正交试验设计优选升麻炭最佳炮制工艺△

于晓，戴衍朋，周倩,，孙立立*

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014)

·中药工业·

正交试验设计优选升麻炭最佳炮制工艺△

于晓1，戴衍朋2，周倩1,2，孙立立2*

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014)

目的：优选升麻炭最佳炮制工艺。方法：采用正交试验法，以外观性状、异阿魏酸含量为指标，对炒炭药材量、炒制温度和炒制时间进行考察。结果：升麻炭最佳炮制工艺为加样量3 kg，炒制温度400 ℃，炒制10 min。结论：优选得到的升麻炭炮制工艺稳定可行，适合指导升麻炭的生产。

升麻炭；正交试验；炮制工艺

升麻为毛茛科植物大三叶升麻CimicifugaheracleifoliaKom.、兴安升麻Cimicifugadahurica(Turcz.)Maxim.或升麻CimicifugafodetidaL.的干燥根茎。其味辛、微甘，微寒，具有发表透疹，清热解毒，升举阳气之功能。用于风热头痛、齿痛、口疮、咽喉肿痛、麻疹不透、阳毒发斑、脱肛、子宫脱垂等症[1]。升麻炮制规格主要有升麻片、蜜升麻、升麻炭。升麻炒炭后能显著缩短出血时间，有明显的止血作用。

《全国中药炮制规范》1988年版收载升麻炭饮片，将其炮制方法规定为“取升麻片置锅内，用武火加热，炒至表面焦黑色，内部棕褐色，喷淋清水少许，灭尽火星，取出晾干[2]。”但是目前没有具体参数来评定升麻炭饮片质量优劣，笔者通过文献分析认为，可以从外观性状、异阿魏酸含量来综合评价炮制工艺的优劣[3]。本文采用正交试验，以外观性状、异阿魏酸含量为考察指标，对升麻炭炮制工艺的加样量、炒制温度和炒制时间进行优化，为规范升麻炭的炮制工艺提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

2695型高效液相色谱仪、2996 DAD检测器(Waters)；XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；CY340460型中药炮制电热控温炒药机(山东临清药物机械厂)；AR842A红外温度仪(香港希码)。

1.2 试药

升麻饮片为市售饮片，产地为东北，经山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定为大三叶升麻CimicifugaheracleifoliaKom.干燥根茎的加工品。异阿魏酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111698-200602)；乙腈、磷酸(色谱纯，迪马科技)；乙醇为分析纯；水为自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 异阿魏酸含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenon HyperClone C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)；检测波长：316 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1，理论塔板数按异阿魏酸峰计算不低于5000。按此色谱条件进行试验，色谱峰分离条件好[1]。见图1～2。

图1 异阿魏酸对照品HPLC图谱

图2 升麻饮片HPLC图谱

2.1.2 对照品溶液的制备 取异阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加10%乙醇制成质量浓度为0.17 mg·mL-1的溶液，即得[1]。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10%乙醇25 mL，密塞，称定重量，加热回流2.5 h，放冷，再称定重量，用10%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[1]。

2.1.4 线性关系考察 取混合对照品溶液，精确进样1、3、5、8、10 μL，测定各色谱峰的峰面积，以进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行回归分析，得回归方程：Y=2025X-21.84，r=0.999 9，表明在0.17～1.7 μg呈良好线性关系。

2.1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定异阿魏酸的峰面积，结果异阿魏酸峰面积的RSD分别为0.58%，表明精密度良好。

2.1.6 重复性试验 取同一批次的样品5份，按2.1.3项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μL，注入色谱仪，按2.1.1项下色谱条件记录色谱图，测定异阿魏酸的质量分数。结果异阿魏酸平均含量为0.47%，RSD为1.89%，表明试验方法重复性良好。

2.1.7 稳定性试验 分别在0、2、4、8、12 h精密吸取同一供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按2.1.1项下色谱条件记录色谱图，测定峰面积，结果异阿魏酸峰面积的RSD为2.08%，表明异阿魏酸在12 h内稳定性良好。

2.1.8 加样回收率试验 精密称取已测知含量的升麻样品0.25 g，共6份，各分别精密加入异阿魏酸对照品适量，按2.1.3项下方法提取测定，计算回收率，结果异阿魏酸平均回收率为99.13%，RSD为1.75%，表明该方法测定结果准确。

2.2 升麻炭炮制工艺优选

2.2.1 试验设计 笔者通过预试验以及相关文献报道[4]，确定了影响升麻炭质量的主要因素为加热温度、炒制时间和投药量等，以传统质量标准和升麻中主要成分异阿魏酸含量作为正交试验的评价指标，采用L9(34)正交表进行试验。因素水平表见表1。

