不同人群乳头瘤病毒DNA分型的检测及其临床意义

刘　洋，陈柯霖，李翔燕，李　清，李晶华

(1.北京天坛医院皮肤科，北京 100050;2.北京天坛医院检验科，北京 100050;3.北京天坛医院妇产科，北京 100050)

不同人群乳头瘤病毒DNA分型的检测及其临床意义

刘洋1，陈柯霖2，李翔燕1，李清1，李晶华3

(1.北京天坛医院皮肤科，北京 100050;2.北京天坛医院检验科，北京 100050;3.北京天坛医院妇产科，北京 100050)

目的: 分析尖锐湿疣(CA)患者及无症状的高危自检者、正常体检者人乳头瘤病毒(HPV)的DNA分型检测结果及其临床意义。方法: 选择门诊就诊的CA患者527例(CA组)、高危性行为自检者208例(HR组)和正常体检者197名(PE组)，应用凯普导流杂交技术对3组人群样本进行HPV DNA分型检测，分析各组HPV检出阳性率、HPV优势型别分布和HPV亚型多重感染情况。结果: CA组患者HPV检出阳性率为98.29%，HPV感染的优势型别为6、11、33和52型；HR组患者HPV检出阳性率为26.44%，HPV感染的优势型别为6、11、33和66型；PE组人群HPV检出阳性率为5.58%，HPV感染的优势型别为6和11型。HR和PE组HPV检出阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)；CA组患者HPV多重型别混合感染检出阳性率为36.43%,HR组多重型别混合感染检出阳性率为5.77%，二者比较差异有统计学意义(P<0.01)；CA组患者多重型别混合感染以二重感染阳性率最高，为18.41%；三重混合感染率次之，为11.20%；最多重感染为七重型别混合感染，阳性率为0.38%。结论: 3组人群的HPV感染均以低危型6和11型最多见；高危自检者与正常体检者两者在临床上均无症状，但前者HPV检出阳性率明显高于后者；CA组患者HPV混合型别感染阳性率明显高于HR组，且多以二重或三重型别混合感染形式多见。

尖锐湿疣; 人乳头瘤病毒; 基因分型

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)可通过不洁性交经受损的皮肤黏膜感染上皮细胞，其不仅是尖锐湿疣(clyloma acuminate,CA)的病原体，而且已被证实是诱发宫颈癌与生殖器癌的主要因素之一[1]。HPV很难在人工培养基上生长，且血清型繁多。既往一直无方便可靠的检测方法用于临床检测。应用基因芯片分型技术进行HPV基因型别检测，具有非常高的灵敏性和特异性，同一标本可以同时检测多个HPV基因型别的优点，可为临床诊断及治疗提供可靠的客观依据[2]。在近几年的同类研究中，HPV的检测与分型多是针对女性宫颈部位或是CA患者，对于无症状的亚临床感染者和正常人群的研究较少。本研究将CA患者、高危自检者及健康体检者3组人群同时列入研究对象进行HPV DNA分型对照研究,旨在为CA的预防、诊断和治疗提供依据。

1　资料与方法

1.1研究对象 选择2012年6月—2014年6月于北京天坛医院皮肤性病科门诊就诊的CA患者、高危性行为自检者和正常体检者，年龄16～72岁，平均年龄35.5岁。CA组患者527例，其中男性285例，女性242例，所选患者临床上符合CA的诊断标准[3]，排除非CA患者；高危性行为自检者组(HR组)为未见疣体但可疑HPV感染者予以分泌物检测，其中主要包括CA患者的配偶或性伴侣、非CA性病患者(患有淋病、梅毒、衣原体性尿道炎、宫颈炎和生殖器疱疹等患者)、有不洁性行为史的自检者，其中男性109例，女性99例；正常体检者(PE组)为婚前、孕前及定期健康体检者，共197人，其中男性62人，女性135人。以上研究对象检测前均填写HPV分型检测申请单。

1.2标本采集 CA组患者可见疣体，常规消毒，用无菌小镊子摘取0.1～0.5 mm3疣体组织；HR组和PE组受检者无疣体，采样使用专用的HPV采样刷采集男性尿道口及冠状沟，女性采集宫颈及外阴脱落细胞标本。所有采集的标本均立即应用细胞保存液保存，4℃冰箱保存，3 d内检测。

