复方黄芩苷滴鼻凝胶的制备与质量控制

汪风芹，高新富，胡丽敏，孙迎东，刘明华，王玉

(滨州医学院附属医院药学部，滨州 256603)

目前，治疗变应性鼻炎大多采用口服抗组胺药和抗菌药物，局部外用糖皮质激素。但其不良反应明显，长时间应用易造成鼻黏膜萎缩变性。为此，笔者选择具有显著抗炎、抗变态反应作用[1]、并能降低毛细血管通透性的黄芩苷、冷刺激药薄荷脑、低剂量盐酸麻黄碱，以卡波姆-940为凝胶基质，硼砂为pH和黏度调节剂，配制滴鼻凝胶，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津 LC-20AT高效液相色谱仪，Prominence SPD-20A/UV-VIS检测器;Thermo ODS-2 Hypersil色谱柱(250 mm ×4.6 mm);pHS-3C 酸度计(上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂);NDJ-79旋转式黏度计(上海平轩科学仪器厂);CP225D电子天平(德国赛多利斯，d=0.000 01)。

1.2 试药 黄芩苷(诸城市浩天药业有限公司，批号:20120526，含量:90.6%)，盐酸麻黄碱(赤峰艾克制药科技有限公司，批号:20110324，含量:99.4%)，薄荷脑(安徽丰乐香料，批号:20120922，含量:99.3%)，卡波姆-940(南京威尔化工有限公司，批号:20130102)，硼砂(湖南尔康制药有限公司，批号:20121009，含量:101.0%)，乙醇(河北建宁药业有限公司，批号:20121009，含量:95.3%)，甘油(湖南尔康制药有限公司，批号:20121009，含量:99.3%)，5%羟苯乙酯溶液(滨州医学院附属医院制剂室，批号:20120128，含量:5.12%)，黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110715-201117，含量:91.7%)，盐酸麻黄碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号:171241-201007，含量:99.9%)。乙腈为色谱纯，其余为分析纯，含量测定用水为重蒸水。

2 处方与制备

2.1 处方 黄芩苷11.04 g(实际含黄芩苷10 g)，盐酸麻黄碱5 g，薄荷脑1 g，卡波姆-940 0.3 g，硼砂 7 g，乙醇10 mL，甘油15 mL，5%羟苯乙酯溶液10 mL，纯化水加至1 000 mL。

2.2 制备工艺 将处方量卡波姆-940粉末缓慢均匀撒于300 mL纯化水表面，静置过夜，使其自然溶胀，搅拌均匀;取处方量黄芩苷混悬于纯化水200 mL中，加到上液中搅匀，得黄色混悬液;称取硼砂加入适量纯化水加热溶解，放凉分次加到上述黄色混悬液，边加边搅至黄色澄明黏稠胶液为止;再依次加入处方量甘油，盐酸麻黄碱溶液(称取盐酸麻黄碱5 g溶于适量纯化水，充分搅匀，分次加入，边加边搅拌)，薄荷脑乙醇溶液(称取薄荷脑1 g，溶于95%乙醇，充分搅匀分次加入，边加边搅拌)，5%羟苯乙酯溶液(称取羟苯乙酯5 g，溶于适量95%乙醇，加入甘油50 mL搅匀，再加入95%乙醇至100 mL，充分搅匀，精密量取10 mL，分次加入，边加边搅拌)，最后加纯化水至1 000 mL，搅匀即得(批号:20130612，20130723，20130906)。

3 质量控制

3.1 性状 本品为淡黄色透明液状凝胶。

3.2 鉴别

3.2.1 黄芩苷 取本品1 g，加三氯化铁试液2滴，即显污绿色。

3.2.2 盐酸麻黄碱 取本品1 g，加硫酸铜试液2滴与氢氧化钠溶液(1→5)1 mL，即显蓝紫色;加乙醚1 mL，振摇后放置，乙醚层即显紫红色，水层变成蓝色。

3.3 pH测定 按《中华人民共和国药典》2010年版二部pH测定项下方法，取样品5 g，加纯化水25 mL稀释后测定，测得pH为5.5～6.5，符合滴鼻剂要求。

3.4 微生物限度检查 按《中华人民共和国药典》2010年版二部规定检查，符合滴鼻剂项下有关规定。

3.5 黏度测定 取本品照《中华人民共和国药典》2010年版二部附录VI G黏度测定方法，在25℃环境下，采用NDJ-79型旋转式黏度计测得样品的动力黏度，5次平均值为22 Pa·s。

