伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证模型大鼠阴茎组织形态学的影响*

朱彦刘莹买买提祖农•买苏尔刘凤霞阿地力江•伊明**

毛吾兰•买买提依明3张盼盼2阿卜杜热伊木江•如则2陈胜国2

1. 新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室（乌鲁木齐 830011）;

2. 新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室; 3.新疆医科大学基础医学院生物教研室

伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证模型大鼠阴茎组织形态学的影响*

朱彦刘莹1△买买提祖农•买苏尔1△刘凤霞2阿地力江•伊明2**

毛吾兰•买买提依明3张盼盼2阿卜杜热伊木江•如则2陈胜国2

1. 新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室（乌鲁木齐 830011）;

2. 新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室; 3.新疆医科大学基础医学院生物教研室

目的 研究伊木萨克片对异常黏型阳痿病证大鼠阴茎组织形态学的影响，探寻其对阴茎勃起功能障碍治疗作用的形态学基础。方法 取70只性功能正常雄性SD大鼠，其中10只为正常对照组，余60只为造模组，采用芫荽实+菠菜实+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型，22周后通过APO勃起实验，从证候模型中筛出阳痿病证模型，并将其分为病证模型组、药物干预组，未成阳痿的大鼠则分为证候模型对照组（简称证候模型组）。药物干预3周后，对阴茎组织进行形态学观察。结果 （1）HE染色显示，正常对照组结构清楚完好。证候模型组大鼠阴茎组织有一定水肿的表现，同时伴有间质纤维化样的改变。病证模型组阴茎组织中、重度水肿，间质纤维化明显。病证药物干预组阴茎组织有一定程度的恢复。（2）VG染色结果显示，证候模型组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维低于正常对照组（P＜0.05）。病证模型组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维低于证候模型组（P＞0.05）。病证药物干预组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维高于病证模型组（P＜0.05）。（3）Masson染色结果与VG染色结果相一致。结论 异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织形态学可发生明显改变，维药伊木萨克片有促进其修复的作用。

伊木萨克片; 阳萎; 阴茎组织

勃起功能障碍（Erectile dysfunction，ED），俗称阳痿，是指男子阴茎不举或举而不坚为主要特征的病症，并可伴性欲减低与早泄等症状[1]。根据维吾尔医学体液论，可将阳痿分为异常血液质型阳痿、异常胆液质型阳痿、异常黑胆质型阳痿与异常黏液质型阳痿，其中以异常黏液质型阳痿的发病率最高[2]。维药伊木萨克片源自1874年出版的维吾尔医学典籍《医科思热爱扎穆》[3]，现已作为异常黏液质型阳痿病证的经典对证药物。在前期研究工作中，本课题组以维医理论为指导，采用湿寒环境和湿寒饲料复合干预的方法建立异常黏液质证候大鼠模型，并成功在此基础上筛选出阳痿模型，而伊木萨克片的干预治疗，能明显改善维医异常黏液质型阳痿病证大鼠勃起功能与交配能力[4]。本研究就形态学角度研究维医异常黏液质型阳痿病证大鼠模型阴茎组织的改变及维药伊木萨克片的影响，从而探索该模型大鼠勃起功能改变及该药调节作用的组织病理学基础。

材料与方法

一、实验动物

具有正常性功能的清洁级雄性（SD）大鼠70只（由交配实验和APO勃起实验证实），雌性大鼠20只，体重（200±20）g由新疆医科大学实验动物中心提供。

二、主要仪器与试剂

BIC - 400 型人工气候箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），BS - 1105 型电子天平（北京赛多科斯天平有限公司），DHG - 9245A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。阿朴吗啡（Apomorphine,APO，美国Sigma公司）、黄体酮（浙江仙琚治药股份有限公司，批号：120804）、雌二醇（宁波市三生药业有限公司，批号：B130613）、伊木萨克片(新疆和田维吾尔药业有限责任公司，批号：20130501)。VG染色试剂盒（迈鑫生物 MST - 8001）、Masson病理特殊染色套组（珠海贝索生物技术有限公司）。