1.3检测方法 采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术检测21种HPV亚型。检测方法严格按照试剂盒说明书进行(试剂由潮州凯普生物化学有限公司提供)。提取样本DNA；PCR扩增；核酸分子快速导流杂交；酶标显色，根据芯片上HPV基因型分布相应着色位点来判断基因型别，如出现多点阳性，即为多重型别混合感染。21种HPV基因型分为高危型、低危型和中国人群常见的中危型3类。高危型HPV包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型13种，低危型HPV包括6、11、42、43、44型5种，中危型HPV包括53、66和cp830型3种。

1.4统计学分析 采用SPSS 16.0统计分析软件进行统计学分析。不同人群HPV 检出阳性率比较采用χ2检验。检验水准α=0.05。

2　结　果

2.13组人群HPV检出阳性率CA组患者HPV检出阳性率为98.29%，HR组HPV检出阳性率为26.44%,PE组HPV检出阳性率为5.58%,CA组和HR组HPV检出阳性率高于EP组(P<0.05)。见表1。

表1　3组人群HPV检出阳性率

*P<0.05 compared with PE group.

2.23组人群HPV亚型感染情况和优势型别对21种常见的HPV基因型分型检测，多重型别混合感染者可重复计数,CA组患者HPV各型别检出阳性率由高至低(取前10位)依次为HPV6型53.32%(281例)、HPV11型38.33%(202例)、HPV33型26.18%(138例)、HPV52型22.01%(116例)、HPV53型16.32%(86例)、HPV66型15.18%(80例)、HPV31型11.00%(58例)、HPV39型8.35%(44例)、HPV16型4.93%(26例)、HPV18型2.66%(14例);HR组HPV型别检出阳性率由高至低(取前10位)依次为HPV6型14.42%(30例)、HPV11型8.17%(17例)、HPV33型4.37%(9例)、HPV66型2.88%(6例)、HPV53型1.44%(3例)、HPV52型0.96%(2例)、HPV39型0.96%(2例)、HPV43型0.96%(2例)、HPV16型0.48%(1例)、HPV18型0.48%(1例);PE组HPV型别检出阳性率为HPV6型3.55%(7例)、HPV11型2.03%(4例)。3组人群HPV优势型别的比较见表2。

2.3HPV亚型多重感染情况527例CA患者中HPV感染阳性518例，其中单一亚型感染为326例，感染率为61.86%；多重亚型混合感染为192例，感染率为36.43%。在单一亚型感染中主要以低危型别为多见。多重亚型混合感染主要以二重、三重感染为主，且以高、低危混合型感染多见，最高可至七重型别混合感染，结果见表3。HR组208例，HPV感染阳性55例，其中单一亚型感染43例，感染率为20.67%；多重亚型混合感染12例，感染率为5.77%，多以中、低危型二重感染为主。CA患者组多重型别混合感染率高于HR组(χ2=69.93，P<0.01)。PE组197名中HPV感染阳性11例，均为单一型别感染，感染型别主要为HPV6和11型。

表23组人群HPV优势型别

Tab.2HPV preponderancy types in population in three groups [n(η/%)]

表3　CA 患者组HPV亚型多重感染情况

“-”：No data.

3　讨　论

HPV是CA的病原体，依据HPV致病能力的不同，将其分为高、中和低危型。高危型HPV主要包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68等型，与宫颈癌和生殖器癌的发生有关；低危型HPV主要包括6、11、42、43和44等型，常引起生殖器湿疣和宫颈上皮低度病变；中危型HPV主要有53、66和cp830型，其危险性介于高危型和低危型之间[4]。国内外此类研究多见于针对妇女感染HPV的研究，在健康妇女人群中，HPV的感染率为10%～46%。俞青松等[5]关于健康和宫颈病变妇女HPV感染情况分析中健康女性HPV感染率为11.35%，有宫颈病变组HPV感染率为26.29% 。本研究中PE组HPV检出阳性率为5.58%，这种结果的差异与选取的样本不同有关。本研究中CA组患者的HPV检出阳性率为98.29%，HR组HPV检出阳性率为26.44%，这一结果与国内唐勇等[6]报道结果接近。HR组与PE组人群在临床表现上均未见疣体，但2组人群的HPV检出阳性率比较差异有统计学意义，说明不洁性行为是CA重要的传染途径之一。但高危人群临床表现未见疣体，无法进行组织活检，早期诊断缺乏客观依据，因此，应用HPV感染分型检测，有助于及早、及时发现CA潜伏期或隐匿感染，这对CA的早期诊断、治疗及阻断传染源有重要的临床意义。