表1 因素水平表

照试验设计方案，取净升麻饮片，置中药炮制控温炉中，照设定温度和时间进行炮制，取出晾凉，即得。

2.2.2 试验结果及分析 以异阿魏酸的含量作为内在质量评价标准，以外观性状为外在质量评价标准。

饮片传统质量评价是以外观性状为主要指标，可在相当程度上提示饮片质量。根据《全国中药炮制规范》1988年版对升麻炭的性状要求，以表面黑色，内部棕褐色为炮制程度适中，得分为20～30分；表面焦黑色，内部黑色为炮制稍过，表面黑棕色、断面褐色为炮制稍轻，得分为10～20分；表面焦黑色，内部焦黑色为炮制太过，表面深棕色，内部黄棕色为炮制太轻，得分为0～10分，总分为30分[2]。

正交试验用表及试验结果见表2，方差分析结果见表3

表2 升麻炭L9(34)正交试验直观分析表

表3 方差分析

注：F0.05(2，2)=19；*表示差异有统计学意义。

由表3可知，3种评价指标进行评价，加热温度对试验结果均有显著性影响，而炒制时间对异阿魏酸含量具有显著性影响。

综合直观分析和方差分析结果，升麻炭最佳炮制工艺为A2B2C3，即取净升麻片3 kg，倒入已预热的中药炮制电热控温炒药机中，400 ℃，炒制10 min，迅速出锅，放凉，即得。

2.3 验证试验

为确保该炮制工艺的稳定性，按照上述最佳炮制工艺进行3次试验，并测得异阿魏酸平均含量为0.63%，RSD为0.634%。因此，可以说明该炮制工艺稳定、可行。

3 讨论

正交试验选择外观性状和内在质量为考察指标，可避免单纯以内在指标评价质量的片面性，能够更客观地反映各个因素对升麻炭饮片质量的影响。目前，关于升麻炭有效成分的研究较少，升麻炒炭后增加止血作用的物质基础尚不明确。前期研究发现，升麻中异阿魏酸含量随升麻炒制程度的加重呈现先升高后降低的趋势，可以指示升麻炒炭的程度。一般认为有机酸是升麻清热解毒的有效成分，其中的阿魏酸和异阿魏酸等咖啡酸衍生物具有较强的抗炎活性[5-8]，故选择异阿魏酸为内在指标。通过正交试验进行多指标考察，优选得到的最佳炮制工艺具有可行性、稳定性等优点，可用于指导升麻炭的生产，为其合理利用与研究奠定基础。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京，中国医药科技出版社，2010：68.

[2] 中华人民共和国药政管理局.全国中药炮制规范[S].北京：人民卫生出版社，1988：23.

[3] 张慧芳，戴衍朋.正交试验设计优选升麻最佳蜜炙工艺[J].中国医院药学杂志，2014，34(7)：520-523.

[4] 赵婷，刘力，冯双全，等.正交实验法优化侧柏炭炮制工艺研究[J].上海中医药大学学报，2009，23(2)：70-73.

[5] 潘瑞乐，陈迪华，沈连钢，等.高效液相色谱法测定升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量[J].药物分析杂志，2000，20(6)：396-398.

[6] 张涛.HPLC测定升麻中阿魏酸的含量[J].中国药品标准，2002，3(4)：41-42.

[7] 刘颖，张小茜.升麻质量标准的研究[J].中草药，2005，36(9)：1402-1404.

[8] 高璟春，张金超，朱国元，等.升麻族植物药理活性研究进展[J].中草药，2006，37(10)：附3.

Optimization of Processing Technology of Carbonized Cimicifugae Rhizoma by Orthogonal Test Method

YU Xiao1，DAI Yanpeng2，ZHOU Qian1,2，SUN Lili2*

(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China)

Objective：To optimize the processing technology for carbonized Cimicifugae Rhizoma.Methods：The traditional organoleptic feature and the content of isoferulic acid were chosen as indexes.The factors of the weight of materia medica processing temperature and processing time were investigated by orthogonal test.Results：The optimum condition for processing technology of carbonized Cimicifugae Rhizoma was as following：3Kg Cimicifugae Rhizoma was carbonized by stir-frying at 400 ℃ for 10 min.Conclusion：The optimum condition is reasonable，which can be used to guide the production of carbonized Cimicifugae Rhizoma.

carbonized Cimicifugae Rhizoma；orthogonal test；processing technology

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.8.019

2015-03-21)

山东省中医药科技发展计划项目(2011-180)；中医药行业科研专项20种中药饮片炮制技术规范研究(201207004-9)

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孙立立，研究员，研究方向：中药新药与中药炮制原理；Tel：(0531)82949829，Email：89247566@qq.com