三、实验方法

（一）实验动物准备

70只雄性SD大鼠，经交配实验证实具有正常性功能后，从中随机抽取10只为正常对照组，余60只为造模组。实验前适应性饲养1周，大鼠自由饮食水，12/12h昼夜交替饲养，饲养环境温度为（22±2）℃、湿度为（50±5）%，并对大鼠生物学表征进行观察和记录，1周后进入造模阶段。

（二）湿寒性饲料的制备

按每1 kg大鼠常规饲料中加入芫荽实和菠菜实各150 g。饲料由新疆医科大学实验动物中心制备，芫荽实和菠菜实均购自新疆维吾尔自治区维吾尔医院草药房。。

（三）异常黏液质证与阳痿病证大鼠模型的建立与分组[4]

正常对照组于常规方法饲养，温度为（22±2）℃、湿度为（50±5）%，每日给500 g普通饲料，1000 mL水，200 g垫料。造模组放置于人工气候箱中饲养[温度（8±2）℃，湿度（85±5）%]，于10：00～20：00/22：00～10：00分两批交替放入。造模组每组每日给湿寒饲料500 g，水与垫料同上。造模组与正常组均随机饮食水，12/12h人工照明，固定每日20：00～22：00给予饲料、水，更换垫料，并动态观测生物学表征的变化，22周后，通过生物学表征变化确定征候模型建立后，用APO阴茎勃起实验和交配实验从中筛选出阳痿病证模型，将其随机分为病证模型组、病证药物干预组，未成阳痿者为证候模型，从中随机抽出16只设为证候模型组（其余模型用于其它研究）。

（四）药物干预

分组完毕后，将药物干预组于常规条件下饲养，常规饮食，并用对证药物伊木萨克片250 mg/kg灌胃，每天1次，余各组均予以等剂量蒸馏水灌胃，干预3周，并行生物学表征观测、APO阴茎勃起实验和性行为学实验，通过与正常对照组和模型组的比较，确定药物的干预效果。

（五）取材

药物干预3 周后，将所有大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔注射（40 mg/kg）麻醉，在耻骨联合下缘，从根部将阴茎剪断，生理盐水洗去血渍，以滤纸包裹后于10%甲醛溶液中固定。

（六）观察指标与方法

将固定的阴茎组织进行石蜡包埋切片，行常规HE染色。同时，按照VG染色试剂盒及Masson病理特殊染色套组说明书操作，光镜下观察结果，每个样本随机选取10个视野，运用Image J 图像分析软件分析海绵体平滑肌细胞与胶原纤维的比值。

（七）统计

结 果

一、阴茎组织HE染色结果

图1 各组大鼠阴茎组织形态学染色结果

结果如图1所示，正常对照组大鼠阴茎组织中含有大量平滑肌及胶原纤维，血窦丰富，内皮细胞呈扁平状附着血窦内壁表面。核质分界明显，胞核深染，胞浆丰富，无水肿表现。证候模型组大鼠阴茎组织中基质疏松，间质有纤维化改变，部分细胞核染色较浅并伴有空泡样病变，提示出现水肿。病证模型组大鼠阴茎组织基质明显疏松，间质纤维化明显，细胞核着色浅，伴有空泡样改变，核质边界不清，提示水肿明显。病证药物干预组大鼠阴茎组织明显修复，水肿明显减轻，间质纤维化得到改善。

二、阴茎组织VG染色结果

光镜下观察结果如图1所示，VG染色后大鼠阴茎组织胶原纤维染色为红色，平滑肌组织染色为黄色，核为蓝褐色,平滑肌多与胶原纤维交织。正常对照组大鼠阴茎组织中平滑肌与胶原纤维丰富，分布均匀，排列整齐、致密。证候模型组大鼠阴茎组织胶原纤维明显增多，平滑肌明显减少。病证模型组大鼠阴茎组织较证候模型组胶原纤维进一步增多，平滑肌进一步减少。病证药物干预组大鼠阴茎组织较病证模型组胶原纤维明显减少，平滑肌明显增多。