3.6 含量测定

3.6.1 色谱条件 Thermo ODS-2 Hypersil(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相 A 为乙腈，流动相 B 为1.0%磷酸溶液(含0.4%三乙胺)。梯度洗脱程序A:0～3 min，12%;～12min，12%→27%;～23min，27%;～24 min，27%→12%;(A+B=100%)。黄芩苷检测波长为280 nm，盐酸麻黄碱检测波长为210 nm[2]，采用Prominence SPD-20A/UV-VIS检测器同时测定;流速1.0 mL·min－1，柱温30 ℃。

3.6.2 系统适用性实验 分别配制含黄芩苷100 μg·mL－1、盐酸麻黄碱 25 μg·mL－1的对照品溶液，分别取以上对照品溶液和“3.6.9”项供试品溶液及由不含黄芩苷和盐酸麻黄碱的样品制备的阴性对照液注入液相色谱仪，进样10 μL，记录色谱图，盐酸麻黄碱和黄芩苷能很好分离，盐酸麻黄碱理论板数为11 337，黄芩苷理论板数为121 818，结果见图1。

3.6.3 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品21.22 mg、盐酸麻黄碱对照品 5.07 mg，置 200 mL 量瓶，加水使溶解并稀释至刻度，取上述对照品溶液注入液相色谱仪，进样量分别为 4，6，8，10，12，14 μL，以黄芩苷和盐酸麻黄碱进样量(μg)为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)，得回归方程分别为黄芩苷:Y=3 317 320.72X －512.39，r=1.000 0;盐酸麻黄碱:Y=2 159 407.52X －4 107.37，r=1.000 0。结果表明，黄芩苷在进样量0.424 4～1.485 4 μg范围内线性良好，盐酸麻黄碱在进样量0.202 8～0.709 8 μg范围内线性良好。

3.6.4 精密度实验 取“3.6.3”项线性考察项下对照品溶液各连续进样5次，进样量10 μL，记录黄芩苷和盐酸麻黄碱的峰面积，RSD分别为 0.07%和0.09%。

图1 4种溶液的高效液相色谱图

3.6.5 含量测定方法重复性实验 取同批样品5份，按样品“3.6.9”项方法测定含量，结果黄芩苷和盐酸麻黄碱含量RSD分别为1.31%，1.24%，表明此方法重复性良好。

3.6.6 检测限与定量限 取“3.6.3”项线性考察项下对照品溶液，逐级减少进样量，以信噪比为3∶1时，计算检测限;以信噪比为10∶1时，计算定量限。结果表明黄芩苷检测限 0.031 83 μg，定量限 0.095 49 μg，盐酸麻黄碱检测限 0.025 34 μg，定量限 0.050 69 μg。

3.6.7 稳定性实验 取“3.6.9”项样品测定项下供试品溶液，分别于0，3，6，12，24 h 以相同体积进样，结果峰面积基本不变，峰面积RSD=0.97%，说明样品溶液在24 h内稳定。

3.6.8 加样回收实验 精密量取批号为20130723的样品0.5 mL(相当于黄芩苷 5 mg、盐酸麻黄碱2.5 mg)，置100 mL量瓶，分别精密加入黄芩苷对照品约 3，5，7 mg，盐酸麻黄碱对照品 1.5，2.5，3.5 mg，加水稀释至刻度，得浓度约为供试品溶液浓度80%，100%，120%的溶液，每个浓度3 份，按“3.6.9”项样品测定项下方法测定，黄芩苷平均加样回收率为100.4%，RSD=1.56%。盐酸麻黄碱平均加样回收率为101.9%，RSD=1.64%。见表 1，2。

3.6.9 样品的测定 分别精密量取3批样品各1 mL(相当于黄芩苷10 mg、盐酸麻黄碱5 mg)，分别置100 mL量瓶，加水稀释至刻度，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤后作为供试品溶液。取供试品溶液10 μL注入液相色谱仪，按外标法计算黄芩苷和盐酸麻黄碱的含量，结果见表3。

