片检验的总检出率、混合感染检出率及各类主要病原微生物的检出率均显著高于应用生理盐水法进行涂片检验（χ2＝14.904－294.894，P＜0.05），这说明应用革兰染色法进行涂片检验在阴道分泌物各类病原微生物检测中的效率显著高于应用生理盐水法，值得注意的是两种方法均检出了一定数量的混合感染标本，其中双重感染的标本数量较多，此外还有一部分标本为三重感染、四重感染，这提示了在进行临床检查时要对标本中的病原微生物进行认真核，以减少漏报现象，确保检查结果的准确性对于指导临床医生用药、提高抗感染药物使用效率具有十分重要的意义；在不同清洁度阴道分泌物中，应用革兰染色法进行涂片检验的检出率均显著高于应用生理盐水法（χ2＝19.864、180.079，P＜0.05），而且在应用革兰染色法进行涂片检验检出病原微生物的阴道分泌物标本中，清洁度为Ⅲ－Ⅳ度的标本比例较高（χ2＝5.782，P＜0.05），说明应用革兰染色法进行涂片检验在不同清洁度的阴道分泌物中的检测效率均较高，特别是在清洁度较差的标本中病原微生物的检出比例较高。在临床上，不仅要注重针对清洁度为Ⅲ－Ⅳ度的不正常阴道分泌物的检测，而且也要提高对清洁度为Ⅰ度的正常阴道分泌物中病原体的检出率，避免漏检的出现，值得提出的是，在本研究的样本中，有242例清洁度为Ⅲ－Ⅳ度的阴道分泌物标本中未检出病原微生物，这部分患者可能为非特异性阴道炎，对于此类患者，临床医生应给予高度的重视，应考虑从糖尿病、粪瘘、尿瘘等长期刺激方面查找病因，并继续进行针对支原体、衣原体、人乳头瘤病毒等特殊病原微生物的检测，以提高治疗的效率，并加强对该类患者的相关妇科卫生教育。

［1］Avijgan M，Mahboubi M，Moheb Nasab M，et al.Synergistic activity between Echinophora platyloba DC ethanolic extract and azole drugs against clinical isolates of Candida albicans from women suffering chronic recurrent vaginitis［J］.J Mycol Med，2014，24（2）：112.

［2］Thoma ME，Gray RH，Kiwanuka N，et al.The short－term variability of bacterial vaginosis diagnosed by Nugent Gram stain criteria among sexually active women in Rakai，Uganda［J］.Sex Transm Dis，2011，38（2）：111.

［3］Menard JP，Mazouni C，Fenollar F，et al.Diagnostic accuracy of quantitative real－time PCR assay versus clinical and Gram stain i－dentification of bacterial vaginosis［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2010，29（12）：1547.

［4］Esim Buyukbayrak E，Kars B，Karsidag AY，et al.Diagnosis of vulvovaginitis：comparison of clinical and microbiological diagnosis［J］.Arch Gynecol Obstet，2010，282（5）：515.

［5］Sungkar A，Purwosunu Y，Aziz MF，et al.Influence of early selfdiagnosis and treatment of bacterial vaginosis on preterm birth rate［J］.Int J Gynaecol Obstet，2012，117（3）：264.

［6］姜学慧.两种阴道分泌物常规检查方法的探讨与分析［J］.中国医学创新，2013，10（3）：91.

［7］温德胜.对比分析不同检验方法对外阴阴道假丝酵母菌病的检验效果［J］.中国医药指南，2013，11（27）：356.