结果如图2，表1所示：与正常对照组相比，证候模型、病证模型组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维比值降低了43.64%、49.09%（P＜0.05）。与证候模型组相比，病证模型组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维比值降低了9.68%（P＞0.05）。与病证模型组相比，病证药物干预组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维比值增加了67.86%（P＜0.05）。

图2 各组大鼠阴茎组织VG染色结果柱状图

表1 大鼠阴茎VG染色平滑肌/胶原纤维结果（±s）

表1 大鼠阴茎VG染色平滑肌/胶原纤维结果（±s）

注: 与正常对照组比较,*: P＜0.05; 与证候模型组比较,△: P＜0.05;与病证模型组比较,#: P＜0.05

样本含量 平滑肌/胶原纤维 变化率 P值正常对照组 10 0.55±0.05证侯模型组 16 0.31±0.04*-43.64 0.000病证模型组 15 0.28±0.03*-49.09 0.000病证药物干预组 14 0.47±0.06*#-14.55 0.000

三、阴茎组织Masson染色结果

光镜下观察如图1所见，Masson染色后阴茎组织胶原纤维染色为蓝色，平滑肌组织染色为红色，核为蓝褐色，平滑肌多与胶原纤维交织。正常对照组大鼠阴茎组织中平滑肌与胶原纤维丰富，分布均匀，排列整齐、致密。证候模型组胶原纤维明显增多，平滑肌明显减少。病证模型组大鼠阴茎组织较证候模型组胶原纤维进一步增多，平滑肌进一步减少。病证药物干预组大鼠阴茎组织较病证模型组胶原纤维明显减少，平滑肌明显增多。

结果如图3，表2所示：与正常对照组相比，证候模型、病证模型组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维比值降低了40.29%、46.42%（P＜0.05）。与证候模型组相比，病证模型组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维比值降低了12.50%（P＞0.05）。与病证模型组相比，病证药物干预组大鼠阴茎组织中平滑肌/胶原纤维比值增加了61.78%（P＜0.05）。

表2 大鼠阴茎Masson染色平滑肌/胶原纤维结果（±s）

表2 大鼠阴茎Masson染色平滑肌/胶原纤维结果（±s）

注: 与正常对照组比较,*: P＜0.05; 与证候模型组比较,△: P＜0.05;与病证模型组比较,#: P＜0.05

样本含量 平滑肌/胶原纤维 变化率 P值正常对照组 10 0.53±0.05证候模型组 16 0.32±0.04*-40.29 0.000病证模型组 15 0.28±0.01*-46.42 0.000病证药物干预组 14 0.44±0.05*#-14.67 0.000

讨 论

流行病学调查中发现，全球现大约1.52亿男性患有ED，估计2025年将有3.22亿男性受到这一疾病的困扰[6,7]。 显然ED已成为当今困扰人类健康的一大难题，目前患者接受最容易也是最为广泛的治疗方法为药物治疗，但其治疗效果尚有不足。

维吾尔医学作为祖国传统医学中不可分割的一部分，有其独立的理论体系，并对阳痿、早泄等男科疾病有其独特治疗优势。维医学体液论认为[5,8,9]人体及其组织均具有 4 种体液质（血液质、胆液质、黏液质、黑胆质）的对立统一关系，机体的体液平衡失调，及产生异常体液是疾病产生的核心因素。在四种不同证型阳痿中，以异常黏液质性最为多见。

异常黏液质型阳痿属全身性疾病，多因常食生寒生湿性食物、居住与工作环境寒湿过盛、缺乏运动、食品与环境污染等原因导致湿寒属性偏盛，肝脏功能改变，产生异常黏液质体液，使机体热能下降，物质代谢活动减慢，代谢产物滞集于器官组织内，进而导致脑的精神力减退，神经反射与传导功能的敏感性降低，神经调节功能紊乱、性欲降低，并产生相关病理性变化，引发阳痿[10,11]。此类人群表现为面色白皙无华，机体松弛，四肢冰凉，腰部冷痛、双膝酸软，尿次多、尿色清，嗜睡，流涎水，舌体大、苔白腻，脉象粗、缓、弱等异常黏液质气质[9]。