表1 复方黄芩苷滴鼻凝胶中黄芩苷回收率实验结果

表2 复方黄芩苷滴鼻凝胶中盐酸麻黄碱回收率实验结果

3.7 样品稳定性考察 取样品10 g，装入带刻度的离心管中，以 2 500 r·min－1(r=12 cm)离心 30 min，结果凝胶无分层现象;另取样品10 g，均匀装入包装盒内，加盖，分别置于55℃干恒温箱6 h和－15℃冰箱内24 h，恢复室温后凝胶无分层现象;再将样品装入包装盒，加盖，于室温放置3，6，12个月，抽样检查，分别考察其性状、鉴别、含量、微生物限度等各项指标，结果各指标均未见明显变化。

表3 复方黄芩苷滴鼻凝胶中黄芩苷和盐酸麻黄碱的含量mg·mL－1

4 讨论

打喷嚏、流清涕和鼻痒是变应性鼻炎的主要临床症状，也是Ⅰ型变态反应在鼻局部的特征性症状反应，故减少和消除局部症状是改善Ⅰ型变态反应在鼻腔局部的特征性症状的客观依据，也是变态反应性鼻炎的诊断和疗效评定标准的主要内容[3-5]。顾红缨等[6]研究了黄芩苷对Ⅰ型变态反应豚鼠超微结构的影响，电镜结果显示，黄芩苷给药组与未给药致敏组豚鼠超微结构在发生变态反应后有较大的差异;黄芩苷可显著抑制Ⅰ型变态反应豚鼠超微结构改变。本滴鼻凝胶中的薄荷脑可选择性地作用于黏膜的冷感受器产生冷感，由于感受器的反射作用，使局部血管收缩，肿胀减轻，从而使鼻塞鼻痒的不适感得到缓解。

由于黄芩苷在水中的溶解度为160 mg·L－1，在水中极微溶解[7];可溶于碳酸钠、氢氧化钠等碱性溶液中，所以笔者选择0.7%硼砂作为黄芩苷的助溶剂和pH调节剂。

黄芩苷的分子结构具有-COOH基团，其水溶液的稳定性受pH影响较大，在碱性溶液中不稳定，易导致溶液变为暗棕色失效。作者经多次实验证明，复方黄芩苷滴鼻凝胶的pH是影响黄芩苷及制剂稳定性的重要因素。所以将本制剂的pH定为5.5～6.5，此范围制剂的颜色、黏度及含量均佳。

从目前文献报道的滴鼻凝胶剂分析，研究者在设计处方时没有考虑到药物对鼻黏膜正常功能的影响。大多使用的卡波姆浓度较高[8-10]，一般为0.5% ～0.8%，与皮肤用药浓度相当，因此黏稠度高，不适于滴鼻用。在设计制剂处方时没有考虑滴鼻剂的渗透压，大多数滴鼻凝胶的渗透压为高渗，有的高于等渗2倍，而且没有制定制剂的pH。《中国医院制剂规范(西药制剂第二版)》明确规定[11];鼻腔分泌液的正常pH为5.5～6.5，使用与鼻腔分泌液pH不同的药液，可阻碍纤毛的运动，滴鼻剂的正常pH应为4.5～6.5。鼻腔应用的水溶液应为稀溶液，浓溶液容易刺激鼻腔黏膜，等渗溶液或者略高渗的溶液刺激性最轻。本制剂的渗透压约为 1.0，略高于等渗，pH 为 5.5 ～6.5，完全符合上述规定。本制剂采用0.3%卡波-940，其黏度为22 Pa·s，为适宜黏度的流变型液体。比滴鼻液体制剂在鼻腔的滞留时间长，且不易流入鼻咽部，可减少咽喉部的不适，还具有缓慢释药作用，从而提高药物的生物利用度。

[1]吴梅，闫慧，张春梅.黄芩苷作为一种抗生物制剂的过敏反应的研究[J].微生物学免疫学进展，2007，35(4):48－50.

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[3]朱鲁平，王菲，孙小青，等.非变应性鼻炎与变应性鼻炎患者患病相关因素比较[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2010，45(12):993 －998.

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[6]顾红缨，郭焱，罗晶.黄芩甙对Ⅰ型变态反应豚鼠超微结构的影响[J].长春中医学院学报，2002，18(4):40 －41.

[7]王弘，陈济民，张清民.黄芩苷的物化常数测定[J].沈阳药科大学学报，2000，17(2):105 －106.

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[11]中华人民共和国卫生部.中国医院制剂规范·西药制剂(第2版)[M].北京:中国医药科技出版社，1995:162.