本研究对3组人群采取疣体或分泌物、脱落细胞进行HPV型别检测结果显示：3组人群共有的优势型别是HPV6、11型,这表明HPV6、11型是人类感染HPV的最常见型别，其中HPV6感染的优势更明显，这与国外Potocnik 等[7]及国内周宏等[8]报道结果相一致 。本研究中CA组除HPV6、11型占优势外，HPV33、HPV52所占优势也很明显，而常见的与女性宫颈病变相关性很高的HPV16、18型未在优势型别中，在以往的研究[9-10]中 ，HPV16、18型多为优势亚型，这种结果的差异可能与研究对象的不同及地域的差异有关，因此，HPV型别检测为CA的流行病学提供了客观依据。

本研究结果显示：13种高危型别中CA组以HPV33、52、16、31、39型感染为主，而且其多以与低危型混合感染的形式存在，多重型别混合感染多以二重、三重感染形式多见，其中高-低危型混合二重感染率最高，为12.90%，三重感染率次之，为10.25%；高-高危型二重混合感染率为2.85%，三重混合感染率为0.38%，在CA组中有2例样本出现了HPV型别的七重混合感染。HR组HPV多重混合感染率为5.77%，且多以中-低危型二重混合感染为主。CA组HPV多重型别混合感染率明显高于HR组,因此，本文作者推测：在局部皮肤黏膜受损可见疣体的情况下更有利于多种亚型的HPV的感染，但多重型别混合感染的机制还有待于进一步研究。女性HPV多重型别混合感染与宫颈病变呈正相关关系，单一HPV感染使宫颈癌的患病风险增加19.9倍，而多重型别HPV混合感染使该风险再增加2倍[11-12]。宫颈部位的CA并不少见，醋白实验对其诊断意义不大，所以有必要对患者进行HPV分型检测，尤其对高危型感染者或多重型别混合感染者应要求长期随访,预防宫颈癌的发生。因此，在临床工作中对于久治不愈或频繁复发的高危型CA患者有必要长期进行定期随访观察，以防止HPV相关肿瘤的发生。本研究结果提示：HPV分型检测使预防工作更具有针对性和有效性。

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Detection of human papillomavirus DNA genotypes in different populations and its clinical significance

LIU Yang1, CHEN Kelin2, LI Xiangyan1, LI Qing1, LI Jinghua3

(1.Department of Dermatology, Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050,China;2. Department of Laboratory Medicine,Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050,China;3. Department of Gynaecology and Obstetrics,Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050,China)

ObjectiveTo analyze the detection results and clinical significance of human papillomavirus(HPV) DNA genotypes in the patients with condyloma acuminate(CA) and high risk(HR) population of CA and normal population of physical examination(PE). Methods527 cases of CA patients (CA group), 208 cases of HR (HR group) and 197 cases of normal PE (PE group) in the outpatient were selected. The human HPV DNA genotypes in 932 samples of different population were examined with HybriMax; the positive detection rates, the preponderance types of HPV and the multiple genotype infection in three groups were analyzed. ResultsThe HPV positive rate in CA group was 98.29% and the preponderance types were HPV 6,11,33,and 52 genotypes. The HPV positive rate in HR group was 26.44% and the preponderance types were HPV 6,11,33,and 66 genotypes. The HPV positive rate in PE group was 5.58% and the preponderance types were HPV 6 and 11 genotypes. The difference in the positive detection rates of HPV between HR and PE groups had statistical significance(P<0.05).The positive rates of multiple genotype infection in CA group and HR group were 36.43% and 5.77%, respectively, and there was significant difference (P<0.01);the positive rate of double infection was the highest (18.41%), followed by the positive rate of triple heavy infection (11.20%) and the positive rate of septuple heavy infection (0.38%). ConclusionThe HPV 6 and HPV 11 of low-risk HPV genotypes are the most common genotypes in different population. The HR group and PE group are all asymptomatic but the positive detection rate of HPV in HR group is higher than that in PE group. The positive rate of HPV multiple genotypes infection in CA group is higher than that in HR group, and the double infection or triple heavy infection are the most common infection.

condyloma acuminata; human papillomavirus; genotype

1671-587Ⅹ(2015)06-1211-04

10.13481/j.1671-587x.20150622

2015-06-15

国家自然科学基金资助课题(81101969)

刘洋(1972-)，女，吉林省四平市人，医师，医学硕士，主要从事皮肤病和性病方面的研究。

李晶华，副主任医师(Tel：010-67096610，E-mail：jhlee0927@163.com)

R446.52

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