在前期工作中，本课题组依据维吾尔医学体液论，以“证候表征模型”为造模理念，以维吾尔医学理论为指导，选择具有湿寒属性的菠菜实和芫荽实[12]，按一定比例与基础大鼠饲料进行配置而制备了不同的湿寒性饲料，在湿寒性环境中饲养，成功建立了异常黏液质证大鼠模型。同时，通过APO勃起实验和交配实验发现，该模型大鼠勃起功能显著减退，交配能力显著减弱。经对证维药伊木萨克片治疗性干预后后，勃起功能和交配能力均得到显著恢复[4]。随后的系列研究[13-15]表明，该病证的发生与性腺轴神经内分泌紊乱有关，而该对证维药的调控机制亦是通过调节性腺轴相关激素来实现的。

阴茎勃起是通过阴茎海绵体平滑肌舒张来实现的，阴茎海绵体平滑肌细胞数量上和形态上的改变，必然会引起阴茎海绵体平滑肌舒张和收缩功能上的改变[16,17]。本研究观察了阳痿病证模型大鼠阴茎组织形态学的变化及对证药物伊木萨克片的干预效果。结果发现，证候模型和病证模型组大鼠阴茎组织发生了明显的形态学损害，尤其在病证模型组大鼠阴茎组织可见基质明显疏松，间质纤维化明显，细胞核着色浅，伴有空泡样改变，核质边界不清，水肿明显，大鼠阴茎组织平滑肌细胞显著减少，胶原纤维显著增多。经过伊木萨克片干预后，病证模型组大鼠阴茎组织明显修复，水肿减轻，间质纤维化得到改善，平滑肌细胞数量明显增多。说明伊木萨克片可能是通过修复阳痿病证模型大鼠阴茎组织海绵体平滑肌细胞促进大鼠勃起能力。该结果为以往研究中该病证的勃起功能的改变与伊木萨克片的调节机制提供了组织病理学基础。

综上所述，阴茎组织的形态学改变在维医异常黏液质型阳痿病证的发生发展过程中起着至关重要的作用，而海绵体平滑肌细胞的修复作用可能是伊木萨克片对其治疗作用的关键机制之一，是该药对异常黏液质型阳痿病证勃起功能治疗作用的组织病理学基础，但其具体机制与作用方式还需要进一步研究。

1 中国医学百科全书编辑委员会.中国医学百科全书维吾尔医学分册. 上海:上海科学技术出版社, 2005: 120-124

2 艾力阿吉•库尔班尼亚孜米琪.维吾尔医治疗阳痿. 新疆人民卫生出版社, 2006: 31-96

3 穆哈穆德爱扎木汗. 医科思热爱扎穆. 乌鲁木齐: 新疆人民卫生出版社, 2006: 1622-1633

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5 热娜古丽•艾则孜, 沙吉旦•阿不都热衣, 金伟, 等. 复杂性疾病维吾尔医分型及其血栓前状态研究. 中国中医药信息杂志 2009; 16(2): 23-25

6 姜辉, 朱积川. 在Asian MALES研究中勃起功能障碍的患病率和相关的健康关注问题. 中华男科学杂志2006; 12(11): 1048-1052

7 Ayta IA, McKinlay JB, Krane RJ. The likely worldwide increase in erectile dysfunction between 1995 and 2025 and some possible policy consequences. BJU Int 1999; 84(1): 50-56

8 阿地力江•阿不力米提, 胡汉华, 艾来提米•吉提, 等. 异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质载体动物模型下丘脑-垂体-肾上腺轴细胞超微结构的影响. 国际病理科学与临床杂志 2007; 27(3): 185-191

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10 艾力阿吉•库尔班尼牙孜米琪. 维吾尔医治疗阳痿. 乌鲁木齐: 新疆人民卫生出版社, 2006: 31-99

11 阿力甫•吐尔地，姑丽斯坦•艾买提. 维吾尔医对男性性功能减退症的食疗. 中国民族医药杂志 2006; 12(4): 72

12 阿不都热依木•卡地尔. 中华本草: 维吾尔药卷. 上海:上海科学技术出版社, 2005: 162-164

13 张盼盼, 刘凤霞, 阿地力江•伊明, 等. 异常黏液质型阳痿病证大鼠性腺轴改变的形态学研究. 中国男科学志2014; 28(7): 8-13

14 张盼盼, 朱颜刘莹, 阿地力江•伊明，等. 伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证大鼠模型性腺轴调节作用的形态学研究. 新疆医科大学学报 2014; 37(8): 966-969, 973

15 阿地力江•伊明, 潘建春, 哈木拉提•吾甫尔, 等. 维医异常黏液质阳痿病证动物模型的建立及其生殖生物学基础研究. 新疆医科大学学报 2012; 35(11): 1439-1444

16 Ferrini MG, Kovanecz I, Sanchez S, et al. Fibrosis and loss of smooth muscle in the corpora cavemosa precede corporal veno - occlusive dysfunction(CVOD)induced by experimental cavernosal nerve damage in the rat. J Sex Med 2009; 6(2): 415-28

17 Yang F, Zhao JF, Shou QY, et al. Phenotypic Modulation of Corpus Cavernosum Smooth Muscle Cells in a Rat Model of Cavernous Neurectomy. PLoS ONE 2014; 9(8): e105186

（2015-04-08收稿）

The effects of Yimusake on penis tissue morphological changes of rat models with abnormal balgam syndrome and impotence disease induced by Uyghur medicine＊

Zhu Yanliuying1△, Maimaitizunong•Maisuer1△, Liu Fengxia2, Adilijiang•Yiming2**,
Maowulan•Maimaitiyiming3, Zhang Panpan2, Abudureyimujiang•Ruze2, Chen Shengguo2
1.Department of Pathophysiology, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China; 2.Department of Human Anatomy, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University; 3.Department of Biology, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University Corresponding author: Adilijiang•Yiming, E-mail: adljym@163.com

Objective To study the effects of Yimusake on penis tissue morphological changes of rat models with abnormal balgam syndrome and impotence disease induced by Uyghur medicine. Methods A total of 70 normal mature male SD rats were enrolled in the study, and 10 of them were randomly chosen as the control group, other 60 were treated with spinach and coriander diet in a cold and humid environment until the model of abnormal balgam syndrome was established. Biological characteristics of rats were observed about 22 weeks until establishment of abnormal balgam syndrome model, then through APO erectile experiment and mating experiment, the rats were randomly divided into abnormal balgam syndrome with impotencedisease model group and medication intervention group of abnormal balgam syndrome with impotence disease model. The non-impotence rats were abnormal balgam syndrome model group. After 3 weeks intervention, the morphological changes of penis tissues were observed. Results (1) HE staining showed that structure of penis tissue exhibits normal in normal control group, edema and interstitial fbrosis in abnormal balgam syndrome model group, signifcant edema and interstitial fbrosis in abnormal balgam syndrome with impotence disease model group, respectivey. Structure of rat penile tissue showed minor repair in medication intervention group. (2) V.G staining results showed that the ratio of smooth muscle/collagen fbers in penis tissue of rats in abnormal balgam syndrome model group was signifcantly lower than that in the normal control group (P＜0.05), and the ratio of smooth muscle/collagen fbers of abnormal balgam syndrome with impotence disease model group was lower than that of abnormal balgam syndrome model group (P＞0.05). The ratio of smooth muscle/collagen fibers of medication intervention group was higher than that of abnormal balgam syndrome with impotence disease model group (P＜0.05), lower than that of the normal control group (P＜0.05). (3) Masson staining results were similar with V.G staining results. Conclusion Signifcant morphological changes of penis tissue were found in abnormal balgam syndrome with impotence disease rat model induced by Uygur medicine, and the damages can be repaired by Yimusake.

Yimusake; impotence; penis tissue

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.06.002

R 698.1

资助: 国家自然科学基金（81160470，81260581）**

, E-mail: adljym@163.com

△为共同第一作者